临床血液检验PPT 课件版 临检血液学检测

临床血液学检验技术血浆水离子有机分子------------（氨基酸、蛋白质（白蛋白，丙种球蛋白、纤维蛋白原）、葡萄糖、脂质、含氮代谢废物）血液微量元素与维生素气体（eg.CO2，O2）红细胞细胞成分白细胞（淋巴细胞、单核细胞、中性粒细胞、嗜酸性粒细胞、碱性粒细胞）血小板临床血液学检验技术概述：采用实验室检查方法和技术来分析、研究血液和造血器官的病理变化。阐明血液系统疾病发病机制、协助诊断、治疗观察和预后判断的一门科学。造血及造血调控一个50Kg体重的成年人每天约生成：20000亿个RBC、25亿个WBC、1000亿个PLT造血：指造血器官生成各种血细胞的过程，分为胚胎期造血和出生后造血。造血器官：能够生成并支持造血细胞分化、发育、成熟的组织器官。胚胎期造血特点：经历了卵黄囊造血期→肝脏造血期→骨髓造血期。各器官造血不是截然分开，而是此消彼长，互为交替。血细胞生成顺序：红细胞→粒细胞→巨核细胞→淋巴细胞→单核细胞。出生后造血器官：骨髓造血（骨骼内海绵样、胶状组织。）、淋巴造血功能：出生后最重要的造血器官，出生后唯一产生红、粒、血小板的场所，也可产生淋巴、单核细胞。分类：骨髓分红骨髓、黄骨髓。红骨髓的特点：分布：扁平骨、短骨及长管状骨的近心端结构：由造血细胞、结缔组织、血管、神经等组成（造血微环境），有丰富的血管系统（血窦）造血细胞分布：红细胞和粒细胞呈岛状，单核、淋巴、浆细胞散在分布血窦：一种特殊的毛细血管，内皮细胞间常有较大的间隙，血窦腔大、壁薄、形状不规则。主要分布在脾、肝、红骨髓及一些内分泌腺中。黄骨髓：骨髓中的造血细胞被脂肪细胞替代。正常情况下不再造血，但保留造血潜能。当机体需要时可重新恢复造血。淋巴器官造血中枢淋巴器官：骨髓、胸腺，淋巴细胞产生、增殖、分化和成熟的场所。周围淋巴器官：脾、淋巴结、黏膜淋巴组织，淋巴细胞聚集和免疫应答发生的场所。淋巴细胞发育：骨髓骨髓B淋巴祖细胞骨髓骨髓B淋巴祖细胞淋巴系干细胞造血干细胞淋巴系干细胞造血干细胞胸腺脾脏淋巴结胸腺脾脏淋巴结T淋巴祖细胞 髓外造血定义：正常情况下，胎儿出生2个月后，骨髓以外的肝、脾、淋巴结等不再制造红细胞、粒细胞和血小板，但是在某些病理情况下，这些组织又可重新恢复造血功能，称为髓外造血（extramedullaryhematopoiesis,EH）。意义：多见于儿童，是机体对血细胞需求特别增高或对骨髓造血障碍的一种代偿。不足：肝、脾、淋巴结等无骨髓-血屏障（marrow-bloodbarrier,MBB），幼稚细胞可进入外周血循环造血微环境组成：骨髓基质细胞、微血管、神经、细胞因子等。功能：造血干细胞赖以生存的场所，对造血干细胞的自我更新、定向分化、增殖及造血细胞增殖、分化、成熟调控等起重要作用。髓血髓血屏障血血细胞原始、幼稚细胞造血祖细胞造血干细胞原始、幼稚细胞造血祖细胞造血干细胞外周血骨髓干细胞是一类具有多向分化潜能和自我更新能力的早期未分化细胞,在特定的条件下,它可以分化成不同的功能细胞,形成多种组织和器官。胚胎干细胞：从早期胚胎的内细胞团中分离出来的有高度分化潜能的细胞系，是一种全能干细胞，具有形成完整个体的分化潜能。应用：可以无限增殖并分化成为多种细胞类型，从而可以进一步形成机体的任何组织或器官。造血干细胞(hematopoieticstemcell,HSC)：由胚胎干细胞发育而来，具有高度自我更新和多向分化能力，在造血组织中含量极少，形态难以辨认，外观似小淋巴细胞样的一群异质性细胞群。造血干细胞性质自我更新--Self-renewal多向分化--MultilineageDifferentiation可塑性--Plasticity静止期（G0期）--G0phaseHSC的自我更新能力定义：也称自我维持，造血干细胞进行不对称有丝分裂，所产生的两个子细胞，一个分化为早期造血祖细胞，一个保持干细胞特性。意义：使干细胞数量维持在一定水平，是机体维持高度正常造血的主要原因。HSC的多向分化能力定义：在体内多种调控因子的作用下，造血干细胞可以分化形成红细胞、粒细胞、单核细胞、血小板、淋巴细胞等多种细胞的祖细胞。意义：补充外周血循环中衰老和死亡的各系血细胞数量。HSC的可塑性定义：骨髓中的干细胞在特定环境下可分化成多种无关的组织细胞，这种跨胚层分化现象称为横向分化，这种横向分化潜能被称为可塑性。意义：为组织器官损伤的修复提供新思路。造血干细胞表面标志阳性标志：CD34、CD133、c-kit、Thy-1low阴性标志：CD38、Lin、HLA-DR较原始干细胞亚群的免疫表型一般为：CD34hiLin-HLA-DRlowThy-1+造血祖细胞Hematopoieticprogenitorcell(HPC)：指一类由造血干细胞分化而来，但部分或全部失去了自我更新能力的过渡性、增殖性细胞群。造血祖细胞种类多向祖细胞：髓系祖细胞、淋巴系祖细胞、粒-单系祖细胞等单向祖细胞：T细胞祖细胞、B细胞祖细胞、红细胞祖细胞、粒系祖细胞、单核系祖细胞、巨核系祖细胞等造血祖细胞特性自我更新能力减弱，进行对称性有丝分裂。较强的增殖能力、一定的分化能力，细胞边增殖边分化。CD34减弱，CD38、Lin抗原阳性。造血祖细胞表面标志:CD34+Lin＋骨髓间充质干细胞存在于骨髓中的间充质干细胞，非造血干细胞，成体干细胞，具有多向分化潜力，可向多种间充质系列细胞（如成骨、成软骨及成脂肪细胞等）或非间充质系列细胞分化，并具有独特的细胞因子分泌功能。与HSC联系：分泌多种细胞因子，支持HSC的功能。骨髓间充质干细胞特性数量少，占骨髓有核细胞的0.001%-0.01%。稳定性好，传代20次后保持特性。可形成多种组织细胞，如真皮组织、心肌组织。表达CD29、CD44、CD71、CD124等，不表达造血细胞表面抗原，如CD34、CD38、CD14等。造血细胞的生长发育包括：增殖、分化、成熟、释放骨髓血细胞组成原始阶段幼稚阶段成熟阶段粒细胞系统原始粒细胞早幼粒细胞中幼粒细胞晚幼粒细胞杆状核粒细胞分叶核粒细胞红细胞系统原始红细胞早幼红细胞中幼红细胞晚幼红细胞红细胞巨核细胞系统原始巨核细胞幼稚巨核细胞颗粒型巨核细胞产血小板型巨核细胞裸核型巨核细胞单核细胞系统原始单核细胞幼稚单核细胞单核细胞浆细胞系统原始浆细胞幼稚浆细胞浆细胞淋巴细胞系统原始淋巴细胞幼稚淋巴细胞小淋巴细胞、大淋巴细胞粒细胞系统：粒系发育形态变化规律胞体：规则，呈圆形或椭圆形胞质：无颗粒→非特异性颗粒→特异性颗粒出现、非特异性颗粒减少→仅有特异性颗粒胞核：圆形→椭圆形→半圆形→肾形→杆状→分叶状红系发育形态变化规律胞体：圆形或类圆形，原始或早幼红细胞可见瘤状突起胞质：无颗粒，颜色从深蓝色→蓝灰色→灰红色→淡红色胞核：圆形居中，晚幼红细胞（网织红细胞）有脱核现象巨核系发育形态变化规律胞体：巨大，不规则胞质：颜色从蓝色→紫红色，原始、幼稚巨核细胞无颗粒，成熟巨核细胞胞质极丰富，有大量细小紫红色颗粒胞核：巨大，不规则，高度分叶且重叠单核系发育形态变化规律胞体：常较大，不规则或有伪足状突起胞质：量多，灰蓝色，可有空泡，颗粒呈粉尘样胞核：大且不规则，扭曲、折叠，核染色质比其他同期细胞细致、疏松浆细胞系发育形态变化规律胞体：圆形或类圆形胞质：丰富，无颗粒，深蓝色不透明，常用空泡及核旁淡染区胞核：圆形，常偏位淋巴细胞系发育形态变化规律胞体：小、圆形或类圆形胞质：量少，蓝色或淡蓝色，可有少量嗜天青颗粒胞核：圆形或类圆形，可见小的凹陷或切记血细胞形态演变规律：变化规律胞体大→小（巨核细胞、早幼粒例外）胞核形态：圆→分叶（红细胞圆形）染色质：稀、细→粗、密核仁：有→无核膜：不明显→明显胞质量：少→多颗粒：无→有（红无）颜色：深蓝→浅蓝核质比大→小血细胞发育过程中表型分化特征：细胞分化抗原（differentiationantigen）：指血细胞在分化成熟为不同系列、不同分化阶段及细胞活化的过程中，出现或消失的可作为标记的功能性分子，存在于细胞膜、细胞质或细胞核内。统一使用分化簇（clusterofdifferentiation,CD）作为分化抗原和相应McAb的命名。特定的分化抗原组合在一起能反映某一细胞系列、某一细胞亚群或细胞某一分化阶段，称为血细胞表型或血细胞免疫表型（immunophenotype）。第二章：造血检验技术掌握骨髓细胞形态学检验的步骤及内容掌握常用细胞化学染色的结果判断和临床意义熟悉外周血细胞形态学检验的步骤及内容了解骨髓活体组织检验的临床应用血象和骨髓象检验骨髓细胞形态学检验骨髓细胞学检验是用细胞形态学检查的方法来观察骨髓中细胞的数量和质量的变化，借以了解骨髓的造血功能，对疾病的诊断、疗效观察、预后的判断等都具有重大价值。临床意义1.确诊某些造血系统疾病，如各类白血病、MM、AA、骨髓转移癌。2.协助诊断部分血液系统疾病，如缺铁性贫血、溶血性贫血。3.提高某些疾病的诊断率，如利用骨髓液检查疟原虫。注：骨髓细胞学检验的适应症与禁忌症、骨髓穿刺部位的选择、取材满意的指标、什么叫干抽？常见于哪些疾病？骨髓细胞检验的适应症与禁忌症适应症1.不明原因的外周血细胞数量及成分异常；2.不明原因的发热，肝、脾、淋巴结肿大等；3.不明原因骨痛、骨质破坏、肾功能异常、黄疸、紫癜、血沉明显增快等；4.血液系统疾病定期复查，化疗后的疗效观察。禁忌症1.有出血倾向或凝血时间明显延长者不宜做骨髓穿刺，如血友病、血液凝血因子大量减少；2.晚期妊娠的妇女做骨髓穿刺时应慎重；3.小儿及不合作患者不宜作胸骨穿刺。2.骨髓穿刺部位的选择成人：多采用髂前或髂后上棘穿刺，也可采用胸骨、棘突穿刺2岁以下小儿：胫骨粗隆（胫骨内侧）必要时多部位取材，以便全面了解骨髓的造血情况，如再障、骨髓纤维化患者3.取材满意的指标抽取时病人有短暂的疼感骨髓液中可见到淡黄色骨髓小粒或油滴涂片检查有骨髓特有的细胞，如：巨核细胞、浆细胞、组织细胞、组织嗜碱细胞、成骨细胞、破骨细胞等含大量幼稚细胞，杆状核粒细胞多于分叶核粒细胞4.干抽定义：指非技术错误或穿刺位置不当而抽不出骨髓液或只抽到少量血液。常见于下列疾病：原发性和继发性骨髓纤维化症、骨髓增生减低、骨髓极度增生、肿瘤骨髓浸润5.骨髓细胞学检验肉眼观察低倍镜观察油镜观察结果计算填写骨髓细胞学检验报告单标本登记及保存骨髓片肉眼观察：推片、取材：油珠(染色前)、骨髓小粒、染色低倍镜观察2.1判断骨髓涂片质量：取材、涂片、染色2.2判断骨髓增生程度分级有核细胞/红细胞有核细胞数/高倍视野临床意义增生极度活跃1:1>100各种白血病增生明显活跃1:1050~100各种白血病、增生性贫血增生活跃1:2020~50健康人、贫血增生减低1:505~10造血功能低下、部分稀释增生极度减低1:200<5再生障碍性贫血、完全稀释2.3巨核细胞计数并分类计数：低倍镜，全片计数分类：油镜或高倍镜2.4观察全片有无体积较大或成堆分布的异常细胞：异常细胞（肿瘤细胞骨髓转移）或者是寄生虫（3）油镜观察3.1有核细胞计数及分类计数的部位细胞单个分布均匀、结构清楚，红细胞淡红色，背景干净的部位，一般在体尾交界处计数的秩序从上到下或从左到右呈S形走势，避免有些视野重复计数或漏计数计数的细胞除巨核细胞、破碎细胞、分裂象以外的有核细胞计数的数目一般计数200个有核细胞，增生明显活跃者可计数500个，增生极度减低者可计数100个3.2观察细胞形态结果计算4.1有核细胞百分比（ANC）、非红系细胞百分比（NEC）(p86)4.2粒红比值（G/E）各阶段巨核细胞数或百分比外周血细胞形态学检验（以免漏诊）分类计数100个有核细胞、注意观察红细胞形态有无异常、有无其他异常细胞出现、观察血小板是否有异常、观察有无血液寄生虫（5）填写骨髓细胞学检验报告单描述骨髓片特征报告血涂片检查结果报告组织化学染色结果填写诊断意见将骨髓图文结果存入计算机并存档保存（6）标本登记及保存（至少5年）骨髓象检验注意事项骨髓增生程度若介于两级之间时，向上提一级某个细胞若介于两个阶段间，将其归入下一阶段介于两个系统之间的细胞难以判断时，采用大数归类法原始细胞难以辨认时，应观察成熟的细胞以及结合细胞化学染色来鉴别同一系统同一阶段的细胞也有个体差异，应全面观察细胞特点再做出判断大致正常骨髓象应具备以下四个条件：①有核细胞增生活跃，粒红比例为2～4：1；②各系、各阶段细胞比例大致在正常参考范围内；③各系、各阶段细胞形态无明显异常；④无明显异常细胞及寄生虫。比例（%）成分粒细胞系统40~60以中性粒细胞为主红细胞系统15~25中、晚幼红细胞为主，各10%淋巴细胞系统20~25均为成熟淋巴细胞单核细胞系统<4均为单核细胞浆细胞系统<2均为浆细胞巨核细胞系统7~35个/片以颗粒型、产血小板型巨核细胞为主其他细胞偶见组织细胞、成骨细胞、吞噬细胞等第二节细胞化学染色检验细胞化学染色（cytochemicalstain）：以细胞形态学为基础，根据化学反应的原理，应用涂片染色的方法，对血细胞内的各种化学成分及其变化作定性、定位、半定量的分析。研究对象外周血和骨髓新鲜涂片单个细胞中的化学物质：酶类、脂类、糖类、铁、蛋白质、核酸等基本步骤：固定（保持细胞结构和化学成分）----显示（被染的化学物质形成稳定的有色沉淀）----复染（显示各种细胞，其颜色与有色沉淀的颜色有明显的对比度）常用细胞化学染色方法（一）、髓过氧化物酶(marrowperoxidase,MPO)（联苯胺法）：血细胞主要的POX，是人类中性粒细胞含量最多的蛋白质，主要功能是破坏生物氧化过程中有剧毒的过氧化物。【结果判断】阴性:无颗粒弱阳性:颗粒小，分布稀疏阳性:颗粒稍粗，分布较密集强阳性:颗粒粗大，密布于整个胞浆【正常血细胞染色反应】1.粒细胞系统：分化好的原粒至中性成熟粒细胞均呈阳性，阳性反应随细胞的成熟逐渐增强；分化差的原粒细胞阴性。2.单核细胞系统：阴性或弱阳性3.淋巴细胞系统、红细胞系统、巨核细胞系统、浆细胞、组织细胞：阴性【临床意义】临床上是辅助判断急性白血病首选的、最重要的细胞化学染色鉴别----急性髓细胞白血病与急性淋巴细胞白血病1.急性髓细胞白血病(1)急性粒细胞白血病：阳性反应：M3>M2b>M2a>M1（分化差的原粒细胞呈阴性反应）；（2）急性单核细胞白血病：弱阳性反应（分化差的原单核细胞呈阴性反应）；2.急性淋巴细胞白血病：阴性反应或阳性率<3%（残留的原粒细胞）。（二）、α-醋酸萘酚酯酶染色（α-naphtholacetateesterase,α-NAE）【结果判断】胞浆内有灰黑色或棕黑色弥散性颗粒状沉淀为阳性。氟化钠抑制试验（PPT是有错？）抑制前阳性率-抑制后阳性率两种方法染色后用油镜计数100或200个被检细胞，分别计算出抑制前和抑制后的阳性率。抑制前阳性率-抑制后阳性率氟化钠抑制率=×100%氟化钠抑制率=×100%抑制前阳性率抑制前阳性率【正常血细胞染色反应】2.粒细胞系统原粒细胞阴性或弱阳性，以下阶段为2.粒细胞系统原粒细胞阴性或弱阳性，以下阶段为弱阳性3.淋巴细胞系统多数阴性，少数弱阳性1.单核细胞系统原始单核细胞分化差阴性分化好阳性幼稚及成熟单核细胞阳性被氟化钠抑制不被氟化钠抑制被氟化钠抑制不被氟化钠抑制主要用于鉴别急性白血病类型主要用于鉴别急性白血病类型【临床意义】急单急粒急性早幼粒急粒单急淋α-NAE+++++++-弱+++阳性-弱+NaF抑制抑制不抑制不抑制部分抑制部分未抑制、过碘酸-雪夫反应（糖原染色）（periodicacid-Schiffreaction，PAS）【结果判断】阳性：胞浆内出现红色阳性物，呈弥漫均匀红色、颗粒状或小块状。阴性：胞浆内无色,核淡绿。【正常血细胞染色反应】1.粒细胞系统：分化好的原粒至中性成熟粒细胞均呈阳性，阳性反应随细胞的成熟逐渐增强；分化差的原粒细胞阴性。2.单核细胞系统：细颗粒状，有时分布于细胞边缘的阳性颗粒较粗大。3.红细胞系统：阴性。4.淋巴细胞系统：大多数淋巴细胞呈阴性；少于20%淋巴细胞呈粗颗粒状或块状阳性。5.巨核细胞系统：呈颗粒状或块状阳性（含血小板）。【临床意义】1.红细胞疾病（1）红血病、红白血病、MDS：幼红细胞阳性；（2）巨幼细胞性贫血：幼红细胞阴性。2.鉴别急性白血病类型（1）急性淋巴细胞白血病：阳性率20%～80%，呈红色粗颗粒状或块状；（2）急性粒细胞白血病：少数阳性，呈细颗粒状或均匀红色；（3）急性单核细胞白血病：可阳性，呈细颗粒状、弥散分布，有时胞质边缘处颗粒较粗大。（四）、中性粒细胞碱性磷酸酶染色（neutrophilicalkalinephosphatase，NAP）【结果判断】胞浆中有紫黑色颗粒为阳性(+～+++