糖链结构测定及糖的提取分离

糖链结构测定及糖的提取分离演示文稿现在是1页\一共有18页\编辑于星期日优选糖链结构测定及糖的提取分离现在是2页\一共有18页\编辑于星期日

组成苷的苷元和单糖的鉴定将苷用稀酸或酶进行水解，使生成苷元和各种单糖

苷元的结构鉴定在有关章节中逐一介绍。

组成苷中糖的种类鉴定通常采用PC、TLC等方法对水解液进行鉴定。

糖类的PC常用的展开剂大多为含水的溶剂系统，如正丁醇-醋酸-水(4:1:5)，EtOAc-吡啶-水(2:1:2)等，其Rf值与溶剂的含水量有关。七、糖链结构的测定现在是3页\一共有18页\编辑于星期日苷中糖的数目的测定质谱：苷分子量-苷元分子量，求出糖的数目。核磁：氢谱中端基质子信号数(5ppm左右)，碳谱中端基碳信号的数目(90-112ppm)。七、结构的测定现在是4页\一共有18页\编辑于星期日

苷元和糖之间连接位置的确定13C-NMR：苷化位移规律，将苷和苷元的碳谱相比较。成苷后，α-C约+8ppm,β-C约-4ppm

二维核磁共振谱(如HMQCCOSY及HMBC谱)等技术广泛用于确定连糖位置。七、结构的测定现在是5页\一共有18页\编辑于星期日糖与糖的连接位置的确定全甲基化物进行甲醇解，分析其甲醇解产物。七、糖链结构的测定现在是6页\一共有18页\编辑于星期日采用的方法通常是将这些甲醚化的单糖进行了TLC鉴定，并与标准品对照。近来亦有用GC-MS联用仪对其进行鉴定的报道。全甲基化甲醇解：七、糖链结构的测定现在是7页\一共有18页\编辑于星期日

七、糖链结构的测定

如：已知某二糖甲醇解后得到下列产物，请推测该二糖的结构（连接位置）全甲基化甲醇解现在是8页\一共有18页\编辑于星期日

甲基化反应

(1)Haworth法：用硫酸二甲酯和氢氧化钠(或碳酸钠、碳酸钾)，可使醇羟基甲基化。其缺点是甲基化能力较弱，如果欲进行全甲基化反应，必须进行多次反应才能达到目的，

(2)Purdie法：用碘甲烷和氧化银为试剂(一般可在丙酮或四氢呋喃中进行)，可使醇羟基甲基化，但因氧化银具有氧化作用，只能用于苷的甲基化．而不能用于还原糖的甲基化。

七、糖链结构的测定现在是9页\一共有18页\编辑于星期日(3)Kuhn改良法：在二甲基甲酰胺(DMF)溶液中，加入碘甲烷和氧化银或硫酸二甲酯及氢氧比钡(或氧化钡)，在搅拌下进行甲基化。本法的缺点是反应较缓慢。(4)Hakomari法(箱守法)：二甲基亚砜(DMSO)，氢化钠，碘甲烷七、糖链结构的测定现在是10页\一共有18页\编辑于星期日

此法反应迅速、完全、无需特殊装置、可在室温下连续反应，是目前最常用的全甲基化方法。但因在反应中，所用二甲亚砜和NaH均呈强碱性，故分子中有酯键的苷类不宜用本法。七、糖链结构的测定现在是11页\一共有18页\编辑于星期日酶水解转化糖酶--------水解β-果糖苷键麦芽糖酶--------水解α-葡萄糖苷键杏仁苷酶--------水解β-葡萄糖苷键,专属性较低纤维素酶--------水解β-葡萄糖苷键NMR谱法测定利用端基质子的偶合常数如：5ppm(1H,d,J=7Hz)为下面哪个结构？七、糖链结构的测定-苷键构型的确定现在是12页\一共有18页\编辑于星期日一、提取植物体内，苷类常与水解该苷的酶共存。提原生苷：先杀酶。

常用的方法是在中药中加入CaCO3,或用甲醇、乙醇或沸水提取，同时提取过程中要尽量勿与酸或碱接触，以免苷类分解。提苷原：可利用酶活性

八、糖及苷类的提取和分离现在是13页\一共有18页\编辑于星期日八、糖及苷类的提取和分离化合物的极性功能基的种类：(-COOH)>(-OH)>(–C=O)>(-COOR)>-O->(-CnHm)极性功能个数分子内氢键降低极性化合物大小

小分子的极性大于大分子的极性常用溶剂极性：水>甲醇>乙醇>丙酮>乙酸乙酯>氯仿>乙醚>己烷H2O>MeOH>EtOH>CH3COCH3>EtOAc>CHCl3>EtOEt>CH3(CH2)4CH3现在是14页\一共有18页\编辑于星期日流程图八、苷类的提取和分离现在是15页\一共有18页\编辑于星期日糖和苷的提取分离药材水水提液3倍量以上乙醇醇水溶液沉淀（苷）（多糖）现在是16页\一共有18页\编辑于星期日多糖提取分离

（一）提取

水提得到的粗多糖水溶液，加入95%乙醇使含醇量达80%，4摄氏度静置过夜，多糖析出。减压抽滤，用95%乙醇洗至溶液无色。沉淀（多糖）挥干醇。

（二）除蛋白

这是至关重要的一步，由于蛋白是大分子，它的存在会干扰多糖的纯化。一般选用sevage法萃取或离心，多糖浓度为1mg/ml,氯仿-正丁醇比例通常在3:1-5:1之间，变性的蛋白质一般在两相交界处产生一条白色的带。

（三）检测

除蛋白前后用紫外分光光度计检测280nm（蛋白质）和260nm（核酸）下的吸收值，多糖浓度为0.4mg/ml对照验证除蛋白的效果。现在是17页\一共有18页\编辑于星期日(四)离子交换纤维素(DEAE-纤维素)进行初步分离一般选用DE-52型离子交换纤维素（二乙氨基乙基纤维素52）

<1>柱的预处理

加蒸馏水浸泡过夜，期间换几次水，每次除去细小颗粒，用0.5mol/LHCl溶液浸泡1~2h,蒸馏水漂洗至中性；再用0.5mol/LNaOH溶液浸泡1~2h,蒸馏水漂洗至中性。

<2>洗脱

样品浓度在20mg/ml左右。先用水洗脱，再用N