西昌学院基础生物实验中心

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生物化学实验编辑课件一、实验目的

生物化学是一门实验性学科，是生物系专业基础课程。它的作用是为生物其他学科提供必要的生物化学基础知识，通过与各课程相配合的实验使学生受到有关生物化学的基础实验技术训练，并验证与加深理解课堂讲授内容，同时与应用测定技术相结合，使学生扩大生化实验的应用范围，提高分析问题解决问题的能力。编辑课件二、实验要求

生化实验通过学习滴定，比色，层析，电泳等生化制备基础实验技术，以及实验方法，操作技术，仪器的使用，来分析生物体中糖，蛋白质，核酸，酶，维生素等生化物质及代谢过程，培养学生具有初步的科学使用能力及严格的科学作风，掌握基本的生化研究技能为深入各学科研究打下良好基础。编辑课件三、课时安排

本实验总学时数为30学时每次实验3学时编辑课件

实验室要求

一、实验课的目的1、加深理解：加深对生物化学基本理论的理解。2、掌握技术：掌握生物化学的基本实验方法和实验技术（四大基本技术：离心、电泳、层析、比色）及分子生物学的一些基本技术和方法。3、培养能力：培养学生的思维能力、动手能力和表达能力。4、掌握精髓：科学的精髓是实事求是、敢于探索、善于创新的精神，要对实验中出现的一切反常现象进行讨论，并大胆提出自己的看法。编辑课件二、生化实验室规则和要求

1、预习：课前要预习实验教材，了解实验目的、原理，熟悉操作规程。2、秩序：自觉遵守纪律，维护教学秩序，不准迟到、早退，保持安静，严禁谈笑打闹，听从教师指导，未经教师同意，不得随意离开实验室。编辑课件3、整洁：实验台面必须保持整洁，仪器药品要井然有序，公用试剂用毕，应立即盖严放回原处，勿使药品试剂撒在实验台面和地面。实验完毕，需将药品试剂排列整齐，仪器要洗净倒置放好。全体同学由班长安排轮流值日，负责当天实验室卫生、安全和一些服务性工作，经教师验收合格后，方可离开实验室。编辑课件4、节约：使用仪器、药品、试剂及各种物品必须厉行节约，并节约水电。应特别注意保持药品和试剂的纯净，严防混杂、乱用和污染。使用和洗涤仪器应小心仔细，防止损坏，贵重仪器使用前应熟悉使用方法，严格遵守操作规程，严禁随意开动，发现故障后应立即报告指导教师，不要自己动手检修，如有损坏按学校规定赔偿。编辑课件

5、安全：时刻注意防火、防水、防电、防危险品、防事故，以免发生意外。

实验室内严禁吸烟。

使用乙醚、苯、乙醇、丙酮等易燃品时，不允许在电炉、酒精灯上直接加热。如有危险发生，应首先关掉电源；有机溶剂着火时，勿用水泼，以免扩大燃烧面积，可用沙土、灭火器具灭之。实验室内一切物品未经本室负责教师批准，严禁携带出室外，有毒物品尤其如此。借物必须办理登记手续。编辑课件实验一氨基酸的分离鉴定

-----纸层析法

一、【实验目的】学习纸层析的基本原理，掌握氨基酸分离鉴定的操作技术，学会分析未知样品。二、【实验仪器与材料】层析缸；喷雾器；层析滤纸；扩展剂；氨基酸溶液；显色剂编辑课件三、【实验原理】层析是利用混合物各组分物理化学性质（如：溶解度、吸附能力、电荷和分子量等）的差别，使各组分在支持物上集中分布在不同区域，借此将各组分分离。层析系统分为两个相：固定相和流动相。由于各组分受固定相的阻力和受流动相的推力影响不同，各组分移动速度也各异，从而使各组分得以分离。此法首先用于有色物质的分离，故又称色层析法。编辑课件层析法是近代生物化学最常用的分析法之一，此法可以分离性质极为相似、而用一般化学方法难以分离的各种化合物，如各种氨基酸、核苷酸、糖、蛋白质等。层析法有多种类型，根据所用两组分不同分为以下几类：吸附层析、分配层析、离子交换层析、凝胶层析和亲和层析等；根据操作方式不同分为：柱层析、薄层层析和纸层析等。编辑课件纸层析法：以滤纸为载体，滤纸上吸附着水（约含20%—22%）是经常用的固定相，此类有机溶剂如醇、酚等为常用的流动相。把欲分离的物质加在纸的一端，使流动溶剂经此移动，这样就在两相间发生分配现象。由于物质分配系数的不同，就逐渐在纸上集中于不同的部位。在固定相中分配趋势较大的成份，随流动相移动的速度就慢；反之，在流动相分配趋势较小的成分，移动速度就快。编辑课件物质在纸上移动的速度可以用Rf表示：

色斑中心至原点中心的距离

Rf=──────────────

溶剂前缘至原点中心的距离物质在一定溶剂中的分配系数是一定的，故移动速率（Rf值）也恒定，因此，可以根据Rf值来鉴定被分离的物质。编辑课件纸层析法按操作方法分成两类，即：垂直型和水平型。垂直型是将滤纸条悬起，使流动相向上或向下扩散；水平型是将圆形滤纸置于水平位，溶剂由中心向四周扩散。编辑课件如果样品成分较多，而且彼此的Rf值相近，单向层析分离效果不佳，可用双向层析法，即在长方形或方形滤纸的一角点样，卷成圆筒形，先用第一种溶剂系统展开，展开完毕吹干后转90º，再放于另一种溶剂系统中，向另一方向进行第二次展开，如此各成分分离较为清晰。编辑课件编辑课件四、【主要内容】1．将盛有平衡溶剂的小烧杯置于密闭的层析缸中。

2．取层析滤纸(长22cm、宽14cm)一张。在纸的一端距边缘2~3cm处用铅笔划一条直线，在此直线上每间隔2cm作一记号编辑课件3．点样用毛细管将各氨基酸样品分别点在这6个位置上，干后再点一次。每点在纸上扩散的直径最大不超过3mm。4．扩展用线将滤纸缝成筒状，纸的两边不能接触。将盛有约20mL扩展剂的培养皿迅速置于密闭的层析缸中，并将滤纸直立于培养皿中(点样的一端在下，扩展剂的液面需低于点样线1cm)。待溶剂上升15~20cm时即取出滤纸，用铅笔描出溶剂前沿界线，自然干燥或用吹风机热风吹干。编辑课件5．显色用喷雾器均匀喷上0.1％茚三酮正丁醇溶液然后置烘箱中烘烤5分钟(100℃)或用热风吹干即可显出各层析斑点。6．计算各种氨基酸的Rf值。编辑课件五、【作业】1．何谓纸层析法？2．何谓Rf值?影响Rf值的主要因素是什么?3．怎样制备扩展剂?4．层析缸中平衡溶剂的作用是什么？编辑课件

实验二蛋白质的性质实验（一）

----蛋白质及氨基酸的呈色反应一、【实验目的】1.了解构成蛋白质的基本结构单位及主要连接方式2.了解蛋白质和氨基酸的呈色反应原理3.学习几种常用的鉴定蛋白质和氨基酸的方法。编辑课件二、【实验仪器与材料】

蛋白质溶液（新鲜鸡蛋清加水配制的溶液）；大豆提取液；头发；指甲；考马斯亮蓝；尿素；氢氧化钠；硫酸铜；氨基酸；茚三酮；

编辑课件三、【实验原理】（一）双缩脲反应尿素加热至l80℃左右，生成双缩脲并放出一分子氨。双缩脲在碱性环境中能与Cu2+结合生成紫红色化合物，此反应称为双缩脲反应。蛋白质分子中有肽键，其结构与双缩脲相似，也能发生此反应。可用于蛋白质的定性或定量测定。编辑课件编辑课件编辑课件双缩脲反应不仅为含有两个以上肽键的物质所有。含有一个肽键和一个——CS——NH2，——CH2—NH2，——CRH—NH2，——CH2——NH2——CHNH2——CH2OH或——CHOHCH2NH2等基团的物质以及乙二酰二胺等物质也有此反应。NH3也干扰此反应，因为NH3与Cu2+可生成暗蓝色的络离子Cu(NH3)42+。因此，一切蛋白质或二肽以上的多肽都有双缩脲反应，但有双缩脲反应的物质不—定都是蛋白质或多肽。编辑课件(二)茚三酮反应

除脯氨酸、羟脯氨酸和茚三酮反应产生黄色物质外，所有a-氨基酸及一切蛋白质都能和茚三酮反应生成蓝紫色物质。

β-丙氨酸、氨和许多一级胺都呈正反应。尿素、马尿酸、二酮吡嗪和肽键上的亚氨基不呈现此反应。因此，虽然蛋白质和氨基酸均有茚三酮反应，但能与茚三酮呈阳性反应的不一定就是蛋白质或氨基酸。在定性、定量测定中，应严防干扰物存在。该反应十分灵敏，1：1500000浓度的氨基酸水溶液即能给出反应，是一种常用的氨基酸定量测定方法。编辑课件茚三酮反应分为两步，第一步是氨基酸被氧化形成CO2、、NH3和醛，水合茚三酮被还原成还原型茚三酮；第二步是所形成的还原型茚三酮同另一个水合茚三酮分子和氨缩合生成有色物质。编辑课件(三)黄色反应

含有苯环结构的氨基酸，如酪氨酸和色氨酸，遇硝酸后，可被硝化成黄色物质，该化合物在碱性溶液中进一步形成深多数蛋白质分子含有带苯环的氨基酸，所以有黄色反应，苯丙氨酸不易硝化，需加入少量浓硫酸才有黄色反应。编辑课件(四)考马斯亮蓝反应考马斯亮蓝G250具有红色和蓝色两种色调。在酸性溶液中，其以游离态存在呈棕红色；当它与蛋白质通过疏水作用结合后变为蓝色。它染色灵敏度高，比氨基黑高3倍。反应速度快，约在2分钟左右时间达到平衡，在室温一小时内稳定。在0.01~1.0mg蛋白质范围内，蛋白质浓度与A595nm值成正比。所以常用来测定蛋白质含量。编辑课件四、【主要内容】内容：蛋白质和氨基酸与显色剂反应呈现一定的颜色反应步骤：双缩尿反应；茚三酮反应；黄色反应；考马斯亮蓝反应编辑课件五、【作业】通过本实验你掌握了几种鉴定蛋白质和氨基酸的方法?它们的原理?

实验总结编辑课件

实验三

蛋白质性质实验（二）

蛋白质的等电点测定和沉淀反应一、【实验目的】1.了解蛋白质的两性解离性质2.学习测定蛋白质等电点的一种方法3.加深对蛋白质胶体溶液稳定因素的认识4.了解沉淀蛋白质的几种方法及实用意义5.了解蛋白质变性与沉淀的关系6.掌握临床常规定性检验蛋白的方法编辑课件二、【实验仪器与材料】材料：水浴锅；温度计；鸡蛋；乳钵药品：醋酸；酪蛋白；醋酸纳；硝酸银；硫酸铵；氯化钡；甲基红；碳酸钠；氢氧化钠；盐酸；黄基水杨酸编辑课件三、【实验原理】

（一）、蛋白质分子的解离状态和解离程度受溶液的酸碱度影响。当溶液的pH达到一定数值时，蛋白质颗粒上正负电荷的数目相等，在电场中，蛋白质既不向阴极移动，也不向阳极移动，此时溶液的pH值称为此种蛋白质的等电点。不同蛋白质各有其特异的等电点。在等电点时，蛋白质的理化性质都有变化，可利用此种性质的变化测定各种蛋白质的等电点。最常用的方法是测其溶解度最低时的溶液pH值。编辑课件蛋白质是两性电解质。在蛋白质溶液中存在下列平衡：编辑课件（二）、在水溶液中的蛋白质分子由于表面生成水化层和双电层而成为稳定的亲水胶体颗粒，在一定的理化因素影响下，蛋白质颗粒可因失去电荷和脱水而沉淀。蛋白质的沉淀反应可分为两类。

(1)可逆的沉淀反应此时蛋白质分子的结构尚未发生显著变化，除去引起沉淀的因素后，蛋白质的沉淀仍能溶解于原来的溶剂中，并保持其天然性质而不变性。如大多数蛋白质的盐析作用或在低温下用乙醇(或丙酮)短时间作用于蛋白质。提纯蛋白质时，常利用此类反应。编辑课件(2)不可逆沉淀反应此时蛋白质分子内部结构发生重大改变，蛋白质常变性而沉淀，不再溶于原来溶剂中。加热引起的蛋白质沉淀与凝固，蛋白质与重金属离子或某些有机酸的反应都属于此类。蛋白质变性后，有时由于维持溶液稳定的条件仍然存在（如电荷），并不析出。因此变性蛋白质并不一定都表现为沉淀，而沉淀的蛋白质也未必都已变性。编辑课件（三）、正常人尿中只含微量蛋白质，不能用临床常规方法测定出来。用临床常规方法能检查出蛋白质的尿称为蛋白尿。患肾脏病的人(如患肾小球肾炎、肾盂肾炎)往往有蛋白尿，因而尿中蛋白质的检查在临床上具有重要的诊断意义。编辑课件四、【主要内容】1.蛋白质等电点的测定2.蛋白质的沉淀与变性3.尿蛋白定性检验编辑课件五、【作业】何谓蛋白质的等电点和沉淀反应？有何实用意义？实验总结编辑课件

实验四血清蛋白的醋酸纤维薄膜电泳一、【实验目的】

学习醋酸纤维薄膜电泳的操作，了解电泳技术的一般原理编辑课件二、【实验仪器与材料】材料：醋酸纤维薄膜；电泳仪；培养皿；玻璃板；白磁反应板；镊子；点样器药品：巴比妥缓冲液；氨基黑；醋酸；甲醇；乙醇

编辑课件三、【实验原理】

醋酸纤维薄膜电泳是用醋酸纤维薄膜作为支持物的电泳方法。醋酸纤维薄膜由二乙酸纤维素制成，它具有均一的泡沫样的结构，厚度仅120um，有强渗透性，对分子移动无阻力,作为区带电泳的支持物进行蛋白电泳有简便、快速、样品用量少，应用范围广，分离清晰，没有吸附现象等优点。目前已广泛用于血清蛋白、脂蛋白、血红蛋白，糖蛋白和同工酶的分离及用在免疫电泳中。编辑课件四、【主要内容】1．浸泡用镊子取醋酸纤维薄膜1张(识别出光泽面与无光泽面，并在角上用笔做上记号)放在缓冲液中浸泡20分钟。

2．点样把膜条从缓冲液中取出，夹在两层粗滤纸内吸干多余的液体，然后平铺在玻璃板上(无光泽面朝上)，将点样器先在放置在白磁反应板上的血清中沾一下，再在膜条一端2~3cm处轻轻地水平地落下并随即提起，这样即在膜条上点上了细条状的血清样品。编辑课件编辑课件3．电泳在电泳槽内加入缓冲液，使两个电极槽内的液面等高，将膜条平悬于电泳槽支架的滤纸桥上(先剪裁尺寸合适的滤纸条，取双层滤纸条附着在电泳槽的支架上，使它的一端与支架的前沿对齐，而另—端浸入电极槽的缓冲液内。用缓冲液将滤纸全部润湿并驱除气泡，使滤纸紧贴在支架上，即为滤纸桥(它是联系醋酸纤维薄膜和两极缓冲液之间的“桥梁”)。膜条上点样的一端靠近负极。盖严电泳室。通电。调节电压至160v，电流强度0．4~0.7mA／cm(毫安／厘米)膜宽，电泳时间约为25分钟。编辑课件4．染色电泳完毕后将膜条取下并放在染色液中浸泡10分钟。5．漂洗将膜条从染色液中取出后移置到漂洗液中漂洗数次至无蛋白区底色脱净为止，可得色带清晰的电泳图谱。编辑课件编辑课件五、【作业】1．用醋酸纤维薄膜做电泳支持物有什么优点?2．电泳图谱清晰的关键是什么？如何正确操作?编辑课件

实验五酪蛋白的制备

一、【实验目的】学习从牛乳中制备酪蛋白的原理和方法

编辑课件二、【实验仪器与材料】离心机；酸度计；牛奶；乙醇；乙醚；醋酸-醋酸钠；编辑课件三、【实验原理】

蛋白质通过分离纯化得到纯的或比较纯的蛋白质是研究蛋白质最基本的起点。必须熟悉并掌握蛋白质特有的理化性质，确定合适的分离制备方案。这包括生物材料的选择和处理，目的蛋白质的提取、分离、纯化和鉴定。编辑课件

蛋白质纯化分离的基本目标是得到足够量的具有天然生物学活性的蛋白质，为此，在整个分离纯化过程中必须避免蛋白质的变性和降解。抽提蛋白质的第一步是将组织粉碎、破坏细胞，一般用低浓度缓冲溶液提取。

编辑课件四、【主要内容】

取新鲜牛乳，用酸碱调PH到酪蛋白的等电点沉淀析出酪蛋白，然后洗涤，醇醚吸水至干燥得粉末称重，计算提取率。步骤：保温→调PH→沉淀→离心→洗涤→干燥→称量编辑课件五、【作业】结果与分析编辑课件

实验六甲醛法测定氨基氮

一、【实验目的】初步掌握甲醛滴定法测定氨基酸含量的原理和操作要点编辑课件二、【实验仪器与材料】器材1．25mL锥形瓶2．3mL微量滴定管3．吸管试剂1．0.1mo1/L标准甘氨酸溶液300mL

准确称取750mg甘氨酸，溶解后定容至100mL。2．0.1mo1/L标准氢氧化钠溶液500mL3．酚酞指示剂20mL0.5％酚酞的50％乙醇溶液4．中性甲醛溶液

编辑课件三、【实验原理】

氨基酸是两性电解质，在水溶液中有如下平衡：编辑课件是弱酸，完全解离时PH为11~12或更高，若用碱滴定一NH3、所释放的H+来测量氨基酸，一般指示剂变色域小于10，很难准确指示终点。常温下，甲醛能迅速与氨基酸的氨基结合,生成羟甲基化合物，使上述平衡右移，促使一NH3释放H+，使溶液的酸度增加，滴定终点移至酚酞的变色域内(pH9．0左右)。因此，可用酚酞作指示剂，用标准氢氧化钠溶液滴定。编辑课件编辑课件

如样品为一种已知的氨基酸，从甲醛滴定的结果可算出氨基氮的含量。如样品是多种氨基酸的混合物，如蛋白水解液，则滴定结果不能作为氨基酸的定量依据。但此法简便快速，常用来测定蛋白质的水解程度。随水解程度的增加滴定值也增加，滴定值不再增加时，表示水解作用已完全。编辑课件四、【主要内容】1．取3个25mL的锥形瓶，编号。向第1、2号瓶内各加入2mL0．1mo1／L的标准甘氨酸溶液和5mL水，混匀。向3号瓶内加入7mL水。然后向3个瓶中各加入5滴酚酞指示剂，混匀后各加2mL甲醛溶液，再混匀，分别用0.1mo1/L标准氢氧化钠溶液滴定至溶液显微红色。

重复以上实验2次，记录每次每瓶消耗标准氢氧化钠溶液的mL数。取平均值，计算甘氨酸氨基氮的回收率。

编辑课件2．取未知浓度的甘氨酸溶液2mL，依上述方法进行测定，平行做几份，取平均值。计算每mL甘氨酸溶液中含有氨基氮的mg数。式中：V未为滴定待测液耗用标准氢氧化钠溶液的平均mL数。V对为滴定对照液（3号瓶）耗用标准氢氧化钠溶液的平均mL数。mo1／LNaOH为标准氢氧化钠溶液的真实摩尔浓度。编辑课件五、【作业】选用酚酞指示剂，为什么滴定的是氨基？结果与分析编辑课件

实验七酵母核糖核酸的分离及组分鉴定

一、【实验目的】

了解核酸的组分，并掌握鉴定核酸的方法编辑课件二、【实验仪器与材料】材料：恒温水浴锅；抽滤瓶；离心机；乳钵；酵母药品：氢氧化钠；乙醇；盐酸；硫酸；硝酸盐；苔黑酚；钼酸铵；抗坏血酸；编辑课件三、【实验原理】酵母核酸中RNA含量较多。RNA可溶于碱性溶液，在碱提取液中加入酸性乙醇溶液可以使解聚的核糖核酸沉淀，由此即得到RNA的粗制品。核糖核酸含有核糖、嘌呤碱、嘧啶碱和磷酸各组分。加硫酸煮沸可使其水解，从水解液中可以测出上述组分的存在。利用物质的沉降系统、质量、浮力等不同因素，应用强大的离心力使物质分离的方法称离心法。编辑课件四、【主要内容】

将15g酵母悬浮于90mL0.04mol/L氢氧化钠溶液中，并在乳钵中研磨均匀。将悬浮液转移至150毫升锥形瓶中。在沸水浴上加热30分钟后，冷却。离心(3000r／min)15分钟，将上清液缓缓倾入30mL酸性乙醇溶液中。注意要一边搅拌一边缓缓倾入。待核糖核酸沉淀完全后，离心(3000r／min)3分钟。弃去清液。用95％乙醇洗涤沉淀两次，乙醚洗涤沉淀一次后，再用乙醚将沉淀转移至布氏漏斗中抽滤。沉淀可在空气中干燥。编辑课件取200mg提取的核酸，加入1.5mol/L硫酸溶液10mL，在沸水浴中加热10分钟制成水解液并进行组分的鉴定。

1．嘌呤碱取水解液1mL加入过量浓氨水，然后加入约1mL0.1mol/L硝酸银溶液，观察有无嘌呤碱的银化合物沉淀。编辑课件2．核糖取1支试管加入水解液1mL、三氯化铁浓盐酸溶液2mL和苔黑酚乙醇溶液0．2mL。放沸水浴中10分钟。注意溶液是否变成绿色，说明核糖的存在。3．磷酸取1支试管，加入水解液1mL和定磷试剂1mL。在水浴中加热，观察溶液是否变成蓝色，说明磷酸是否存在。编辑课件五、【作业】1．如何得到高产量RNA的粗制品？2．本实验RNA组分是什么？怎样验证的？编辑课件

实验八酶的特性

一、【实验目的】

加深对酶的性质的认识编辑课件二、【实验仪器与材料】恒温水浴锅；酵母；唾液；碘液；氯化钠；淀粉；柠檬酸；氯化钠；硫酸铜；硫酸钠；蔗糖；柠檬酸钠编辑课件三、【实验原理】1、淀粉受唾液淀粉酶的作用水解成麦芽糖和少量葡萄糖。通常以测定淀粉水解的程度（底物减少）或麦芽糖生成的数量（产物增加）来衡量淀粉酶的活性。麦芽糖和葡萄糖都具有还原性，能使班氏试剂中的二价铜离子（Cu2+）还原成一价铜离子（Cu+）生成砖红色的氧化亚铜沉淀。而蔗糖不能被水解也不具有还原性，故不能被班氏试剂还原。编辑课件2、酶的活性受温度的双重影响。低温时酶活性表现较低，在一定范围内，酶活性随温度上升而增高。通常每升高10℃，反应速度增加一倍左右；另一方面，温度越高使酶蛋白变性越快，致使酶活性随温度上升而降低，以致完全丧失活性。当酶促反应速度达到最大值时的温度，称为酶作用的最适温度。编辑课件本实验以唾液淀粉酶对淀粉的消化作用为例，观察0℃、37℃和100℃三种温度对酶活性的影响。实验中各管除温度外，其它反应条件皆相同。唾液淀粉酶可催化淀粉逐步水解成各种不同大小的糊精及麦芽糖。它们遇碘呈现不同的颜色反应，故可利用碘反应的颜色对比来判定不同温度下酶活性的大小。编辑课件3、酶的活性受环境pH的影响极为显著。因pH影响酶蛋白和底物的解离状态，从而明显改变酶与底物的结合和催化作用。每一种酶在一定的条件下都有它发挥作用的最适pH，此时酶的活性最大。当其它条件相同时，离最适pH越近，其活性越大，即所催化的反应速度越快。本实验利用唾液淀粉酶对淀粉的水解作用，在其它条件相同时，对比观察pH变化对酶活性的影响，用碘反应判断结果。编辑课件四、【主要内容】1.温度对酶活力的影响2.PH对酶活力的影响3.激活剂及抑制剂对酶活力的影响4.酶的专一性编辑课件五、【作业】1．什么是酶的特异性？本实验结果为什么能说明酶具有这种性质？2．何为酶的绝对、相对专一性？通过实验说明蔗糖酶具有何种专一性？3．说明温度对酶活性影响的本质。请举出应用温度对酶影响的实例。利用最适温度、零下及沸水浴温度各有何实践意义？4．酶促反应的最适温度是酶的特征物理常数吗？它与哪些因素有关？编辑课件5．实验二中为什么控制2号管碘反应到阴性时向各管加碘液？实验设计中1号管的作用是什么？有无必要？6．联系实验结果及所学理论，说明pH对酶活性的影响有什么规律和实际意义？7．通过本次酶学实验，你对下面问题如何认识？⑴酶作为生物催化剂具有哪些特征？⑵进行酶学实验必须注意控制哪些条件？为什么？编辑课件

实验九发酵过程中无机磷的利用

一、【实验目的】掌握定磷法的原理和操作技术了解发酵过程中无机磷的利用编辑课件二、【实验仪器与材料】

分光光度计；恒温水浴锅；乳钵；新鲜酵母；磷酸盐；三绿乙酸；钼酸铵；1，2，4，-氨基萘酚磺酸钠编辑课件三、【实验原理】（一）比色和分光分析法原理光线的本质是电磁波的一种，有与电磁波和X线类同的性质。光线有不同的波长，肉眼可见彩色光称为可见光，波长范围在400~750nm，小于400nm的光线称为紫外线，大于750nm的光线称为红外线，如表所示。编辑课件分光光度法采用适当的光源、棱镜和适当的光源接受器。可使介质浓度测定范围不仅仅局限于可见光，尚可扩大到紫外光区和红外光区。经单色器（棱镜）得到的光源虽说不是纯的单色光，但波长范围更狭窄，也更符合Lambert-Beer定律，使灵敏度大为提高。编辑课件四、【主要内容】内容：酵母能使蔗糖和葡萄糖发酵产生乙醇和二氧化碳，但发酵过程中需经磷酸化作用生成磷酸酯，无机磷与钼酸形成的磷钼酸络合物能被氨基萘酚磺酸钠还原成钼蓝，因此，测定发酵前后反应混合物中无机磷的含量，来观察发酵过程中无机磷的消耗。步骤：1.标准曲线的制