无菌药品检查要点

无菌药品检查要点第1页，共102页，2023年，2月20日，星期五无菌药品的概念及分类无菌药品的概念无菌药品是要求没有活体微生物存在的药品，也就是法定药品标准中有无菌检查项目的药品。为了达到产品中没有活体微生物，在生产过程中，需要采取各种方法来去除制品中原有的微生物和防止制品受到微生物的污染。第2页，共102页，2023年，2月20日，星期五无菌药品的概念及分类无菌药品的分类最终灭菌的无菌药品 耐热的产品，能通过热处理的方式来去除制品中可能存在的微生物，通常采用湿热灭菌法。如，大容量注射剂、小容量注射剂非最终灭菌的无菌药品 在工艺过程中，完成内包装后没有一个单独的灭菌过程，其无菌性主要依赖整个过程中保持对各个工序的无菌控制，避免生产过程中的微生物污染。 如，粉针剂、冻干粉针剂、部分小容量注射剂、滴眼剂、无菌原料药等第3页，共102页，2023年，2月20日，星期五无菌药品的概念及分类无菌药品的生产方法的选择

首选最终灭菌以保证产品的无菌特性；当灭菌可能会造成副产物等问题时，尽可能从工艺上创造条件，使灭菌成为可行；由于热不稳定性，应使用一种替代方法：除菌过滤和/无菌生产。 非最终灭菌无菌药品的基本特征低安全高成本第4页，共102页，2023年，2月20日，星期五灭菌工艺的选择

产品能否121℃湿热灭菌15分钟

产品能否湿热灭菌F0≥8分钟，达到SAL≤10－6产品药液能否除菌过滤无菌原料、无菌配制、无菌灌封选用湿热灭菌121℃15分钟药液除菌过滤和无菌灌封否

是

否

是

否是

使用湿热灭菌F0≥8分钟第5页，共102页，2023年，2月20日，星期五从“欣弗”事件谈无菌生产工艺选择克林霉素磷酸酯产品介绍是国外20世纪70年代的专利产品，剂型为非最终灭菌的小容量注射剂。我国在1994年首先批准了华北制药的原料药和小容量注射剂的仿制。该产品主要用于革兰氏阳性菌和厌氧菌的感染，临床疗效好，注射不疼痛，不用做皮试。在本世纪初因便于临床推广，受到很多厂家重视，纷纷通过改变剂型、取得《新药证书》，大量推向市场。第6页，共102页，2023年，2月20日，星期五欣弗事件的发生2006年7月安徽华源克林霉素磷酸酯葡萄糖注射液不良事件报告81例，涉及10个省份从“欣弗”事件谈无菌生产工艺选择第7页，共102页，2023年，2月20日，星期五克林霉素磷酸酯注射剂产品的调查克林霉素磷酸酯氯化钠注射（100ml:0.6g）采用半无菌工艺生产灭菌条件 100℃、7分钟贮存条件 阴凉有效期 1年有些企业的处方中含有苯甲醇稳定性考察 有一批留样的有关物质为7.9％有关物质 总杂不得过8.0％ 单杂不得过5.0％第8页，共102页，2023年，2月20日，星期五克林霉素磷酸酯注射剂产品的调查克林霉素磷酸酯注射液（2ml:0.3g）灭菌条件 100℃、3～10分钟贮存条件 遮光、密闭保存有效期 2年处方中含有苯甲醇有关物质 总杂不得过6.0％（2004年底改为8.0％） 单杂不得过4.0％第9页，共102页，2023年，2月20日，星期五克林霉素磷酸酯注射剂产品的调查注射用克林霉素磷酸酯（0.3g或0.6g）冻干粉针贮存条件 遮光、密闭，在阴凉处保存有效期 2年有的处方中含有苯甲醇有关物质 总杂不得过4.0％ 单杂不得过2.5％第10页，共102页，2023年，2月20日，星期五克林霉素磷酸酯注射剂产品

质量标准中有关物质项比较有关物质LVP（100ml）SVP(2ml)粉针剂原料药总杂≤8.0%≤8.0%≤4.0%≤4.0%单杂≤5.0%≤4.0%≤2.5%≤2.5%第11页，共102页，2023年，2月20日，星期五克林霉素磷酸酯水溶液

热稳定性研究江苏省的一家药厂经试验发现，克林霉素磷酸酯水溶液加热到60℃，含量下降86%因无法采用灭菌工艺生产，该企业最终申报了克林霉素磷酸酯的冻干粉针剂第12页，共102页，2023年，2月20日，星期五从上述调查

看国内灭菌注射剂生产的缺陷对灭菌的认识不正确产品研发未考虑灭菌工艺的可行性忽视工艺的可行性，盲目跟风报批注射剂用原料药的杂质控制不严忽视产品的安全性第13页，共102页，2023年，2月20日，星期五无菌药品生产中的污染来源人员人是无菌药品生产中的主要污染源，在管理比较到位，生产设备自动化程度较好，操作人员素质较高的企业，人员操作所致的污染率超过70%水源性微生物绝大多数为革兰氏阴性菌，不会形成芽孢，不耐热。其代谢产物及细胞的尸体及碎片均属细胞内毒素的污染源空气中的微生物基本为革兰氏阳性菌，有可能会形成芽孢使其耐热性增大第14页，共102页，2023年，2月20日，星期五注射剂的特点药效迅速、作用可靠可用于不宜口服给药的患者可用于不宜口服的药物发挥局部定位作用注射给药不方便且注射时疼痛

直接入血制剂，质量要求比其他剂型更严格，使用不当更易发生危险制造过程复杂，生产费用较大，价格较高第15页，共102页，2023年，2月20日，星期五注射剂的一般质量要求无菌

成品中不得含有任何活的微生物无热原

特别是供静脉及脊椎注射的制剂澄明度

不得有肉眼可见的浑浊或异物安全性

不能引起对组织的刺激性或发生毒性反应，特别是一些非水溶剂及一些附加剂，必须经过必要的动物实验，以确保安全第16页，共102页，2023年，2月20日，星期五注射剂的一般质量要求渗透压

与血浆的渗透压相等或接近pH

要求与血液相等或接近（血液pH7.4）必要的物理和化学稳定性，以确保产品在储存期内安全有效降压物质

有些注射液，如复方氨基酸注射液，其降压物质必须符合规定，确保安全第17页，共102页，2023年，2月20日，星期五无菌药品生产的特殊要求关键区域和关键表面：关键区域指无菌产品或容器/密封件所暴露的环境区域；关键表面是与无菌产品或容器/密封件相接触的表面。生产环境：通常应在100级洁净区或万级背景下的局部100级洁净区。操作人员：根据工艺规定的环境要求，穿着洁净工作服或无菌工作服第18页，共102页，2023年，2月20日，星期五无菌工作服式样及穿戴方式第19页，共102页，2023年，2月20日，星期五无菌药品生产的特殊要求原料及内包装材料：进入无菌区前，应根据材料的性质对其采取除菌、灭菌和去热原处理。惰性气体、压缩空气等介质：直接接触药品的均应经除菌过滤达到无菌状态。生产设备与工器具：应能有效地进行在线或离线的清洗和灭菌。第20页，共102页，2023年，2月20日，星期五无菌药品生产的特殊要求清洁工具：无菌药品生产环境中的各种表面清洁中使用的器具工具，应能够根据工艺要求有效地清洁灭菌或消毒处理。消毒剂：应有相应的除菌或其他处理措施。如：无菌室内使用的75%酒精应经除菌过滤后使用。第21页，共102页，2023年，2月20日，星期五厂房的检查要点第22页，共102页，2023年，2月20日，星期五无菌药品厂房检查的基本内容无菌药品生产厂房与设施是实施药品GMP、保证无菌药品质量的先决条件，其布局、设计和建造应有利于避免交叉污染、便于清洁及日常维护结合具体生产工艺，分清无菌操作区域与洁净区域的联系与区别不同洁净级别区应设相应的洁具间，清洁用具不得跨区使用第23页，共102页，2023年，2月20日，星期五厂房设计、建造的原则无菌生产设计就是为了减少在生产中对暴露的物料的潜在污染人、物流一定要合理，以减少不必要的活动对暴露产品、容器、包装材料和环境所造成的潜在污染。设备的设计安装安排应合理，使得操作简单易行。无菌室的人员数量应最少，人流的设计应能够减少人员在无菌室的穿越。设备的设计应尽能减少人员数量以及人员操作时的活动量对环境的污染第24页，共102页，2023年，2月20日，星期五厂房设计、建造的原则产品应在合理的洁净区条件下进行运输无菌生产中各个相互联系的房间要维护好各个房间的独立性，减少动态条件下的相互干扰工艺设备和系统要装配有清洁用配件和阀门在100级无菌生产区域内设置地漏是不合适的第25页，共102页，2023年，2月20日，星期五关键区域与关键表面的要求洁净区的建筑材料应易于清洗和消毒，房间内表面应无裂缝，墙与地面的连接处应采用圆弧角。地面、墙壁、顶棚材质应坚硬、光滑、易于清洗。顶棚与HEPA过滤器边框之间的缝隙应能够保证严密，满足无菌条件，防止污染不应该存放不必要的物料和设备设备的水平面以及支架上应不易积聚灰尘，在关键区域内的设备不应影响气流的方向，应能确保气流的单向流

第26页，共102页，2023年，2月20日，星期五洁净度级别比较WHO（GMP）美国（209E）美国（习惯分类）ISO/TC（209）EEC（GMP）AM3.5100ISO5ABM3.5100ISO5BCM4.510000ISO7CDM6.5100000ISO8D第27页，共102页，2023年，2月20日，星期五WHOGMP2002标准

级别静态动态最大允许粒子数/立方米最大允许粒子数/立方米0.5-5.0μm>5.0μm0.5-5.0μm>5.0μmA3500035000B350003500002000C3500002000350000020000D350000020000不作规定不作规定注：新标准分为动态及静态，差一个级别；A级没有要求连续微粒测试引自WHO技术报告902，2002第28页，共102页，2023年，2月20日，星期五WHOGMP2002微生物指标级别空气样CFU/m3沉降碟(90mm)CFU/4小时接触碟(55mm)CFU/碟5指手套CFU/手套A＜3＜3＜3＜3B10555C1005025－D20010050－注：沉降碟的暴露时间，一般4小时，我国为0.5小时

引自WHO技术报告902，2002第29页，共102页，2023年，2月20日，星期五FDA对洁净区划分的标准－2004洁净区级别(0.5μm尘粒数/立方英尺)ISO名称0.5μm尘粒数/立方米浮游菌纠偏限度(cfu/m3)沉降菌纠偏限度

(φ90mm;cfu/4h)10053,520111000635,2007310,0007352,000105100,00083,520,00010050所有级别均依据生产活动时在邻近暴露物料/物品处测试的数据浮游菌、沉降菌纠偏限度表示建议的环境质量水平。企业也可根据作业或分析方法的类型确定微生物纠偏措施标准引自GuidanceforIndustrySterileDrugProductsProducedbyAsepticProcessing—CurrentGoodManufacturingPractice,FDA第30页，共102页，2023年，2月20日，星期五中国GMP（1998修订）洁净级别尘粒数/立方米微生物最大允许数≥0.5μm≥5μm浮游菌CFU/立方米沉降菌CFU/皿(Ф90mm半小时)10035000511000035000020001003100000350000020000500103000001050000060000100015我国百级标准采用了国际标准中B级（乱流百级）的限度标准标准没有阐明对气流组织的要求第31页，共102页，2023年，2月20日，星期五关键操作区空气流向控制要求比较洁净度级别WHO美国欧盟中国A100A100空气流向单向流单向流单向流无要求风速0.45m/s±20%0.45m/s±20%产粉尘的操作区风速应更高0.36-0.54m/s无要求第32页，共102页，2023年，2月20日，星期五洁净区压差控制要求比较WHO美国欧盟中国不同级别相邻房间的压差10-15Pa10-15Pa10-15Pa

>5Pa其它压差洁净区过滤空气的送风应能确保在任何运行状态下对周围低级别区保持正压及气流方向，并有足够的自净能力无菌操作间对相邻非洁净区操作间应始终保持正压（如至少12.5Pa）洁净区过滤空气的送风应能确保在任何运行状态下对周围低级别区保持正压及气流方向，并有足够的自净能力洁净区与室外大气的静压差>10Pa第33页，共102页，2023年，2月20日，星期五洁净区环境监控要求比较WHO美国欧盟中国关键操作区的尘粒为控制各级别的洁净区操作时的尘粒数，应对尘粒进行监测每一生产班次应定期进行监控；粒子计数探头的安放位置应能取到有代表性的样品

应对A级区的空气粒子进行连续测定，并建议对B级区也连续进行测定

洁净室(区)内空气的微生物数和尘粒数应定期监测，监测结果应记录存档。洁净室(区)在静态条件下检测的尘埃粒子数、浮游菌数或沉降菌数必须符合规定，应定期监控动态条件下的洁净状况。关键操作区的微生物无菌操作时，应频繁对微生物进行动态监测；关键操作结束后，应对表面和人员的微生物进行监测；应制定微生物监控的警戒和纠偏标准，以监控空气质量的趋势关键区出现微生物污染时，要进行必要的调查无菌操作时，应频繁对微生物进行动态监测；除在生产过程中需进行微生物监控外，系统验证、清洁和消毒等操作后，也应进行微生物监控；应对尘粒和微生物监控制定适当的警戒和纠偏标准关键操作区的压差应设送风故障报警系统；压差十分重要的毗邻级别区之间应安装压差表并定期记录压差每一班操作过程中，房间的压差应连续监控并经常记录。所有报警应有记录，超过设定限度的各种偏差应进行调查。可列入批记录中应设送风故障报警系统；压差十分重要的毗邻级别区之间应安装压差表；压差数据应定期记录或者归入有关文档中无要求第34页，共102页，2023年，2月20日，星期五洁净生产区域的卫生设施无菌操作区内不应设置清洗间和带水池的洁具间。清洁用具应定期清洗或消毒无菌操作百级区不得设置地漏，无菌操作万级区应避免设置水池和地漏。第35页，共102页，2023年，2月20日，星期五洁净厂房卫生要求无菌洁净室的送、回风过滤器的框架不得采用脱屑、产尘、长菌的材质。无菌操作区不得设置可开启式窗户。无菌检查室应按无菌操作区管理，应在万级环境下的局部百级超净工作台上进行，不得与生物检定、微生物限度检查、污染菌鉴别和阳性对照试验使用同一实验室。第36页，共102页，2023年，2月20日，星期五工艺用辅助用房的要求无菌原料药内包装材料的最终处理环境应为万级非最终灭菌的无菌原料药内包装材料的最终处理后的暴露环境应为百级或无菌万级背景下的局部百级。无菌操作区墙面与地面之间宜成弧形，便于清洁。万级无菌操作间不应设清洁间和清洁用具间第37页，共102页，2023年，2月20日，星期五最终灭菌药品厂房检查要点

物料处理应在万级洁净度条件下进行，目的是使微生物和尘埃微粒数较低。配料可在10万级洁净度条件下进行，前提条件是在工艺过程的其他步骤中有降低污染可能的手段。灌装可在1万级洁净度条件下进行。第38页，共102页，2023年，2月20日，星期五非最终灭菌药品厂房检查要点严格体现出未经消毒灭菌处理的物料不可能进入无菌室内经过消毒灭菌处理后的物料应直接出现在无菌操作区域内，不应该再经过非无菌操作区而受到再污染第39页，共102页，2023年，2月20日，星期五设备的检查要点第40页，共102页，2023年，2月20日，星期五工艺设备的基本要求无菌药品工艺设备与药品直接接触部分的材质，表面应光洁、平整、易清洗或消毒、耐腐蚀、不应脱屑、生锈、发霉、长虫，不与药品发生化学变化，不得吸附和污染药品，耐于热灭菌、湿热灭菌或化学灭菌压缩空气、氮气或真空设备应配备不得释放纤维物质的过滤器或除尘器设备、容器和工艺管道应有恰当的清洗、灭菌方法，不能移动的设备应有在线清洗和灭菌的设施第41页，共102页，2023年，2月20日，星期五工艺设备的基本要求安装位置应便于设备生产操作、清洗、消毒、灭菌、维护、保养，需要清洗和灭菌的零部件应易于拆装；塑料容器和胶塞在处理和贮存过程中应控制可能产生的热源污染，因此应作去热源处理。尽可能缩短清洗塑料容器和胶塞到灭菌之间的时间间隔。第42页，共102页，2023年，2月20日，星期五设备的检查要点适用于产品的生产、清洁、消毒或灭菌尽可能采用密闭系统合理布置和安装关键参数控制和记录仪表的校准设备的确认、维护和维修设备的清洁、消毒或灭菌共用设备应有防止交叉污染的措施第43页，共102页，2023年，2月20日，星期五密闭系统示例第44页，共102页，2023年，2月20日，星期五工艺用水的检查要点水处理设施及其分配系统的设计、安装和维护应能确保供水达到适当的质量标准。水系统的运行不应超越其设计能力。注射用水的生产、贮存和分配方式应能防止微生物生长，例如，在70℃以上保持循环水源、水处理设施及水的化学和生物学污染状况应定期监测，必要时还应监测细菌内毒素。监测结果以及所采取纠偏措施的记录应予归档第45页，共102页，2023年，2月20日，星期五生产工艺第46页，共102页，2023年，2月20日，星期五从甲氨蝶呤事件

看生产中防止交叉污染的措施事件回顾2007年7月6日 国家药品不良反应监测中心陆续收到广西、上海等地部分医院的药品不良反应病例报告。患者共同使用了标示为上海医药(集团)有限公司华联制药厂生产的注射用甲氨蝶呤(批号为070403A、070403B，规格5mg)。为保证公众用药安全，国家药监局决定暂停上述批号产品的销售和使用2007年7月30日

070405B、070502B两个批号注射用甲氨蝶呤(5mg)被暂停用于鞘内注射第47页，共102页，2023年，2月20日，星期五从甲氨蝶呤事件

看生产中防止交叉污染的措施事件回顾2007年8月 北京、安徽、河北、河南等地医院有关使用上海华联药品发生不良事件的报告，陆续上报到国家药品不良反应监测中心。此时，发生不良事件的药品已涉及上海华联甲氨蝶呤、盐酸阿糖胞苷两种注射剂2007年8月31日 国家药监局和卫生部决定，暂停上海华联制药厂生产的注射用甲氨蝶呤和注射用盐酸阿糖胞苷用于鞘内注射第48页，共102页，2023年，2月20日，星期五从甲氨蝶呤事件

看生产中防止交叉污染的措施事件回顾2007年9月5日 上海华联制药厂注射用甲氨蝶呤和注射用盐酸阿糖胞苷的生产、销售和使用被暂停2007年9月14日 药监局、卫生部联合专家组查明，上海华联制药厂在生产部分批次的甲氨蝶呤和阿糖胞苷过程中，混入了硫酸长春新碱第49页，共102页，2023年，2月20日，星期五从甲氨蝶呤事件

看生产中防止交叉污染的措施事件调查公布2007年12月13日 在卫生部、国家食品药品监督管理局联合调查组的指导和参与下，上海市政府相关部门近期基本查明上海医药（集团）有限公司华联制药厂生产的鞘内注射用甲氨蝶呤和阿糖胞苷药物损害事件原因 上海华联制药厂因造成重大药品生产质量责任事故被依法吊销《药品生产许可证》，企业相关责任人已被公安部门拘留 相关赔付工作已启动第50页，共102页，2023年，2月20日，星期五从甲氨蝶呤事件

看生产中防止交叉污染的措施事件发生原因华联制药厂在生产过程中，现场操作人员将硫酸长春新碱尾液混于注射用甲氨蝶呤及盐酸阿糖胞苷等批号药品中，导致了多个批次的药品被硫酸长春新碱污染，造成重大的药品生产质量责任事故华联制药厂有关责任人在前期的联合调查组调查期间和后期公安机关侦察中，有组织地隐瞒违规生产的事实第51页，共102页，2023年，2月20日，星期五从甲氨蝶呤事件

看生产中防止交叉污染的措施事件的教训忽视对生产中各种物料、产品进行标识以防止差错不同给药途径的药品清场要彻底对于无菌药品生产，生产人员的技能、所接受的培训及其工作态度及其重要第52页，共102页，2023年，2月20日，星期五生产工艺配制过滤无菌灌装冻干灭菌工艺第53页，共102页，2023年，2月20日，星期五配制工序的检查要点操作区的设置和洁净度级别配料处方称量操作称量记录防止污染和交叉污染的措施第54页，共102页，2023年，2月20日，星期五配制区域的洁净度级别应单独设置，注意称量区的空气流向，防止粉尘扩散应根据产品的特性设定相应的洁净度级别

欧盟无菌药品的GMP附录规定：原辅料和大多数产品的准备/配制应至少在D级区进行，以降低尘粒和微生物污染的风险，适于过滤及灭菌操作微生物污染风险比较高时，如容易长菌的产品、配制后要等相当长时间方可灭菌的产品或因故主要不在密闭容器内进行配制操作的产品，配制必须在C级环境中进行第55页，共102页，2023年，2月20日，星期五称量必须按照注册批准的处方配料称量中应特别注意防止交叉污染一次称量一种物料通常先称量辅料，后称量原料药活性炭应在单独区域中称量，称量后放在水溶液中衡器使用前应检查校准称量记录最好采用客观的记录如实记录衡器的读数复核第56页，共102页，2023年，2月20日，星期五过滤工序的检查要点过滤器的安装位置过滤器的相关信息过滤器完整性试验的方法过滤前后的完整性试验和记录过滤器的更换、消毒或灭菌发现过滤器出问题后的处理第57页，共102页，2023年，2月20日，星期五过滤器的安装除菌过滤用过滤器通常使用2只串联方式，确保过滤的可靠性可能情况下，应在紧挨灌装点的位置，用除菌过滤器将所有药液，特别是大容量注射剂进行除菌过滤采用无菌制造工艺时，除菌过滤操作区域不得设在无菌操作区内，可通过管道传送滤液第58页，共102页，2023年，2月20日，星期五过滤器的完整性试验过滤器的相关信息应具有可追溯性完整性试验的合格标准应参照供应商的说明书设定应在过滤前、过滤后分别测试测试方法起泡点试验前进流试验微生物挑战性试验由供应商做，以避免污染产品第59页，共102页，2023年，2月20日，星期五无菌灌装检查要点关键操作区和生产设备清洁、消毒或灭菌无菌灌装用各类物料、器具的准备或灭菌处理生产用气体人员的无菌操作装量控制培养基模拟灌装验证无菌检验样品的取样检查时应不能影响正常的生产第60页，共102页，2023年，2月20日，星期五培养基模拟灌装验证目的确定实际生产中（如开机前的调试、加入无菌原辅材料、无菌连接、灌装和密封）产品污染的概率基本思路应综合考虑生产线可能造成污染的各种因素，并能对工艺受控的状态做出准确的评估应尽可能模拟实际生产的无菌操作，可能时，应包括最差条件的相关活动，以挑战无菌操作第61页，共102页，2023年，2月20日，星期五培养基模拟灌装验证常规的工艺验证试验包括培养基模拟灌装验证试验，最少在线灌装三批，每批的批量见下表，每瓶产品均应进行无菌检查，判断该试验是否合格的标准见下表:培养基灌装试验的批量与判断合格的标准

─────────────────────────批量（瓶）3000

4750

6300

7760

─────────────────────────允许染菌0≤1≤2≤3

的数量（瓶）第62页，共102页，2023年，2月20日，星期五冻干检查要点冻干产品的包装形式、装量冻干产品的装载方式和装载数量冻干工艺和曲线冻干工艺的验证冻干产品进出冷冻干燥室的操作冻干机的灭菌冻干机关键参数控制和记录仪表的校准管路的连接冻干的记录第63页，共102页，2023年，2月20日，星期五影响冻干产品质量的主要因素冻结产品溶液处方冷冻速率冷冻方式是否退火产品装量和数量干燥搁板温度产品温度冷凝器温度和真空度冷冻干燥室的真空度产品装量和数量第64页，共102页，2023年，2月20日，星期五冻干工艺的关键控制参数冷冻速率搁板温度产品温度冷凝器温度和真空度冷冻干燥室的真空度第65页，共102页，2023年，2月20日，星期五冻干机的灭菌乙醇只能起到消毒的作用，不能做到灭菌普遍认可的方法为湿热灭菌法氮气、空气过滤器和进气口管道应灭菌完全冷冻干燥室的灭菌应使蒸汽在搁板间自由流通冷冻干燥室在各批次间应进行灭菌灭菌程序的验证应采用生物指示剂冷凝器应灭菌灭菌应有完整的记录第66页，共102页，2023年，2月20日，星期五灭菌工艺的选择湿热灭菌法干热灭菌法除菌过滤法环氧乙烷灭菌法辐射灭菌法第67页，共102页，2023年，2月20日，星期五无菌药品常用灭菌工艺的比较类别Fo值微生物存活概率要点说明过度杀灭法Fo≥12≤10-6热稳定性产品以杀灭微生物作为实现无菌的手段残存概率法8<Fo<12≤10-6热稳定性较差产品工艺过程将防止产品被耐热菌污染放在首位而不是依赖最终灭菌去消除污染流通蒸汽法不计算Fo≤10-3热不稳定产品加热是除菌过滤的补充手段除菌过滤法LRV>7≤10-3不能加热的产品不能除去病毒、支原体等微生物LRV=logreductionvalue过滤对数下降值一般上游为107下游为1，则LRV=7由于操作较多，最终产品达到的无菌保证水平远低于除菌过滤的水平第68页，共102页，2023年，2月20日，星期五影响湿热灭菌效果的因素待灭菌产品中含有微生物的种类和数量待灭菌产品的包装形式待灭菌产品的装载方式和装载数量湿热灭菌工艺条件湿热灭菌设备第69页，共102页，2023年，2月20日，星期五无菌保证水平SAL无菌保证水平（SterilityAssuranceLevel）表示物品被灭菌后的无菌状态按国际标准，湿热灭菌法的无菌保证值不得低于10-6，即灭菌后微生物存活的概率不得大于百万分之一。第70页，共102页，2023年，2月20日，星期五灭菌工艺验证的必要性灭菌产品的无菌保证不能依赖于最终产品的无菌检验，而是取决于生产过程中采用合格的灭菌工艺、严格的GMP管理和良好的无菌保证体系灭菌工艺的验证是无菌保证的必要条件灭菌工艺经过验证后，方可正式用于生产第71页，共102页，2023年，2月20日，星期五国内企业灭菌工艺验证常见缺陷无包装规格无装载方式未对每一种产品每一种包装规格的每一种装载方式进行验证采用留点温度计监测温度无温度探头校准记录验证的灭菌工艺与实际工艺不一致未验证最差灭菌条件设定的验证合格标准达不到无菌保证水平（SAL）10-6生物指示剂使用不规范第72页，共102页，2023年，2月20日，星期五灭菌工艺检查要点生产环境和待灭菌产品中含有微生物的种类和数量研究和监控待灭菌产品的包装形式、装载方式和装载数量灭菌工艺条件灭菌设备关键控制参数的控制和记录仪表的校准设备维护和维修灭菌的记录灭菌工艺的验证选用的生物指示剂热分布试验，找出最冷点位置无菌检验样品的取样第73页，共102页，2023年，2月20日，星期五无菌检查第74页，共102页，2023年，2月20日，星期五无菌检查的局限性无菌的定义理论上：无菌＝没有任何活的微生物实际上：我们无法证明产品中没有活微生物存在无法对整批产品进行100%检验无菌检验的结果只是一个基于“可能性”的判断无菌检验用培养基有其局限性只进行细菌和真菌的检验对实验结果的判定是基于“是否在培养基中生长”培养条件（如温度和时间）是有限的我们的工作环境及操作是在相对无菌的状态第75页，共102页，2023年，2月20日，星期五美国非肠道药物学会注射剂无菌测试结果试验目的：不合格的可能性(%)试验批量：60,000支试验方法：按美国药典无菌测试方法真实的不合格率测试20支样品不合格的可能性测试40支样品不合格的可能性1％18.2%33.1%5％64.2%87.2%15％96.1%99.8%30％99.9%100.0%第76页，共102页，2023年，2月20日，星期五上述无菌测试结果的启示含有少量微生物污染产品的批次也有可能“通过”无菌检验一批产品的染菌率越低，根据无菌检验的结果来判定整批产品的无菌，其风险就越大第77页，共102页，2023年，2月20日，星期五如何用无菌检验来证明整批产品无菌要求有一个取样计划来涵盖整个批号有足够的取样量和检验量选择适用的培养基采用经验证的无菌检验方法良好的环境监控第78页，共102页，2023年，2月20日，星期五无菌检验的取样计划何时取?如何取?何处取？无菌灌装产品批开始、结束及重大故障和调整后最多24小时为一批USP<1211>每天灌装的产品应分别做无菌检验最终灭菌产品从灭菌柜中最冷点取样对经不同灭菌柜灭菌的产品应分别进行无菌检验连续工艺产品被连续地单个灭菌，如：用电子束灭菌，一批不大于24小时第79页，共102页，2023年，2月20日，星期五无菌检验的取样计划取多少样品（检验数量）？取决于产品的批量

CP2005年版大于500：取2%或20支（取少），用于每个培养基检验小于等于100：取10%或4个（取多），用于每个培养基检验取决于产品的数量CP2005年版剂量小于1毫升，就要取40支同时要考虑检验耗损和复试的需要第80页，共102页，2023年，2月20日，星期五无菌检验的取样计划每个样品测试多少数量（检验量）？药典上规定了每次检验的供试品总量装量小于1ml

CP2005年版每支样接入每个培养基为全量装量大于等于1ml Ph.Eur半量，但不超过20ml CP2005年版半量，2-500ml第81页，共102页，2023年，2月20日，星期五无菌检验用培养基培养基的种类用于真菌培养的改良马丁培养基，培养温度23-28℃用于厌氧和需氧细菌培养的硫乙醇酸盐流体培养基，培养温度30-35℃培养基的适用性检查要有足够的灵敏度能够支持代表性菌种的生长培养基的储存和控制储存条件和有效期第82页，共102页，2023年，2月20日，星期五USP29无菌检验阳性对照菌的选择名称英名备注白色念珠菌CandidaalbicansATCC10231真菌/酵母①黑曲霉菌AspergillusnigerATCC16404真菌/霉菌①枯草芽孢杆菌Bacillussubtilis

ATCC6633需氧，条件致病菌，除炭疽热类芽孢杆菌会引起大部分动物生病以外，本属内其它种都不会引起动物生病，但是Bacillussubtilis

却会引起眼睛伤害，G+.铜绿假单胞菌Pseudomonasaeruginosa

ATCC9027需氧，G-,致病菌

②又叫绿脓杆菌金黄色葡萄球菌StaphylococcusaureusATCC6538需氧，G+,是致病菌

③梭状芽孢杆菌ClostridiumsporogenesATCC7955厌氧，G+,非致病菌④产品中常见污染菌从日常监控污染菌中分离企业自己分离第83页，共102页，2023年，2月20日，星期五无菌检验方法主要有两种方法直接接种法薄膜过滤法注意事项采用直接接种法时应考虑产品是否有抑菌性第84页，共102页，2023年，2月20日，星期五无菌检验的方法学验证验证目的：验证所采用的方法和条件是否适合于供试品的无菌检查。即确认供试品在该检验量、该检验条件下无抑菌活性或其抑菌活性以被充分消除到可以忽略不计。选用的培养基能够促进各种微生物的生长。消除供试品中抑菌的方法不能损害微生物，如冲洗、中和、酶处理等方法。第85页，共102页，2023年，2月20日，星期五无菌检验的环境控制应在无菌环境下进行洁净度（尘粒和微生物）应与无菌生产厂房一致控制要求与生产区域一致，如：空调、更衣、清洁、缓冲、定期验证应有环境监控