第二章第二节中药有效成分提取分离和结构鉴定

[基本要求]掌握:

溶剂提取法的原理；浸渍法、煎煮法、回流提取法和连续回流提取法的适用范围及特点；渗漉法的特点；两相溶剂萃取法的原理和方法；结晶纯度的判定；色谱法在中药化学成分分离中的应用。熟悉：其它内容。当前1页，总共74页。

提取分离中药有效成分有两种情况：

第一，从中药中提取已知的有效成分，或已知的化学结构类型者。第二，对中药有效成分的性质一无所知。

当前2页，总共74页。对中药所含成分进行提取时：使杂质不被提取出来或在处理过程中尽可能地除去杂质最后获得有效成分

当前3页，总共74页。

注意事项！！！

1、基原鉴定

2、查阅文献，了解前人的经验。3、对未知成分，综合考虑以上因素。4、化合物的结构与极性（1）极性基团与非极性基团的性质与数量。（2）分子体积大小。

当前4页，总共74页。（3）酸性基团加碱成盐为极性物质；碱性基团加酸成盐为极性物质；分子易于形成分子内氢键极性变小。

极性基团：-COOH、–OH、-NH2等

中等极性基团：-O-R、-COOR等

非极性基团：烷基等当前5页，总共74页。室温、加热，冷提杂质较少，冷时难溶，而热提效率较高，热时易溶；一般采用温和的条件，不用酸碱；水、有机溶剂（缺点）；有效成分伴有杂质时，溶解度显著增加；工厂生产方法和实验室方法。当前6页，总共74页。溶剂提取法水蒸气蒸馏法超临界流体萃取法升华法超声波提取法微波辅助提取法酶法、半仿生提取法破碎提取法压榨法中药化学成分提取方法分类当前7页，总共74页。1、溶剂提取法

选用适当的溶剂将中药中的被测成分溶出的方法。（1）原理

根据中药中有效成分在溶剂中的溶解性质，选用对有效成分溶解度大，对其他成分溶解度小的溶剂，而将有效成分从药材组织内溶解出来的方法。一、提取方法当前8页，总共74页。（2）溶剂选择

遵循“相似相溶”原则。即中药成分的亲水性或亲脂性应与溶剂的此项性质相当。

选择溶剂要注意以下三点：

①溶剂对有效成分溶解度大，对杂质溶解度小；②溶剂不能与中药的成分起化学变化；③溶剂要经济、易得、使用安全等。当前9页，总共74页。常用提取溶剂按极性由弱到强的顺序

石油醚＜四氯化碳＜苯＜二氯甲烷＜氯仿＜乙醚＜乙酸乙酯＜正丁醇＜丙酮＜乙醇＜甲醇＜水当前10页，总共74页。Simplepercolateassembly1、溶剂提取法（3）具体方法1)冷提：适用于受热不稳定的成分。浸渍(Maceration)渗漉（Percolation）一、提取方法当前11页，总共74页。工业生产用的渗漉装置一、提取方法当前12页，总共74页。2)热提：煎煮法（Decoction）

回流（Refluxing）

连续回流（ContinuousRefluxing）SimplerefluxingassemblyAssemblyofSoxhletextractor一、提取方法当前13页，总共74页。水

糖类、有机酸、酚类、鞣质、无机盐、氨基酸、蛋白质、果胶、苷类、水溶性生物碱甲醇、乙醇、丙酮

黄酮、蒽醌、有机酸、酚类、香豆素、苷类、生物碱及其盐正丁醇

皂苷当前14页，总共74页。乙酸乙酯：黄酮苷氯仿：乙醇＝2：1强心苷乙醚、氯仿

生物碱、苷元、醌

石油醚、己烷

蜡、树脂和叶绿素、挥发油、萜类、甾体、脂肪油、脂溶性色素、苷元当前15页，总共74页。2.水蒸气蒸馏法（water-steamdistillation）

提取具有挥发性，能随水蒸气蒸馏而不被破坏的成分，如挥发油。Simplewater-steamdistillationrefluxingassembly一、提取方法当前16页，总共74页。3.升华法（sublimation）

用于具有升华性的成分提取，如香豆素，蒽醌，樟脑等。一、提取方法当前17页，总共74页。超临界流体的密度与液体很接近，而它又具有气体扩散性能常用的临界流体有CO2、N2O、乙烷、丙烷等。4.超临界流体提取法（supercriticalfluidextractionSFE)

利用溶剂在超临界条件下特殊的流体性能对样品进行提取，为20世纪80年代迅速发展起来的一种提取方法。一、提取方法当前18页，总共74页。控温面板高压泵超临界CO2萃取实验装置示意图原料萃取柱玻璃珠脱脂棉超临界萃取实验装置与实验方法CO2钢瓶PCO2冷温槽恒温箱流量计接收瓶小试实验装置图实验装置－小试实验装置当前19页，总共74页。上世纪50年代初进入试验阶段，如从石油中脱沥青70、80年代，SFE越来越多的用于食品、香料的提取90年代，开始从植物药中提取成分，如蛇床子、茵陈蒿、桑白皮中提取成分。中小型SFE装置图当前20页，总共74页。为物理过程，无化学反应，生物活性不减。大能量的超声波产生的极大压力造成植物物细胞壁及整个生物体破裂，胞内物质的释放、扩散及溶解。5.超声提取法（ultrasonicextraction)实验室用小型超声仪一、提取方法当前21页，总共74页。工业生产用超声仪当前22页，总共74页。6.微波提取法（microwaveextraction）具有穿透力强、选择性高、加热效率高等显著特点，而且其操作简便、快速、节能、高效。缺点：工业化设备少、成分变化、生物活性变化。工业生产用微波提取罐一、提取方法当前23页，总共74页。二、分离与精制方法1、根据物质的分配比2、根据物质的溶解度3、根据物质的吸附性4、根据物质的解离程度5、根据物质的分子大小

当前24页，总共74页。二、分离与精制方法根据物质在两相溶剂中的分配比不同进行分离

（1）两相溶剂萃取法：利用混合物中各组成成分在两相溶剂（互相饱和的水相与有机相）中分配系数不同而达到分离的方法。分配系数K=C1/C2C1、C2为被分离物质在上相和下相中浓度当前25页，总共74页。影响分离的因素①分离因子β，分配系数Kβ=KA/KB②pH值对于酸性、碱性、两性化合物，pH值可改变它们的存在状态。当前26页，总共74页。二、分离与精制方法

药材甲醇或乙醇提取，回收醇当前27页，总共74页。两相溶剂萃取在操作中的注意要点：

①先用小试管猛烈振摇约1min，观察萃取后二液层分层现象。如果容易产生乳化，大量萃取时要避免猛烈振摇，可延长萃取时间。当前28页，总共74页。

乳化现象解决办法将乳化层分出，再用新溶剂萃取；或将乳化层抽滤；或将乳化层稍稍加热；或将乳化层稍稍加盐；或较长时间放置并不时旋转，令其自然分层；或离心。当前29页，总共74页。②水提取液的浓度最好在比重1.1～1.2之间，过稀则溶剂用量太大，影响操作。③溶剂与水溶液应保持一定量的比例。④一般萃取3～4次即可。⑤如为小量萃取，可在分液漏斗中进行；如系中量萃取，可在下口瓶中进行。

当前30页，总共74页。（2）酸碱性成分的分离—pH-梯度萃取法

按酸碱性强弱不同分离酸性、碱性、中性物质，改变pH值使酸碱成分呈不同状态。

酸水：0.1%-1%H2SO4、HCl、HOAc。

碱水：0.3～0.5％NaOH当前31页，总共74页。

酸性化合物可分为强酸性、弱酸性和酚性三种，它们分别溶于碳酸氢钠、碳酸钠和氢氧化钠，借此可达到分离。

内酯类化合物不溶于水，但遇碱开环生成羧酸盐溶于水，再加酸酸化，又重新形成内酯环从溶液中析出，从而与其它杂质分离。

当前32页，总共74页。生药H+/H2O药渣AlkOH-/H2OH+/H2OOH-弱碱及杂质亲水性Alk当前33页，总共74页。（3）液-液分配柱色谱法

色谱法或色谱学，又称为色层法或层析法，是一种物理化学分离和分析方法。色谱法是基于样品组分在互不相溶的两“相”溶剂之间的分配系数之差（分配层析），吸附剂对组分吸附能力不同（吸附层析），离子交换，分子的大小（排阻层析）的微小差异而分离。

当前34页，总共74页。

色谱法分类①按两相物理状态分类

流动相为气体称气相色谱，流动相为液体称液相色谱。固定相可以是液体或固体，可组合成四种色谱类型：气－固色谱GSC（gas-solidchromatography)

气－液色谱GLC(gas-liquidchromatography)

液—固色谱

LSC(liquid-solidchromatography)

液－液色谱LLC（Liquid-liquidchromatography)当前35页，总共74页。

②按固定相的形态分类

ⅰ.柱色谱(columnchromatograaphy)

固定相装在色谱柱内称为柱色谱。

ⅱ.平板色谱(planarchromatograaphy)

固定相呈平板状，包括薄层色谱和纸色谱。

A薄层色谱(TLC)固定相以均匀薄层涂敷在玻璃板或塑料板上，或将固定相直接制成薄板状

B纸色谱(PC)用滤纸作固定相或固定相载体的色谱当前36页，总共74页。③按分离过程物理化学原理分类

ⅰ吸附色谱(adsoptionchromatograaphy)

用固体吸附剂(硅胶、中性氧化铝、活性炭、聚酰胺)作色谱固定相，样品各组分在吸附剂上吸附力的大小不同，因而吸附平衡常数不同，据此可将各组分分离。

硅胶：皂苷、蒽醌苷、强心苷、生物碱氧化铝：生物碱、甾、萜活性炭：氨基酸、糖、苷聚酰胺：黄酮、蒽醌、鞣质当前37页，总共74页。ⅱ分配色谱(partitionchromatograaphy)

用液体作固定相，利用试样组分(亦称为溶质)在固定相中溶解、吸收或吸着(sorption)能力不同，因而在两相间分配系数不同将组分分离。在液－液分配色谱中，根据流动相和固定相相对极性不同，又分为:

A正相分配色谱

B反相分配色谱当前38页，总共74页。正相分配色谱,简称正相色谱(NPC):

以强极性、亲水性物质或溶液为固定相（氰基与氨基CN-NH2），非极性、弱极性或亲脂性溶剂为流动相，为正相分配色谱。分离：极性、中等极性分子当前39页，总共74页。反相分配色谱，简称反相色谱（RPC）：

若以弱极性、亲脂性物质为固定相（十八烷基硅烷ODS），极性、亲水性溶剂或水溶液为流动相(甲醇-水，乙腈-水），则称为反相分配色谱分离：非极性、中等极性分子当前40页，总共74页。（3）液-液分配柱色谱①正相色谱：固定相极性大，如水、缓冲液等；流动相极性小，如氯仿、乙酸乙酯等。载体：硅胶（含水可达17%），硅藻土，纤维素等。分离极性大或水溶性成分，如苷类、糖、生物碱等。洗脱顺序：极性小的物质先被洗脱出来。

当前41页，总共74页。②反相色谱：固定相极性小于流动相。如HPLC反相柱，反相板。固定相：硅胶硅醇基结合烷基，如RP-2，RP-8，RP-18。亲脂性：RP-18>RP-8>RP-2。流动相(洗脱剂)：MeOH-H2O，CH3CN-H2O洗脱顺序：分离极性小的成分，极性大者先洗脱下来。

当前42页，总共74页。（4）逆流连续萃取法（5）逆流分配法（CCD）

（6）液滴逆流分配法（DCCC）（7）高速逆流色谱（HSCCC）

当前43页，总共74页。二、分离与精制方法2.根据溶解度差别进行分离2.1沉淀法

定义：中药提取物的溶液加入某些试剂后可降低某些成分在溶液中的溶解度而自溶液中析出，或有些中药化学成分能与某些试剂生成沉淀的一种方法。

分类：试剂沉淀法、铅盐沉淀法、盐析法

当前44页，总共74页。二、分离与精制方法（1）试剂沉淀法

①分级沉淀法（水提醇沉法）②碱提酸沉法：酸性成分当前45页，总共74页。③酸提碱沉法：生物碱的分离④专属试剂沉淀法某些试剂能选择性地沉淀某类成分。

雷氏铵盐--生物碱；胆甾醇--甾体皂苷；明胶或蛋白质--鞣质。当前46页，总共74页。（2）铅盐沉淀法

原理：利用中性醋酸铅或碱式醋酸铅在水或稀醇溶液中能与许多物质生成难溶的铅盐或络盐，而用于分离中药成分。如中性醋酸铅用以沉淀有机酸、氨基酸、蛋白质、粘液质、鞣质、树脂、酸性皂苷、部分黄酮等。当前47页，总共74页。（3）盐析法

在混合物水溶液中加入易溶于水的无机盐（氯化钠、硫酸钠、硫酸镁、硫酸铵等），至一定浓度或饱和状态，使某些中药成分在水中溶解度降低而析出，或用有机溶剂萃取出来。当前48页，总共74页。二、分离与精制方法2.2结晶法（纯化时常用）

化合物由非晶形经过结晶操作形成有晶形的过程称为结晶。初析出的结晶往往不纯，进行再次结晶的过程称为重结晶。结晶经重结晶后所得各部分母液，再经处理又可分别得到第二批、第三批结晶，称为分步结晶法或分级结晶。

当前49页，总共74页。结晶的目的

一个固体成分达到了一定的纯度，在一定的条件下，就会呈结晶状，这样就可使结晶和母液分开，以达到进一步分离纯化的目的。当前50页，总共74页。结晶的条件1、有效成分在欲结晶的混合物中的含量2、合适的溶剂条件3、有效成分在所选择的溶剂中的浓度4、合适的温度和时间

当前51页，总共74页。3.1吸附分类：物理吸附：无选择性的吸附，吸附－解析发生迅速。吸附剂如硅胶、氧化铝、活性炭等；化学吸附：不可逆性。如碱性氧化铝对酚酸性成分的吸附等。半化学吸附：聚酰胺对酚酸类、醌类的氢键吸附。分离与精制方法3.

根据物质的吸附性差别进行分离——吸附色谱法当前52页，总共74页。吸附原理：相似相吸影响吸附过程的三要素：吸附剂（固定相）；溶质（被分离物质）；溶剂（洗脱剂，展开剂，流动相）二、分离与精制方法当前53页，总共74页。3.2硅胶、氧化铝：

极性吸附剂：载样量大，吸附力强

硅胶：应用最广，适用于各类成分分离

氧化铝：有中性、酸性、碱性氧化铝。碱性氧化铝不适合于分离酸性成分，多用于分离生物碱。二、分离与精制方法当前54页，总共74页。3.2硅胶、氧化铝：

①被分离物质吸附力与结构的关系被分离物质极性大，吸附力强，Rf值小，洗脱难，后被洗脱下来。比移值（Rf）＝原点中心至斑点中心的距离/原点中心至溶剂前沿的距离

二、分离与精制方法当前55页，总共74页。3.2硅胶、氧化铝：官能团极性大小排列顺序：-COOH>Ar-OH>R-OH>R-NH2，RNHR',RNR'R">R-CO-NR'R">RCHO>RCOR'>RCOOR'>ROR'>RH②溶剂(洗脱剂)的极性与洗脱力的关系洗脱剂极性越大,洗脱力越强。

二、分离与精制方法当前56页，总共74页。

练习:从黄花夹竹桃果仁中分离到七种强心苷成分,比较极性大小和硅胶柱上洗脱顺序。名称RR’黄夹苷ACHO(D-Glc)2黄夹苷BCH3(D-Glc)2黄夹次苷ACHOH黄夹次苷BCH3H黄夹次苷CCH2OHH黄夹次苷DCOOHH单乙酰黄夹次苷BCH3H单乙酰黄夹次苷BR”=COCH3,其它R”=H二、分离与精制方法当前57页，总共74页。二、分离与精制方法答案：1.极性大小：黄夹苷A＞黄夹苷B＞次苷D＞次苷C＞次苷A＞次苷B＞单乙酰次苷B2.硅胶柱上的出柱顺序：后先当前58页，总共74页。3.3活性炭——非极性吸附剂①吸附力与结构的关系分子量大者>分子量小者芳香族>脂肪族②洗脱力与溶剂的关系吡啶>醇>含水醇>H2O③应用:黄酮、生物碱的富集，糖的分离、脱色等。二、分离与精制方法当前59页，总共74页。3.4聚酰胺(Polyamide):是由己酰胺聚合成的一类高分子化合物。二、分离与精制方法分离原理：主要通过酰胺键与酚羟基、酸、醌等形成氢键，产生吸附作用。吸附力取决于形成氢键缔合的能力。当前60页，总共74页。

3.4聚酰胺①吸附力与结构的关系

a.形成氢键的基团数目越多,吸附力越强;

b.形成分子内氢键者,吸附力减少;

二、分离与精制方法当前61页，总共74页。d.芳香苷苷元>苷,单糖苷>双糖苷>叁糖苷

c.芳香化程度越高或共轭键越多,吸附力越强;二、分离与精制方法3.4聚酰胺①吸附力与结构的关系②溶剂的洗脱能力

水<含水醇<醇<丙酮<NaOH/H2O<尿素/H2O

当前62页，总共74页。3.4聚酰胺③常用溶剂：H2O，EtOH/H2O，EtOH

④应用:分离黄酮类；除鞣质。二、分离与精制方法当前63页，总共74页。3.5大孔吸附树脂(macro-reticularresin)①分离原理:吸附(范德华力和氢键)和分子筛作用(多孔性结构)

②树脂类型:非极性、中等极性和极性三种。

非极性：由苯乙烯和二乙烯苯缩合而成，故又称芳香吸附树脂。

中等极性：含脂基的吸附树脂。

极性：含酰氨基、氰基、酚羟基等含氮、氧、硫不同极性功能的吸附树脂。二、分离与精制方法当前64页，总共74页。3.5大孔吸附树脂

③洗脱剂:H2O及不同比例的含水醇。洗脱分离:H2O洗:糖，水溶性色素30%EtOH:极性大的成分50-75%EtOH:皂苷类95%EtOH:极性小成分

④应用:除多糖，水溶性色素，富集苷类成分二、分离与精制方法当前65页，总共74页。4.根据物质解离程度不同进行分离—离子交换法固定相：离子交换树脂（聚苯乙烯高分子化合物，引入交换基团）分类：

阳离子交换树脂：强酸型RSO3-H+

弱酸型RCOO-H+阴离子交换树脂：强碱型RN+(CH3)3Cl-

弱碱型RNH2,RNHR’,RNR’R”

二、分离与精制方法当前66页，总共74页。4.1交换原理:阴离子交换树脂：阳离子交换树脂：4.2应用：主要用于生物碱和有机酸的分离。二、分离与精制方法4.根据物质解离程度不同进行分离—离子交换色谱法当前67页，总共74页。

透析法:半透膜,分子筛滤过作用。

超速离心法:溶质在超速离心作用下具有不同的沉降性或浮游性。

凝胶滤过法:分子筛的作用(排阻色谱),被分离物质按分子由大到小的顺序流出色谱柱。5.根据物质分子大小差别进行分离—凝胶滤过法二、分离与