柠檬酸酒精等的发酵生产六

柠檬酸酒精等的发酵生产六第1页，共51页，2023年，2月20日，星期五二柠檬酸发酵生产第2页，共51页，2023年，2月20日，星期五柠檬酸酸味纯正，是食品、饮料的优良酸味剂，第一食用酸味剂。工业上应用很广泛，是合成多种工业品的原料。发酵法生产柠檬酸，总产量世界第一，大量出口。第3页，共51页，2023年，2月20日，星期五一、柠檬酸发酵生产机制（一）柠檬酸合成途径柠檬酸是生物体主要代谢产物之一。

柠檬酸合成途径：丙乙酰COA葡萄糖酮→柠檬酸酸草酰乙酸氧化脱羧羧化EMP第4页，共51页，2023年，2月20日，星期五柠檬酸的累积黑曲霉中柠檬酸合成酶没有调节作用黑曲霉中α-酮戊二酸脱氢酶缺失或活力弱黑曲霉中顺乌头酸水合酶在催化时建立以下平衡：柠檬酸：顺乌头酸：异柠檬酸=90:3:7控制Fe2+含量，顺乌头酸水合酶活力低，当柠檬酸累积PH=2时，顺乌头酸酶和异柠檬酸脱氢酶失活，造成柠檬酸大量累积第5页，共51页，2023年，2月20日，星期五除去铁为主的金属离子以糖蜜为原料时，用阳离子交换树脂、金属螯合剂（EDTA）除去铁为主的金属离子，或加黄血盐控制糖蜜中的铁离子以淀粉（玉米、薯干）为原料，先用α-淀粉酶和糖化酶将淀粉水解成糖液，再除铁离子第6页，共51页，2023年，2月20日，星期五（二）柠檬酸发酵生产工艺

1、菌种：黑曲霉。2、种子培养：麦芽汁琼脂斜面，35±1℃，培育5天；三角瓶，35±1℃，培育10天；转种子罐。第7页，共51页，2023年，2月20日，星期五（二）柠檬酸发酵生产工艺3、种子罐培养：培养基：薯干粉碎、液化后的糖液；空消：种子罐、分过滤器，130℃，30分；实消：列管加热至80℃，直接进蒸汽至125℃，

15-20分；接种：冷却至35±1℃，接麸曲种1‰；培养：35±1℃，罐压：0.1Mpa，通风搅拌培养时间20-30小时。第8页，共51页，2023年，2月20日，星期五（二）柠檬酸发酵生产工艺4、发酵：机械搅拌通气式发酵罐培养基：薯干淀粉水解糖；空消：发酵罐、分过滤器，130℃，30分；实消：列管加热至80℃，直接进蒸汽至125℃，

15-20分；接种：冷却至35±1℃，接种子罐菌种10％；培养：温度：35±1℃，罐压：0.1Mpa，通风搅拌培养，时间：50-60小时。第9页，共51页，2023年，2月20日，星期五三、柠檬酸提取生产工艺（钙盐法）1、发酵液过滤：带式过滤机2、中和：滤液中除含柠檬酸外，还含可溶性的残糖以及蛋白质、金属离子等杂质。利用柠檬酸钙难溶于水的特点，与杂质分离的过程。3、酸解：

中和所得钙盐经过滤、洗涤，与硫酸反应生成柠檬酸和硫酸钙沉淀，过滤，滤液含较纯的柠檬酸。第10页，共51页，2023年，2月20日，星期五四、柠檬酸精制生产工艺

1、离子交换：阳离子交换：主要除钙离子、铁离子；阴离子交换：主要除硫酸根、氯离子；2、蒸发浓缩：外循环减压蒸发，﹤65℃；3、结晶分离：高温连续或分批冷却结晶；4、干燥包装：离心、沸腾干燥、质检、装袋、封口。第11页，共51页，2023年，2月20日，星期五三、酒精发酵生产（AlcoholFermentation）12第12页，共51页，2023年，2月20日，星期五酒精制造过程原料(淀粉、纤维素)单糖发酵产物酒精水解发酵蒸馏…Yeast(Saccharomycescerevisae)酸解酶解13第13页，共51页，2023年，2月20日，星期五一、酒精生产原料

1.淀粉质原料(1)薯类原料：甘薯、木薯和马铃薯等(2)谷物原料：玉米、高梁、大米和小麦等

2.糖类原料糖蜜、甘蔗、甜菜等3.纤维质原料农作物秸秆、甘蔗渣

我国发酵酒精的80%是用淀粉质原料生产的，其中薯类原料约占45%，玉米等谷物为原料约占35%。

14第14页，共51页，2023年，2月20日，星期五15第15页，共51页，2023年，2月20日，星期五二、酒精发酵微生物

1.糖化菌（将淀粉、纤维素转化为糖）曲霉（Aspergillusspp.）根霉（Rhizopusspp.）2.酒母（将糖转化为乙醇）啤酒酵母（Saccharomycescerevisiae）

及其变种16第16页，共51页，2023年，2月20日，星期五三、酒精发酵生化机制

第一型发酵：无氧、中性或偏酸性条件

CH3COCOOHCH3CHO+CO2CH3CHO+NADH2CH3CH2OH+NAD第三型发酵：无氧、碱性条件乙醛发生岐化反应，磷酸二羟丙酮作为受氢体，产物为甘油、乙醇、乙酸。脱羧酶乙醇脱氢酶第17页，共51页，2023年，2月20日，星期五

C6H12O62CH3COCOOH2CH3CHO2CH3CH2OHNADNADH2-2CO2EMP2ATP乙醇脱氢酶酒精发酵：产物：乙醇、CO2发生条件：无氧条件途径：EMP菌种：酵母菌该乙醇发酵过程在pH3.5~4.5及厌氧的条件下发生。（无氧）脱羧酶第一型发酵（还原）第18页，共51页，2023年，2月20日，星期五四、原料不同工艺不同不同生产原料，酒精发酵生化过程不同。对糖质原料，可直接利用酵母将糖转化成乙醇。对于淀粉质和纤维质原料，首先要进行淀粉和纤维质的水解（糖化），再由酒精发酵菌将糖发酵成乙醇。第19页，共51页，2023年，2月20日，星期五20第20页，共51页，2023年，2月20日，星期五1.淀粉质和纤维质原料的水解淀粉的糊化、液化淀粉在水中经加热会吸收一部分水而发生溶胀。如果继续加热至一定温度（一般60～80℃）,淀粉粒即发生破裂,造成黏度迅速增大,体积也随之迅速变大,这种现象称为淀粉的糊化第21页，共51页，2023年，2月20日，星期五1.淀粉质和纤维质原料的水解

不同种类淀粉糊化温度有所不同,苷薯、马铃薯、玉米和小麦淀粉的糊化温度分别为70～76℃、59～67℃、64～72℃和65～68℃。发生糊化现象称为淀粉的溶解，或称为液化。马铃薯、小麦和玉米支链淀粉完全液化的温度为132℃、70～80℃、136～141℃和146～151℃。第22页，共51页，2023年，2月20日，星期五纤维质原料的水解强酸、强碱水解

酶水解：采用纤维素酶里斯木霉、绿色木霉由于纤维素的性能稳定,无论用酸水解还是用酶水解，都存在水解速度慢,糖得率低的问题，这是影响纤维素科学利用的难题之一第23页，共51页，2023年，2月20日，星期五纤维素生产酒精工艺24第24页，共51页，2023年，2月20日，星期五五、酒精发酵工艺

淀粉质原料酒精生产的特点以薯类和谷类等为原料原料需要蒸煮淀粉质原料需要进行糖化25第25页，共51页，2023年，2月20日，星期五

淀粉质原料酒精生产工艺流程

大米曲霉菌麸皮淀粉质原料酵母↓↓米曲霉→米曲固体试管酵母↓↓米曲汁米曲汁→试管培养→三角瓶培养粉碎三角瓶液体酵母↓↓↓曲种蒸煮卡式罐酒母↓↓↓糖化曲液糖化→酒母糖化醪→小酒母↓↓发酵大酒母↓蒸馏↓

酒糟废液酒精杂醇油26第26页，共51页，2023年，2月20日，星期五淀粉颗粒→淀粉分子→可发酵性糖→酒精→95％乙醇(C6H10O5)n+nH2O→nC6H12O6→2nC2H6O+2nCO2+2nATP主要步骤：1.原料粉碎2.蒸煮糊化3.曲霉糖化4.酵母发酵5.蒸馏提纯27第27页，共51页，2023年，2月20日，星期五原料预处理（1）除杂——筛选、风选、磁力除铁原料先要通过振荡筛、吸铁器等将其中的混杂的小铁钉、泥块、杂草、

石块等杂质除去。

（2）粉碎——干法、湿法粉碎的目的是有利于淀粉颗粒的吸水膨胀、糊化,设备大多采用锤式粉碎机,采用粗碎和细碎两级粉碎工艺，经细粉碎后颗粒一般小于2.0mm。湿粉碎时,将蒸煮所需水量和原料一起粉碎,原料粉末不飞扬,省去除尘通风设备,但粉碎后的粉料不能储存,宜立即用于生产。28第28页，共51页，2023年，2月20日，星期五2.蒸煮作用：打破植物细胞壁的保护作用，使淀粉颗粒从细胞中游离出来，并转化为溶解状态，便于糖化；对原料灭菌。方法：连续蒸煮

29第29页，共51页，2023年，2月20日，星期五粉碎机分离器风机拌料罐泵蒸煮罐1蒸煮罐2蒸煮罐3汽液分离器原料二次蒸汽糖化蒸汽粉尘水洗第30页，共51页，2023年，2月20日，星期五3.糖化曲的制备（1）菌种木霉（Trichodermaspp.）、曲霉（Aspergillusspp.）

根霉（Rhizopusspp.）、芽孢杆菌（Bacillusspp.）（2）方法

固体曲液体曲31第31页，共51页，2023年，2月20日，星期五4.糖化糖化方法分成间歇糖化和连续糖化两类。目前我国大多数酒精厂采用后者。(1)间歇糖化工艺

间歇糖化在糖化锅内进行。蒸煮醪放入并冷却到61～62℃时，加入糖化剂，搅拌均匀后静止糖化30min，再冷却至30℃后供发酵用。

第32页，共51页，2023年，2月20日，星期五4.糖化(2)连续糖化工艺

第33页，共51页，2023年，2月20日，星期五5.酒母制备第34页，共51页，2023年，2月20日，星期五菌种储存酵母菌分离接种扩大培养35第35页，共51页，2023年，2月20日，星期五

菌种培养卡氏罐接种36第36页，共51页，2023年，2月20日，星期五6.发酵工艺（1）方式：间歇式、半连续式、连续式。（2）过程：前发酵期——酒母迅速繁殖，10h主发酵期——乙醇发酵，12h后发酵期——发酵作用弱，40h

总时间：60~72h37第37页，共51页，2023年，2月20日，星期五38第38页，共51页，2023年，2月20日，星期五7.蒸馏与精馏（1）蒸馏塔（粗馏塔、醪塔）→粗酒精、酒糟（2）精馏塔→成品酒精、杂醇油

头级杂质：乙醛、甲醇等（工业酒精）中间级杂质：异丁酸乙酯、异戊酸乙酯等尾级杂质：杂醇油39第39页，共51页，2023年，2月20日，星期五六、固定化细胞生产酒精使用固定化酵母，可以以一个反应塔代替多个发酵罐，发酵时间由30h——3h,乙醇生产能力大大提高40第40页，共51页，2023年，2月20日，星期五五、抗生素的发酵生产41第41页，共51页，2023年，2月20日，星期五

抗生素是微生物产生的具有生物活性的物质，这类物质能在低浓度下抑制或杀灭活细胞，这种作用又有很强的选择性。

抗生素是人们使用最多的药物，也是制药工业中利润最高的产品。世界各国由发酵法生产的抗生素约400种，广泛应用的仅120种，其他主要是毒性大、成本高，无商业应用价值。青霉素是最早发现并用于临床的—种抗生素，1928年为英国人A.Fleming发现，40年代投入工业生产。我们就以青霉素为例简单介绍抗生素的发酵生产过程。一抗生素的生产方法第42页，共51页，2023年，2月20日，星期五生产方法：

1、生物合成法：

①传统方法②“工程菌”制造法③细胞融合技术法

2、化学合成法；

3、生物合成加化学合成法。

第43页，共51页，2023年，2月20日，星期五

1、生物合成法：

①传统方法

大多数抗生素是由放线菌和霉菌产生的。一般采用深层液体培养、通风搅拌发酵罐生产。

最初由弗莱明分离的点青霉，只能产生2U／ml的青霉素。人们采用基因工程和细胞融合技术，对抗生素产生菌进行了改造和重新设计，不仅可以制造出许多高效低毒的新型抗生素，还可使抗生素产量成倍地增长。青霉素工业发酵生产水平已达85000U／ml以上。

第44页，共51页，2023年，2月20日，星期五1、生物合成法：②“工程菌”制造法

第一次由“工程菌”制造的全新抗生素—麦迪紫红素A，是美国报道的。他们将产放线紫红素的部分基因插入产麦迪霉素的放线菌中，构建的“工程菌”产生了全新的抗生素。我国新构建的生产丁胺卡那霉素的“工程菌”，就是把酰化酶基因克隆到卡那霉素产生菌中获得的。新的“工程菌”生产的新抗生素毒副作用小，对耐卡那霉素、庆大霉素致病菌临床疗效显著。第45页，共51页，2023年，2月20日，星期五1、生物合成法：③细胞融合技术

对抗生素产生菌采用细胞融合技术的成果更为突出。目前DNA重组技术已广泛用于红霉素、链霉素等20多种抗生素的育种工作，可以预见不久将来会有更多的由“工程菌”生产的新型抗生素问世。第46页，共51页，2023年，2月20日，星期五2、化学合成法

根据某种抗生素的化学组成和结构，通过化学合成的方法，可生产部分抗生素。如：氯霉素、磷霉素等。经过化学合成方法和控制条件的不断深入研究，越来越多的