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文档简介
本文格式为Word版,下载可任意编辑——抗坏血酸(维生素C)的测定抗坏血酸(维生素C)的测定
维生素C(vitaminC)又称为抗坏血酸,一般水果、蔬菜中维生素C的含量均较高,不同的水果、蔬菜品种,以及同一品种在不同栽培条件、不同成熟度等状况下,其维生素C的含量都有所不同。测定维生素C含量,可以作为果蔬品质指标之一。
一、原理
维生素C具有很强的还原性,染料2,6-二氯酚靛酚(2,6-dichlorophenolindophenol)具有较强的氧化性,且在酸性溶液中呈红色,在中性或碱性溶液中呈蓝色。因此当用蓝色的碱性2,6-二氯酚靛酚溶液滴定含有抗坏血酸的草酸溶液时,其中的抗坏血酸可以将2,6-二氯酚靛酚还原成无色的还原型。但当溶液中的抗坏血酸完全被氧化之后,则再滴2,6-二氯酚靛酚就会使溶液呈红色。借此可以指示滴定终点,根据滴定用去的标准2,6-二氯酚靛酚溶液的量,可以计算出被测样品中抗坏血酸的含量
二、材料、设备及试剂(一)材料:水果或蔬菜(二)设备:
1.蒸发皿;2.研钵一套;3.移液管;4.漏斗;5.滤纸;6.容量瓶;7.微量滴定管。(三)试剂:1.2%草酸。
2.2,6-二氯酚靛酚(NaOC6H4NC6H2OCL,M=290.09)将50mg2,6-二氯酚靛酚燃料溶于200ml含有52mgNaHCO3的热水中,冷却后,稀释至250ml,装入棕色瓶内,放在冰箱里保存(因该染料性质不稳定,配制后超过一周必需重新配制)。
3.0.1mg/ml标准抗坏血酸溶液将50mg纯抗坏血酸溶于少量2%草酸溶液中,然后用2%草酸溶液定容至500ml(使用前临时配置)。
三、试验步骤
(一)称取水果和蔬菜样品10g,放在研钵中参与2%草酸溶液约5ml研碎。通过漏斗将研碎的样品倒入一只100ml的容量瓶中,研钵及杵用2%草酸冲洗,并将洗液一并倒入该容量瓶中,最终用2%草酸定容到刻度,过滤,滤液备用。(二)空白滴定
取2%草酸溶液10ml至蒸发皿中,以2,6二氯酚靛酚溶液滴定呈粉红色,并在30s内不褪色为终点,耗用的染色体积(ml)作为空白。
(三)染料的标定:取10ml标准抗坏血酸溶液至蒸发皿中,以2,6-二氯酚靛酚溶液滴定呈粉红色,并在30S内不退色为终点。计算1ml染料相当于抗坏血酸的mg数(重复3次,取
Ⅰ.滴定法
平均值)。
(四)取滤液10ml于蒸发皿中,用已标定过的2,6-二氯酚靛酚溶液滴定至粉红色并且在30S内不褪色为止,记录下来染料的用量(重复3次,取平均值)。四、计算
样品的维生素C含量(mg/100g)=
式中:V1—滴定样品所用染料ml数;V0—滴定空白所用染料ml数;A——滴定度,1ml染料溶液相当的抗坏血酸的mg数;W—样品的g数;VT—样品溶液定容后的总体积ml数;VS—滴定时吸取样品溶液的ml数。
(V1?V0)?AVT??100
WVS比色法
常规测定抗坏血酸的方法采用2,6—二氯酚靛酚滴定法,但因某些叶片中花青素量较
高,当用酸提取时呈红色,因而无法滴定。本试验采用二甲苯萃取比色法,则不受花青素的干扰。
原理
向一定量提取液中参与过量的2,6—二氯酚靛酚染料溶液与维生素C作用后,多余染料用二甲苯萃取比色。待测液中抗坏血酸的含量与二甲苯萃取的颜色呈线性负相关,即待测液中抗坏血酸含量越多,未被还原的染料就越少,二甲苯萃取的颜色也就越浅,由于水溶性的花青素不溶于二甲苯,因而不影响测定结果。
二、材料、仪器设备及试剂
(一)材料新鲜包菜叶片、白萝卜等。
(二)仪器设备1.722型分光光度计2.容量瓶3钵体4不锈钢5具塞大试管(三)试剂1.1%草酸。2.2%草酸3.30%硫酸锌4.15%亚铁氰化钾
5.染料溶液称取100mg2,6二氯酚靛酚和82mg碳酸氢钠溶于约60ml热水中,过滤定容至100ml容量瓶中,倒入棕色试剂瓶存放于冰箱内。使用时稀释4倍,此溶液每ml约相当于0.1mg的维生素。
6.抗坏血酸标准溶液(0.05mg/ml)确切称取100mg分析纯100ml抗坏血酸,溶于1%草酸,定容至100ml,再从中吸取5ml,用1%草酸再稀释至100ml(标准溶液在使用前临时配置)。
7.二甲苯分析纯(本法使用多的二甲苯可用20%NAOH中和后,蒸馏回收)。三、试验步骤
1.标准曲线取具塞大试管6个,分别吸取抗坏血酸标准溶液0ml、1ml、2ml、2.5ml、3ml、4ml,用1%的草酸补充至4ml。各管中抗坏血酸含量相应为0mg、0.05mg、0.10mg、0.125mg、0.15mg、0.20mg。各管中参与染料溶液2ml,随即参与二甲苯5ml,迅速摇动约5min,静止后二甲苯与水层分开,将上层二甲苯萃取液轻轻倒入1cm比色杯中,在500nm波长下求测吸光度值,以二甲苯作空白调零,求测标准系列抗坏血酸mg数与相应的吸光度值的回应方程。
2样品提取取新鲜蔬洗清白,擦干,在玻璃上用不锈钢刀切碎混匀。称取2g样品放至研钵中,参与3ml2%草酸研磨至匀浆,然后将匀浆倒置至100ml容量瓶中,残渣用1%的草酸冲洗,洗液一并倒至容量瓶中,参与1ml30%硫酸锌,摇动容量瓶,再参与1ml15%亚铁氰化钾,以除去脂溶性色素,再用1%草酸定容至刻度,摇匀后过滤到清白小烧杯中。
3测定取上述提取液4ml(若抗坏血酸含量高,可适当减少取量,不足4ml的可用1%草酸补足至4ml)至具塞大试管中,依次参与染料2ml,二甲苯5ml,依照标准曲线的方法测定吸光度
四结果计算
根据测定液的吸光度值,按回归方程计算出抗坏血酸的mg数,然后按下式计算样品中的抗坏血酸的含量,以每克鲜样含抗坏血酸mg数(mg/100g)表示。
X?VT?100W?VS每克鲜样的抗坏血酸含量(
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