微生物检验-G-球菌

第一节奈瑟菌属革兰阴性双球菌，无鞭毛，无芽胞，有菌毛对人致病：淋病奈瑟菌、脑膜炎奈瑟菌N.meningococcus

Neisseriagonococcus

第一页，共24页。脑膜炎奈瑟菌临床意义致病物质脂多糖、荚膜、菌毛、内毒素所致疾病普通型

暴发型慢性败血症型2.三种临床类型1.流行性脑脊髓膜炎我国A群为主第二页，共24页。菌毛、外膜蛋白、蛋白水解酶、脂多糖、铁调节蛋白淋病人类是淋病奈瑟菌的唯一宿主。主要通过性接触引起泌尿道和生殖系统炎症

新生儿淋菌性结膜炎新生儿由产道感染，1%硝酸银滴眼。致病物质淋病奈瑟菌临床意义第三页，共24页。1.形态染色革兰阴性双球菌直径0.6~1.5μm形似双肾或咖啡豆样，凹面相对无动力，无芽胞，某些菌种形成荚膜三、生物学特性第四页，共24页。2．培养特性需在培养基中添加羊血、兔血或血清。需氧生长，初次分离需5~7%CO2和高湿度。最适生长温度为35~37℃，低于30℃不生长，血琼脂平板或巧克力琼脂平板上呈光滑、湿润、透明或半透明、直径1~2mm的不溶血、圆形、灰兰色菌落。第五页，共24页。3．生化特性氧化酶阳性，触酶阳性（除延长奈瑟菌外）。对糖分解能力、硝酸盐还原能力和DNA合成酶不同，常作为菌种间的鉴别依据。第六页，共24页。4．抵抗力对寒冷、干燥和热的抵抗力弱，对化学消毒剂敏感。对青霉素敏感但近年来由质粒介导的β内酰胺酶所致的耐药在淋病奈瑟菌中产生较多。第七页，共24页。第八页，共24页。标本采集无菌方法抽取脑脊液、关节液、血液、瘀点穿刺液等标本。采集后立即送往实验室。用血平板进行床边接种后置35℃孵育。血液标本接种在血液培养瓶中置35℃孵育。标本运送时需要35℃保温。第九页，共24页。标本直接检查直接涂片检查脑脊液直接或经离心后取沉淀涂片。皮肤瘀点渗出液涂片。革兰染色后显微镜下见白细胞内外的革兰阴性双球菌，可报告“检出革兰阴性双球菌，疑似脑膜炎奈瑟菌”。有助于流行性脑脊髓膜炎早期诊断。第十页，共24页。分离培养鉴定

脑脊液标本：接种在巧克力琼脂或羊血琼脂平板。咽拭子或鼻咽拭子：接种在选择性培养基上如改良的MTM、NCY等培养基。血液标本：经增菌培养基增菌培养后，移种至巧克力琼脂或羊血琼脂平板上。置5~7%CO235℃孵育，每隔24h观察平板。第十一页，共24页。鉴定初步确定为奈瑟菌属直径1~2mm，灰褐色、光滑、半透明、稍扁的菌落涂片革兰染色见阴性双球菌氧化酶试验阳性葡萄糖和麦芽糖发酵试验阳性、其他糖类发酵阴性。用分型血清确定血清型别。平板上没有发现菌落需继续观察72h后无菌生长可报告为阴性。第十二页，共24页。1．检验程序第十三页，共24页。2．标本采集

阴道和宫颈分泌物：用无菌塑料棒涤纶拭子，伸入阴道后穹隆或宫颈内1cm处停留10~15秒时间，蘸取。采集尿道分泌物：弃去前段脓性分泌物，留取后段作为标本。新生儿结膜炎时应采取眼结膜表面分泌物。第十四页，共24页。3．标本直接检查标本采集后涂片、革兰染色、显微镜检查第十五页，共24页。4．分离培养与鉴定选择培养基如MTM，Martin-Lewis（ML），或NYC。置于5%CO2气体条件下35~37℃孵育。每隔24h观察平板。第十六页，共24页。（1）形态和生化鉴定可疑菌落直径0.5~1mm，灰褐色、光滑、半透明呈露滴状凸起的菌落。确认将菌落涂片，革兰染色见革兰阴性双球菌氧化酶和触酶试验阳性葡萄糖发酵试验阳性，其它糖类阴性培养需观察72h后无菌生长可报告为阴性。第十七页，共24页。（2）免疫学鉴定直接荧光染色。凝集试验或免疫渗滤技术。（3）分子生物学鉴定检测靶片段的基因隐蔽性质粒、染色体基因探针、抗淋病奈瑟菌胞嘧啶DNA甲基转移酶基因、透明蛋白(opa)基因、菌毛DNA探针、rRNA基因探针和porA假基因。基因探针杂交、核酸扩增。第十八页，共24页。卡他莫拉菌（M.catarrhalis）可存在于健康人群的上呼吸道近十年来报道导致中耳炎、鼻窦炎、慢性阻塞性肺炎在免疫抑制和ICU的患者可导致菌血症是社区呼吸道感染的主要病原体之一。

第二节卡他莫拉菌第十九页，共24页。临床分离从中耳炎或鼻窦炎患者穿刺抽取标本呼吸道感染患者应采取合格痰标本或支气管灌洗液口咽部位存在卡他莫拉菌可污染痰液标本痰液标本直接涂片革兰染色如出现多个中性粒细胞、柱状上皮细胞以及大量的直径为0.5~1.5μm革兰阴性双球菌可怀疑卡他莫拉菌感染。

第二十页，共24页。培养及鉴定在血液琼脂或巧克力琼脂平板上生长良好35℃24h孵育后菌落直径1~3mm，灰白色、光滑，用接种环推菌落可将整个菌落在平板表面移动。氧化酶和触酶阳性。不发酵葡萄糖和其它糖类产酸。第二十一页，共24页。大多数菌株还原硝酸盐和产生DNase。三丁酸甘油酯水解（丁酸酯酶）试验阳性可与奈瑟菌属鉴别。可产生诱导型β内酰胺酶。第二十二页，共24页。奈