(42)-唾液斑的特点和证明

遗传标记唾液斑的特点和证明学习目标

了解：唾液及唾液斑的特点、功能和提取唾液斑的证明方法一、唾液及唾液斑-概念唾液（saliva）：人或动物口腔内分泌的无色液体。唾液斑（salivarystain）：唾液在载体上干燥后形成的斑痕，是法医物证检验中常见的生物检材。现场发现的烟头、瓜子皮、嚼过的口香糖、喝过水的杯子等都属于唾液斑检材。一、唾液及唾液斑的特点-来源唾液主要由三大唾液腺（腮腺、颌下腺、舌下腺）和口腔黏膜下小唾液腺的分泌物所组成。分泌量：540-640ml颌下腺：60%腮腺：20%-25%舌下腺：7%-8%小唾液腺：<8%一、唾液及唾液斑的特点-成分唾液水：>99%固体成分：0.7%有机成分：粘/球蛋白、抗体、酶类、血型物质等无机成分：钠、钾、氯、氨、钙、磷酸盐、碳酸盐等少量气体：CO2、氧、氮口腔黏膜脱落上皮细胞、大量细菌以及食物残渣等一、唾液及唾液斑的特点-其他性状：正常纯净的唾液是无色、无味、粘稠性液体，pH5.6-7.6，平均6.8，接近中性，低渗。唾液的分泌量及性质受精神因素、刺激强度和性质影响，与食物种类也有一定关系。含黏蛋白多时，呈粘液状，含黏蛋白少时则较稀薄；吸烟者唾液中硫氰酸化合物含量明显增多；龋齿患者唾液中乳酸含量增加。一、唾液及唾液斑的特点-其他唾液斑在白色背景下呈现淡黄色，紫外线下发淡青色荧光。面罩上的唾液在白光灯下面罩上的唾液在高强度紫光灯下纸上的唾液在白光灯下纸上的唾液在高强度紫光灯下唾液及唾液斑的检验目的与要求目的：个人识别。唾液中含有的血型物质及口腔黏膜脱落上皮细胞中的DNA，使得少量唾液斑即可进行个人识别；亲子鉴定亦可采取被鉴定人的唾液测定DNA多态性等。要求：先确定检材是否为唾液斑，确证唾液斑后再做个人识别。由于含唾液斑的检材通常出现在人们日常生活用品或物品上，例如口杯、烟头、果核等，故确证唾液斑后，可直接进行个人识别，不必进行种属鉴定。但在鉴定咬痕的唾液斑时，需确定是人咬痕还是动物咬痕。二、唾液斑的证明-概述唾液中含有大量的淀粉酶（amylase），要分析检材是否唾液（斑）时，可检查淀粉酶。但人体粪便、几乎所有的植物、发芽种子和真菌中均含淀粉酶，人体其他分泌液如鼻涕、尿、精液等也含少量淀粉酶，因此仅凭在斑痕中检出淀粉酶，不能确证唾液（斑）。如果在检材中同时检出口腔黏膜脱落上皮细胞，则可确证唾液斑。二、唾液斑的证明-淀粉酶的检测原理淀粉-碘试验（starch-iodineassay）是检查唾液斑中淀粉酶常用的方法。唾液中的淀粉酶较稳定，自然干燥、保存几个月的唾液斑仍可检出。原理：淀粉遇碘（I2）呈蓝色。唾液中含有大量淀粉酶，能将淀粉分解为糖，糖与碘不呈蓝色反应。因此，将已知淀粉溶液与唾液斑作用后再加碘，若不显蓝色，说明反应体系中淀粉已被唾液淀粉酶分解。然后再利用糖的还原作用验证淀粉分解产物糖的存在，便可判断检材中含有淀粉酶。二、唾液斑的证明-淀粉酶的检测方法首先证明斑痕中是否含有淀粉酶。制样：取斑痕约0.2cm2，同时取无斑痕检材作对照，分置于试管内。加0.01%淀粉溶液0.1ml，将试管放入37℃温箱中60分钟，制成检材淀粉液。加碘：在检材淀粉液中加碘液1滴，观察颜色变化。对照管立即出现蓝色。检材管无色或呈淡黄色，为阳性反应，证明检材中含有淀粉酶，可疑斑痕可能为唾液斑；若检材管出现蓝色，则为阴性，证明检材不含淀粉酶或酶已失活，不能证明检材是唾液斑。二、唾液斑的证明-淀粉酶的检测方法淀粉-碘反应阳性者可进一步证明糖的存在（糖的还原作用）。方法：取检材淀粉液2滴置于试管中，加碱性铜溶液或1%氯化三苯基四氮唑液2滴，在火焰上短时加热。结果：出现红至棕红色沉淀为阳性反应，不出现沉淀为阴性反应。灵敏度：本试验灵敏度较高，5年以上的唾液斑，或唾液斑经100℃加热20分钟或200-300℃加热15分钟，均呈阳性反应。二、唾液斑的证明-糖类的还原作用原理：许多糖类由于其分子中含有自由的或潜在的醛基或酮基，故在碱性溶液中能将铜、铋、汞、铁、银等金属离子还原，同时糖类本身被氧化成糖酸及其他产物。糖类这种性质常被利用于检测糖的还原性及还原糖的定量测定。二、唾液斑的证明-口腔黏膜脱落上皮细胞的检查唾液中含有口腔黏膜脱落上皮细胞。将检材斑用生理盐水充分浸泡，用玻棒轻轻搅拌，使细胞脱离，弃去载体，离心沉淀，取残渣涂片，用HE染色后显微镜观察，如发现口腔粘膜脱落非角化磷状扁平上皮细胞，以多角形为主，结合淀粉酶结果阳性,可判断为唾液斑。三、唾液斑的证明