临床药理学试验

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临床药理学试验

ExperimentsforClinicalPharmacology

山东大学药学院

二00八年

临床药理学试验

编写人员(按姓氏笔画顺序)

曲显俊纪建波张庆柱郭秀丽

焦波韩秀珍程艳娜

责任编写者:曲显俊

山东大学药学院临床药学试验室编

二00八年

编写说明

根据医学系临床药学(7年制)专业设置的目的与培养方案，结合当前国内外各院校在该课程教学方面的实际状况和学生特点，我们在总厚试验教学和科研工作的基础上，编写了临床药理学试验讲义。该讲义的内容基本以模拟临床常见病和多发病模型，并以理论教学中各章节常用典型药物对机体作用特点为依据，观测这些药物的作用规律及作用特点，强调学生自己动手试验的机遇，有利于提高学生观测和分析问题的能力，为进入临床阶段的学习与实践活动打下基础。

由于没有其他可供参考的蓝本，本教材所编写的试验内容主要参考了本所试验室教师长期的科研活动并结合其他发表研究论文，可能存在一些不足之处，希望教师和学生在使用过程中发现和提出看法，以利改进。

编者

二00八年

目录

试验室基本规则

试验一临床药理学试验设计的基本方法

1试验设计的三大基本原则2科研工作的基本步骤3论文的格式和基本写法

试验二抗癌药物引起血液系统毒性作用观测

试验三解热镇痛药物的作用及与氯丙嗪的降温作用特点比较观测试验四维拉帕米抗心律失常作用

试验五苯妥英钠的抗癫痫作用及其血药浓度测定

试验六药物对小鼠肝药酶诱导剂对药物代谢的影响（巴比妥类）

试验七有机磷急性中毒家兔乙酰胆碱酯酶活性变化及阿托品和解磷定的搭救作

用

试验八哮喘动物模型的制作及治疗药物疗效观测试验九双波长紫外分光光度法测定氨茶碱血药浓度试验十庆大霉素对大鼠的肾毒性

试验十一体外培养细胞观测阿霉素对K562细胞的杀伤作用

临床药理学试验室基本规则

1.试验前细心阅读试验讲义，了解试验目的的要求和操作步骤，结合试验内容复习有关的药理学基本理论及生理、生化知识。

2.试验时要依照操作步骤进行，确凿计算药物剂量，细心观测，认真记录，俭约药品，爱护试验器材和动物。如有器材损坏应报告教师。

3.试验室内要保持恬静、整齐、药品使用后必需用原瓶塞盖好，共用药品和器材不得任意挪动，动物取走后笼门要及时关紧。

4.试验终止后，要认真探讨，分析试验结果，写出试验报告。最终各组轮番清洁试验室卫生，清点试验器材，关好水电门窗。

素-6等）。内生致热源再刺激下丘脑引起PGE合成和释放增加，作用于体温调理中枢，使体温升高。非甾体类解热镇痛药物通过抑制下丘脑合成环氧酶COX，阻断PGE的合成，能够使体温调理中枢的体温定点恢复正常。因此，该类药物只能降低发热者的体温，但不能降低至正常体温以下，而且不影响正常人的体温。吩噻嗪类药物氯丙嗪(chlorpromazine)也能降低体温，是通过抑制下丘脑体温调理中枢，使体温调理功能失灵。因次，该药可降低发热病人的体温，也可降低正常人体温，降温程度随环境温度升高而幅度变小，若协同物理降温，可降至正常体温以下。此外，降温作用与氯丙嗪的扩张血管有一定关系。临床常协同冰浴等物理降温方法，使体温降至28-32°C，用于低温麻醉。协同哌替啶组成冬眠合剂，使患者处于深睡状态，体温、代谢和组织耗氧量均降低，称为人工冬眠。[试验材料]

器材：体温计(肛温表)，注射器动物：家兔6只

药品：伤寒副伤寒菌苗，或10%蛋白栋或20%氯化钠（2ml/kg,iv），灭菌牛奶（2ml/kg,im）等。

试验药物：安基比林，阿司匹林，氯丙嗪。[试验方法]

取健康家兔6只，称重，编号，用肛温计测量正常体温。然后1，2，3号分别静脉注射伤寒副伤寒菌苗0.5-1ml/kg（或10%蛋白栋3ml/kgiv,40min后体温升高）。每隔30分钟测量体温一次。待体温升高0.6°C以上时，1号与4号腹腔注射5%氨基比林溶液2ml/kg，2号与5号腹腔注射0.5%氯丙嗪溶液2ml/kg，3号与6号腹腔注射等容量生理盐水2ml/kg。给药后每隔30分钟测体温1次，共2-3次，比较其结果有何不同。

[本卷须知]

（1）家兔应健康，雌性应无孕。

（1）家兔正常体温一般在38-39.5°C，体温过高者对致热原反应不良。（2）测温前使家兔恬静，将肛温计甩至35°C以下，头端涂以少量液体石蜡或

凡士林，轻轻插入肛门内约3-4cm，扶住肛温计，3分钟后取出读数。

（3）本试验的致热原也可选用20%氯化钠（2ml/kg,iv），灭菌牛奶（2ml/kg,im）

等。

[氯丙嗪降温作用特点]

取健康家兔3只，先测量正常体温及观测全身状态，然后甲兔静注0.7%氯丙嗪溶液1ml/kg，并用冰袋降温；乙兔静注同量氯丙嗪但不用冰袋降温；丙兔静注等容量生理盐水（1ml/kg），并用冰袋降温。给药后每20分钟测量体温一次，观测各兔体温变化及全身状态有何不同。[本卷须知]冰袋可置家兔腹股沟或腹部等处。

思考题：

1.氨基比林和氯丙嗪对发热家兔和正常家兔体温的影响有何不同？为什么？2.氯丙嗪的降温作用有何特点？有何临床意义？（曲显俊）

试验四药物对不同类型心律失常作用观测

[试验目的]了解心律失常模型的制作方法，把握利多卡因、阿托品抗心律失常的药理学作用及其原理，初步了解不同类型心律失常的心电图表现。

[试验原理]药理学研究中常用的心律失常模型有两类：过速型心律失常模型和缓慢型心律失常模型。过速型心律失常可以通过以下方法形成：①电刺激心脏诱导；②外科手术或器械损伤形成；③化学药物诱发形成。氯化钡能促进浦氏纤维钠离子内流，提高舒张期的除极速率从而诱发室性心律失常，表现为室性早博、二联律、三联律、室性心动过速、心室纤颤等；利多卡因等药物具有抗心律失常的作用，从而对抗氯化钡诱发的室性心律失常。缓慢型心律失常模型可由维拉帕米、麻醉剂和烟碱等诱发产生。维拉帕米能够抑制心肌细胞内的Ca2+内流，抑制窦房结的兴奋性，减慢心室的传导，阿托品对这种类型的心律失常具有预防和治疗作用。[试验材料]

试验器材：BL-410生物机能试验系统；大鼠解剖台，天平1台，大、小剪刀各1把，小镊子1把，注射器（5ml1支，1ml3支，2ml1支）。

试验药品：3%戊巴比妥钠溶液

0.4％氯化钡2.5mg/ml维拉帕米0.5％利多卡因1mg/ml阿托品生理盐水。

试验动物：大鼠[试验方法]

过速型心律失常试验：

1．选择230-250g健康大鼠3只，称重后编号为甲、乙、丙。腹腔注射3％戊巴比妥钠1ml/kg，大鼠麻醉后，仰位固定于解剖台上，通过引导电极的连接方法形成大鼠的标准II导联信号引入连接，分别记录3只大鼠正常Ⅱ导心电图。2．分开股静脉，甲鼠静脉注射0.4ml生理盐水（对照），乙鼠静脉注射0.5％利多卡因0.2ml/100g，丙鼠静脉注射阿托品1mg/只，分别记录3只大鼠给药后1、2分钟的心电图图形；然后，3只大鼠均静脉注射0.5％氯化钡0.4ml/100g，记录静脉注射开始第15、30秒钟和1、3、5、10、15分钟内的心电图变化，比较3只大鼠给予氯化钡后心电图有何不同。缓慢型心律失常试验：

1．另取大鼠3只，称重，编号为1、2、3号。腹腔注射3％戊巴比妥钠1ml/kg麻醉后，仰位固定于解剖台上，分别记录3只大鼠正常Ⅱ导心电图。

2．分开股静脉，1号大鼠静注0.4ml生理盐水作为对照，2号鼠静注阿托品1mg/只，3号大鼠同法注射0.5％利多卡因0.2ml/100g，分别记录3只大鼠给药后1、2分钟的心电图图形；接着，3只大鼠均静脉注射2.5mg/ml维拉帕米0.2ml/100g，记录静注开始第15、30秒钟和1、3、5、10、15分钟的心电图变化，观测3只大鼠给予维拉帕米后心电图有何不同。[试验结果]

1．将试验结果填写记录表内

动物数

恢复窦性心律数

心律失常持续时间（min）

型速生理盐水组过利多卡因组

阿托品组

生理盐水组缓慢利多卡因组型阿托品组

不能恢复窦性心律大鼠，心律失常持续时间按15分钟计

2．剪贴有代表性的心电图，将各组给药前后的心电图粘贴在试验报告上进行分

析。[本卷须知]

1．氯化钡需新鲜配制，快速注射，注入氯化钡的速度要求一致。

2．利多卡因要缓慢注射。利多卡因作用时间维持时间短，因此预防给药组的大鼠注入数分钟后仍可能出现心律失常，此时可在注射利多卡因治疗，但不可过多。[思考题]

1．氯化钡、维拉帕米致心律失常的作用机制是什么？2．利多卡因抗氯化钡所致心律失常的作用原理是什么？3．从本试验角度分析，心律失常患者临床用药应注意什么？（杨月，郭秀丽，曲显俊）

[试验目的]观测苯妥英钠的毒性反应，对药物血药浓度监测有初步的认识。[试验原理]苯妥英钠治疗有效浓度为10-20mg/L，血药浓度大于20mg/L出现眼球震颤，大于30mg/L致共济失调等小脑前庭系统功能障碍，大于40mg/L可引起精神改变。测定苯妥英钠可用光谱法、HPLC及免疫化学法，较成熟的是衍生化后紫外检测法。其原理是将标本调理至pH6.8后，以二氯甲烷提取及沉淀蛋白，再转溶于NaOH溶液，加KmnO4再加热，使苯妥英氧化为吸光值大的二苯酮衍生物，再以环已烷提取，247nm紫外光比色定量。本法灵敏度、线性范围、重复性均可满足TDM要求。[试验材料]

试验五苯妥英钠的血药浓度测定及中毒反应观测

器材可调微量加样器5ml注射器具塞离心试管水浴锅药品20mg/ml苯妥英钠溶液7mol/L氢氧化钠溶液

pH6.8磷酸盐缓冲液3%戊巴比妥钠溶液饱和KMnO4溶液

二氯甲烷环己烷动物大鼠[试验方法]

1.选择230-250g健康大鼠1只称重，腹腔注射苯妥英钠(120mg/kg),密切观测2小时内大鼠反应,并在给药后0、10、30、50、70、90、120min自颈静脉窦采血1ml，离心5min（2500rpm）取血清待测。

2.紫外法测血药浓度取大鼠血清0.3ml，再分别参与pH6.8磷酸盐缓冲液0.3ml，混匀后用二氯甲烷5ml提取，离心15min（2500rpm），弃去上层，取下层二氯甲烷于另一具塞离心试管中，参与7mol/LNaOH3.0ml，混合均匀，离心15min（2500rpm），取上层碱液于另一10ml具塞离心试管中，置70℃水浴约5min除去二氯甲烷，参与饱和高锰酸钾溶液3.0ml，混匀，置80℃水浴加热20min，冷却至室温。参与环己烷3.0ml，混匀，离心15min（2500rpm），取上层，以环己烷为空白对照，在247nm波优点测其吸收度(A)。将吸光度值代入标准曲线方程，得到苯妥英纳的血药浓度。

3．标准液的配制缜密称定枯燥至恒重的苯妥英钠标准品0.025g，加新沸过放冷的蒸馏水定容至25ml，作为标准品溶液备用。

4．标准曲线的制备取10ml具塞离心试管6只，按顺序参与大鼠空白血清0.3ml和0、3、6、12、24、48μl新配的标准品储存液，混匀，再分别参与pH6.8磷酸盐缓冲液0.3ml，混匀后用二氯甲烷5ml提取，离心15min（2500rpm），弃去上层，取下层二氯甲烷于另一具塞离心试管中，参与7mol/LNaOH3.0ml，混合均匀，离心15min（2500rpm），取上层碱液于另一10ml具塞离心试管中，置70℃水浴约5min除去二氯甲烷，参与饱和高锰酸钾溶液3ml，混匀，置80℃水浴加热20min，冷却至室温。参与环己烷3.0ml，混匀，离心15min（2500rpm），取上层，以环己烷为空白对照，在247nm波优点测其吸收度(A)。以A对药物浓度C回归，求标准曲线方程。

（红棕色）[试剂配制]

（1）2/15M磷酸氢二钠溶液：称取Na2HPO423.87g，用蒸馏水溶解并稀释至500ml。

（2）2/15M磷酸二氢钾溶液：称取KH2PO49.08g,用蒸馏水溶解并稀释至500ml。

（3）pH7.2磷酸盐缓冲液：取2/15MNa2HPO4溶液72ml和2/15MKH2PO4溶液28ml混合即成。

（4）0.001MpH4.5醋酸缓冲液：先用每升含冰醋酸5.78ml的水溶液28ml和每升含醋酸钠（不含结晶水）8.2g的水溶液4.22ml混合成为0.1MpH4.5的醋酸盐缓冲液，再用蒸馏水稀释100倍。

（5）0.007M乙酰胆碱底物用液：快速称取氯化乙酰胆碱0.127g(或溴化乙酰胆碱0.158g)，溶于0.001MpH4.5醋酸盐缓冲液10ml里，贮于冰箱中，临用时用pH7.2磷酸盐缓冲液稀释10倍即成。

（6）碱性羟胺溶液：临用前20分钟取等量14％NaOH溶液和14％盐酸羟胺溶液混合即成。

（7）10％三氯化铁溶液：称取FeCl310g,用0.1N盐酸溶解使成100ml。（8）33.3％（V/V）盐酸溶液：量取盐酸溶液33.3ml,加蒸馏水至100ml。（9）0.2%（V/V）敌敌畏：取敌敌畏0.1ml加生理盐水至50ml。

（纪建波，张庆柱）

试验八哮喘动物模型的制作及治疗药物疗效观测

[试验目的]了解动物哮喘模型的制作过程，测定常用支气管平喘药物的作用，把握支气管哮喘发病机理及药物作用机制。

[基本原理]不少药物当以气雾法给予豚鼠时可以引起支气管痉挛、窒息，从而导致抽搐而跌倒。这种动物模型可用于观测药物的支气管平滑肌松弛作用。目前最常用的引喘药物是组胺和乙酰胆碱。药物气雾引喘装置见图[试验材料]

器材：药物气雾引喘装置动物：豚鼠4只

药品：引喘药物，组胺和乙酰胆碱试验药物，氨茶碱或特布他林[试验方法]

取豚鼠6只备用。取豚鼠1只，放入玻璃罩内（容积约4L），以400mmHg的压力喷入2%氯化乙酰胆碱和0.1%磷酸组胺等容积的混合液15s，观测豚鼠的引喘潜伏期（从喷雾开始到哮喘发作、呼吸困难，直到抽搐跌倒的时间），一般不超过120s，超过此潜伏期可考虑不用。

将选用的豚鼠随机分2组（据试验要求定），每组3只，试验组豚鼠腹腔注射氨茶碱125mg/kg(12.5%溶液1ml/kg)，或其他受试药物。注射后30min，重新测定其潜伏期，及6min内跌倒的只数。另一组以400mmHg的压力喷入0.5%异丙肾上腺素1min，让其再吸入3min，马上重新测定其引喘潜伏期，以及6min内跌倒的只数。[本卷须知]

（4）气雾喷头所喷出的雾粒大小（其直径1-5μm）是本试验成败的关键，也

可用超声雾化器替代，但应确凿定量。

（5）各鼠每天只能测定一次引喘潜伏期。同一天内，屡屡测定，会影响试验结

果。

（6）判断药物有无平喘作用的指标：用药后引喘潜伏期明显延长；计算用药后

6min内动物不会因呼吸困难、窒息而跌倒的只数，不跌倒者引喘潜伏期以360s计算。

（7）抗组胺药物无直接松弛支气管平滑肌作用，但用这种动物模型，也能得到

平喘效果。因此，在分析试验结果时应排除这种假阳性现象。（韩秀珍）

试验九双波长紫外分光光度法测定氨茶碱血药浓度

[试验目的]学习双波长紫外分光光度法测定氨茶碱的血药浓度测定方法。体会

稳态一点法设定药物给药量。[试验材料]

紫外分光光度计;旋涡混合器;离心机;10ml容量瓶，离心管，吸管，移液器茶碱标准品;氯仿、异丙醇、0.1mol/L氢氧化钠、0.1mol/L盐酸。动物家兔[试验方法]

1.取家兔1只，给予氨茶碱100mg/kg（用50%葡萄糖注射液稀释至5ml），缓慢静

脉注射。1小时后取血2ml，分开血清。取血情0.5ml，置离心管中,加0.1mol/L盐酸溶液0.2ml,缜密参与氯仿∶异丙醇(95∶5)溶液5ml,振摇混合,离心(2500r/min)10min,吸取氯仿液(下层)4.0ml置另一离心管中,参与0.1mol/L氢氧化钠溶液4.0ml,振摇均匀,离心(2500r/min)10min,吸取碱液(上层)3～3.5ml,供测定用。

2.茶碱血药浓度的结果计算测得血清样品的ΔA,从标准曲线上得相应的血

药浓度C(ug/ml),C×10即为茶碱的血药浓度C1(ug/ml)。

3．给药量设计

D’=D×C’/C

其中，D原来剂量，D’为调整后剂量，C为测得血药浓度，C’为目标浓度。[试验结果]

根据测得的血药浓度和目标浓度，计算调整后剂量。

附.标准曲线制备缜密称取茶碱标准品5.0mg,加蒸馏水0.2ml,再参与0.1

mol/L的氢氧化钠溶液于10ml容量瓶中,得到浓度为0.5ug/uL的茶碱标准溶液。取茶碱标准液5.0、7.5、10.0、15.0、20.0、25.0uL参与空白血清0.5ml中混匀,使其浓度为0.5、0.75、1.0、1.5、2.0、2.5ug/ml,以0.1mol/L的氢氧化钠4ml加2ml蒸馏水为参比,测定A274和A298处的吸收度,计算ΔA,求得标准曲线方程。

（焦波）

试验十庆大霉素对大鼠肾脏毒性观测

[试验目的]观测庆大霉素对大鼠的肾毒性