实验诊断学 实验2血涂片制作、染色白细胞分类计数

实验2血涂片制作、染色

白细胞分类计数2023/3/262一、白细胞分类计数

白细胞分类计数是将血液制备成涂片，瑞氏染色后显微镜下根据白细胞的形态特征进行分类计数。通常分类100个白细胞，计算得出各种白细胞所占百分比。

2023/3/263染色原理：瑞氏染料溶于甲醇，离解为带正电的碱性美兰（M+）和带负电的酸性伊红（E-）离子。细胞的染色既有物理的吸附作用，又有化学的亲和作用。各种细胞成分的化学性质不同，对染料的亲和力也不一样，故可呈不同的着色特点。2023/3/264血红蛋白、嗜酸性颗粒为碱性物质，故与酸性染料伊红结合而染成红色，呈嗜酸性。细胞核的核蛋白与原、幼细胞的胞浆为酸性物质，故与碱性染料美兰和天青结合，染成深蓝色或深紫红色，呈嗜碱性。中性颗粒与美兰和伊红同时结合而染为淡紫红色，呈嗜中性。2023/3/265[器材]光学显微镜推片，载玻片[试剂]Wright染液

Wright1.0g

甲醇600ml磷酸盐缓冲液（PH6.4～6.8）香柏油[标本来源]EDTA-K2抗凝全血2023/3/266[操作]

推片：血膜厚薄适中，边缘整齐，外观呈舌形，头、体、尾分明，两边留有一定空隙。干燥标记

1.制备血涂片

2023/3/267血涂片制作2023/3/2682．染色

准备：血膜干透后，用蜡笔在两端划线，以防止染色时染液外溢。将血涂片放染色架上。加染液：在涂片上滴加瑞氏染液5～10滴，以染液覆盖整个血膜为度，稍静置0.5～1min。加缓冲液：滴加缓冲液5～10滴，与上述染液充分混匀。染色：染色5～10min.冲洗：不要先倒掉染液，平持血涂片用流水缓缓冲洗干净。干燥：直立血涂片，使其自然干燥。2023/3/2693．白细胞分类：

先用低倍镜选择厚薄适宜，染色良好，细胞分布均匀的体尾交界处，滴加香柏油一滴，油镜下分类计数。分类时要有秩序的连续进行，避免主观选择视野。通常分类计数100个白细胞，计算并报告各种白细胞所占比例。

低倍镜下所见2023/3/2610各类成熟白细胞的形态学：

中性粒细胞（Ne）：圆形，直径10～13µm，胞浆染淡桔红色，核形可呈杆状核或2至5叶不等，以3叶多见，染成深紫红色，质地粗糙，胞浆中有许多细小均匀紫红色颗粒。2023/3/2611嗜酸性粒细胞（Eo）：较中性粒细胞稍大，胞核多为两叶，呈眼镜、八字形，核染色质粗糙染深紫红色，胞浆内充满粗大均匀的嗜酸性颗粒，瑞氏染色时呈桔红色，有折光性。2023/3/2612嗜碱性粒细胞（Ba）：胞浆中含有粗大、大小不均的兰黑色嗜碱性颗粒，颗粒有时会分布在细胞核上。于光学显微镜下常见胞浆中有小空泡，乃因嗜碱性颗粒易溶于水或因功能活动而脱颗粒所致；核呈淡紫红色常看不清，呈杆状或分叶状。2023/3/2613淋巴细胞（Ly）：胞体呈圆形，直径介于6～15µm之间。小淋巴细胞直径6～9µm，核大呈深紫色致密而浓染，质地粗块状，胞浆量极少；大淋巴细胞胞浆量较多，呈透明淡蓝色，可见少量深紫红色颗粒，胞核圆或椭圆，常偏向细胞一侧，染色较深。2023/3/2614单核细胞（Mo）：在瑞氏染色涂片上为12～20µm，胞体圆形、椭圆形或不规则形；核形多种多样，最重要的特点是染色质较细致疏松呈丝网状或条缕状，胞浆较多着色较淡呈淡灰蓝色，胞浆含大量细小尘土样颗粒。2023/3/2615正常成人外周血白细胞分类参考值：Ne0.5～0.7（50%～70%）Eo0.005～0.05（0.5%～5%）Ba0～0.01（0%～1%）Ly0.2～0.4（20%～40%）Mo0.03～0.08（3%～8%）[参考值]2023/3/2616结果记录方式：Ne正一Eo正Ly正Mo正Ba正外周血白细胞分类结果记录方式及要求分类要求：1、（3.0～15.0）×109/L，分100个WBC15.0×109/L以上，分200个WBC低于3.0×109/L，选2张玻片分50～100WBC2、有核红细胞应矫正，分类100WBC时，有核红N不计数在内，矫正=WBC×100÷（100+N）2023/3/26171.血涂片制备要厚薄适宜、均匀、头体尾分明，无溶血、无空洞。

2.很多因素影响涂片时血膜的厚度。血滴大、血粘度高、推片角度大、速度快则血膜厚，反之则血膜薄。

3.染色时间长短与染液性能、室温及细胞多少有关

4.加Wright染液或缓冲液后，切不可干涸

5.以流水冲去染液，以免留有残渣。

6.按一定顺序，有秩序地连续进行，避免选择视野。[注意事项]2023/3/26187.分类计数时，应同时报告RBC和WBC的形态是否有异常，有时还应观察血小板的分布情况。8.染色过深可用甲醇或酒精适当褪色9.染色时应注意保护血膜尾部细胞2023/3/2619中性粒细胞嗜酸性粒细胞淋巴细胞嗜碱性粒细胞（右）单核细胞血小板2023/3/2620

染色效果评价2023/3/2621实验步骤推片和标记：血膜干透后，用蜡笔在两端划线，以防止染色时染液外溢。将血涂片放染色架上。加染液：在涂片上滴加瑞氏染液5～10滴，以染液覆盖整个血膜为度，稍静置0.5～1min。再滴加缓冲液5～10滴，与上述染液充分混匀。