第十四章高效液相色谱法

当前1页，总共57页。概述概念：高效液相色谱法(HPLC)是在20世纪60年代末，以经典液相色谱为基础，引入了气相色谱的理论，在技术上采用了高效固定相、高压输液系统和高灵敏度的在线检测器，从而发展起来的一种新型分离分析技术。随着科学和技术的不断改进与发展，目前已成为应用极为重要、广泛的分离分析手段。特点：分离效率高、分析速度快、应用范围广、操作自动化。当前2页，总共57页。高效液相色谱与经典液相色谱比较经典液相色谱高效液相色谱常压或减压高压，40～50MPa填料颗粒大填料颗粒小，2～50μm柱效低柱效高,40000～60000块/m分析速度慢分析速度快色谱柱只用一次色谱柱可重复多次使用不能在线检测能在线检测HPLC:采用高压输液泵，高效微粒固定相和高灵敏度检测器HPLC特点：高压、高速、高效、高灵敏度、样品回收方便

当前3页，总共57页。气相色谱高效液相色谱只能分析挥发性物质，只能分析20%的化合物几乎可以分析各种物质不能分析热不稳定物质可以分析热不稳定物质用毛细管色谱可得到很高的柱效色谱柱不能很长，柱效不会很高有很灵敏的检测器如ECD和较灵敏的通用检测器(FID和TCD)没有较高灵敏的通用检测器流动相为气体，无毒，易于处理流动相有毒，费用较高运行和操作容易运行和操作比GC难一些仪器制造难度较小仪器制造难度大高效液相色谱与气相色谱比较4当前4页，总共57页。高效液相色谱法的分类根据分离机理液-液分配色谱化学键合相色谱液-固吸附色谱离子交换色谱离子色谱离子对色谱尺寸排阻色谱亲和色谱需要指出的是每种色谱方法通常存在一种起支配作用的主要保留机理，但可能还存在次要的其他机理。

根据固定相分类液-液色谱液-固色谱5当前5页，总共57页。根据固定相和液体流动相相对极性的差别，有正相色谱和反相色谱两种色谱体系或方法。反相色谱和正相色谱主要区别是流动相和固定相的相对极性，（反相：流动相的极性大于固定相；正相：流动相的极性小于固定相）。最初形成于液液分配色谱，现已广泛应用于其他各种色谱方法。正相色谱和反相色谱6当前6页，总共57页。高效液相色谱仪1.储液瓶（输液管入口端安装有过滤器）；2.高压输液泵；3.混合器和阻尼器；4.进样器（阀）；5.色谱柱；6.检测器；7.废液瓶；8.数据处理和控制系统7当前7页，总共57页。

现代高效液相色谱仪配备一或多个流动相储液器，一般为玻璃瓶，亦可为耐腐蚀的不锈钢、氟塑料或聚醚醚酮(PEEK)特种塑料制成的容器。每个储瓶容积500~2000mL。储液瓶位置要高于泵体，以保持一定的输液静压差，在泵启动时易于让残留在溶剂和泵体中微量气体通过放空阀排出。储器常装有脱除溶剂中溶解的氧、氮等气体装置，这些溶解气可能形成气泡引起谱带展宽，并干扰检测器正常工作。溶剂脱气主要有两种方法，其一是搅拌下真空或超声波脱气；另一种是通入氦或氮等惰性气体带出溶解在溶剂中空气。储液器的溶剂导管入口处装有过滤器，以进一步除去溶剂中灰尘或微粒残渣，防止损坏泵、进样阀或堵塞色谱柱。流动相贮器和溶剂处理系统8当前8页，总共57页。高压输液系统储液罐高压输液泵

要求：密封性好，输出流量恒定，压力平稳，可调流量范围宽，耐腐蚀分类：恒流泵（机械泵）

恒压泵过滤器压力脉动阻力器机械注射泵机械往复泵多用于流量要求在1-50L/min范围的微型HPLC或毛细管柱HPLC中活塞泵隔膜泵9当前9页，总共57页。

高效液相色谱柱比气相色谱柱短得多（约5～30cm），所以柱外展宽（又称柱外效应）较突出。柱外展宽是指色谱柱外的因素所引起的峰展宽，主要包括进样系统、连接管道及检测器中存在死体积。柱外展宽可分柱前和柱后展宽。进样系统是引起往前展宽的主要因素，因此高效液相色谱法中对进样技术要求较严。进样阀进样系统10当前10页，总共57页。高压进样阀（六通阀）进样装置隔膜注射进样器

色谱柱顶端装入耐压弹性隔膜，进样时用微量注射器刺穿隔膜将试样注入色谱柱。11当前11页，总共57页。

色谱柱是液相色谱的心脏部件，它包括柱管与固定相两部分。柱管材料有玻璃、不锈钢、铝、铜及内衬光滑的聚合材料的其他金属。玻璃管耐压有限，故金属管用得较多。一般色谱柱长一般在分离前备有一个前置柱，前置柱内填充物和分离柱完全一样，这样可使淋洗溶剂由于经过前置柱为其中的固定相饱和，使它在流过分离柱时不再洗脱其中固定相，保证分离柱的性能不受影响。分离系统色谱柱12当前12页，总共57页。1.色谱柱类型

按内径大小可大致分为常规分析柱、制备或半制备柱、小内径或微径柱、毛细管柱四种类型。高效液相色谱柱2.保护柱

一般在分析柱前装上较短的保护柱，不仅可除去溶剂中的颗粒杂质和污染物，而且可除去样品中含有与固定相不可逆结合的组分，以保护较昂贵的分析柱，延长使用寿命。3.柱恒温器

对色谱柱严格控制温度可获得重现性更高保留值和更好分离色谱图。13当前13页，总共57页。

在液相色谱中，有两种基本类型的检测器。

一类是溶质性检测器，它仅对被分离组分的物理或化学特性有响应，属于这类检测器的有紫外、荧光、电化学检测器等。

另一类是总体检测器，它对试样和洗脱液总的物理或化学性质有响应，属于这类检测器的有示差折光，电导检测器等。检测系统14当前14页，总共57页。

l.光吸收检测器：紫外吸收检测器，光二极管阵列检测器，红外吸收检测器2.荧光检测器

3.示差折光率检测器4.电化学检测器5.蒸发光散射检测器6.质谱检测器液相色谱检测器15当前15页，总共57页。1.紫外吸收(UV)检测器

应用最广，对大部分有机化合物有响应。

特点：灵敏度高；线形范围高；流通池可做的很小（1mm×10mm，容积8μL）；对流动相的流速和温度变化不敏感；波长可选，易于操作；可用于梯度洗脱。光吸收检测器

16当前16页，总共57页。2.紫外光电二极管阵列检测器紫外检测器的重要进展；光电二极管阵列检测器：1024个二极管阵列，各检测特定波长，计算机快速处理，三维立体谱图，如图所示。17当前17页，总共57页。20.2.5.1.光吸收检测器2.紫外光电二极管阵列检测器18当前18页，总共57页。20.2.5.1.光吸收检测器2.紫外光电二极管阵列检测器19当前19页，总共57页。紫外普通检测器和光电二极管阵列检测器的比较普通检测器光电二极管阵列检测器20当前20页，总共57页。3.红外吸收检测器

与一般光吸收检测器光路设计相似，其吸收池窗口采用氯化钠、氟化钙等红外透明材料，透过吸收池的红外光一般以热电敏感元件接收。这种检测器可提供分子结构信息，但由于大多数液相色谱流动相溶剂都有红外吸收及窗口材料限制，其应用有限。光吸收检测器21当前21页，总共57页。

高灵敏度、高选择性

对多环芳烃，维生素B、黄曲霉素、卟啉类化合物、农药、药物、氨基酸、甾类化合物等有响应。荧光检测器(FluorescenceDetector，FD)22当前22页，总共57页。

除紫外检测器之外应用最多的检测器；

可连续检测参比池和样品池中流动相之间的折光指数差值。差值与浓度呈正比；

通用型检测器（每种物质具有不同的折光指数）；灵敏度低、对温度敏感、不能用于梯度洗脱；偏转式、反射式和干涉型三种。示差折光检测器（DifferentialRefrativeIndexDetector,RI）23当前23页，总共57页。电化学检测器

基于电化学原理和物质的电化学性质进行检测，主要有安培、极谱及电导等几种类型，适用于测定具有电化学氧化还原性质及电导的化合物，如含硝基、氨基等有机化合物及无机阴、阳离子等。1.氟塑料池体,2.工作电极,3.氟塑料或聚酯垫片,4.接参比电极，至废液，5.接色谱柱。24当前24页，总共57页。蒸发光散射检测器(EvaporationLightScatteringDetector,ELSD)1.色谱柱出口;2.液压释放口;3.氮气入口;4.雾化器;5.加热漂移管;6.样品液滴;7.激光光源;8.排气口;9.光电检测器;10.放大器;11.连接记录系统。A.色谱柱洗出液雾化区；B.溶剂蒸发区;C.样品粒子光散射。25当前25页，总共57页。质谱检测器（Massspectrometrydetector,MSD)是一种灵敏度高，专属性强，能提供分子结构信息，是非常理想的检测器。它作为一种质量型检测器在近年有较大的发展，其中以分析生物大分子的生物制品发展尤为迅速。①分析范围广，MS几乎可以检测所有的化合物，比较容易地解决了分析热不稳定化合物的难题；②分离能力强，即使被分析混合物在色谱上没有完全分离开，但通过MS的特征离子质量色谱图也能分别给出它们各自的色谱图来进行定性定量；③定性分析结果可靠，可以同时给出每一个组分的分子量和丰富的结构信息；④检测限低，MS具备高灵敏度，通过选择离子检测（SIM）方式，其检测能力还可以提高一个数量级以上；⑤分析时间快，HPLC-MS使用的液相色谱柱为窄径柱，缩短了分析时间，提高了分离效果；⑥自动化程度高，HPLC-MS具有高度的自动化。26当前26页，总共57页。附属系统脱气梯度淋洗预饱和柱和预柱恒温自动进样馏分收集数据处理27当前27页，总共57页。梯度淋洗(gradientelution)

梯度淋洗是指在分离过程中使流动相的组成随时间改变而改变。通过连续改变色谱柱中流动相的极性、离子强度或pH等因素，使被测组分的相对保留值得以改变，提高分离效率。梯度淋洗对于一些组分复杂及容量因子值范围很宽的样品分离尤为必要。HPLC中的梯度淋洗的作用十分类似于气相色谱中的程序升温，两者的目的都是为了使样品的组分在最佳容量因子值范围流出柱子，使保留时间过短而拥挤不堪、峰形重叠的组分或保留时间过长、峰形扁平、宽大的组分，都能获得良好的分离。梯度淋洗的优点：可以改进复杂样品的分离，改善峰形，减少拖尾并缩短分离时间。另外，由于滞留组分全部流出柱子，可保持柱性能长期良好。28当前28页，总共57页。固定相

高效液相色谱固定相以承受高压能力来分类，可分为刚性固体和硬胶两大类。刚性固体以二氧化硅为基质，可承受7.O×108～1.O×109Pa的高压，可制成直径、形状、孔隙度不同的颗粒。如果在二氧化硅表面键合各种官能团，就是键合固定相，可扩大应用范围，它是目前最广泛使用的一种固定相。硬胶主要用于离子交换和尺寸排阻色谱中，它由聚苯乙烯与二乙烯苯基交联而成。可承受压力上限为3.5×108Pa。固定相按孔隙深度分类，可分为表面多孔型和全多孔型固定相两类。

高效液相色谱固定相和流动相29当前29页，总共57页。由于高效液相色谱中流动相是液体，它对组分有亲和力，并参与固定相对组分的竞争。因此，正确选择流动相直接影响组分的分离度。对流动相溶剂的要求是：1.化学惰性，不与固定相和被分离组分发生化学反应，保证柱的稳定性和分离的重现性。2.适用的物理性质，包括沸点较低，以便于分离组分和溶剂回收;低粘度，利于提高传质速率和分离速度、降低柱前压;弱或无紫外吸收等，以降低UV检测器本低响应，提高检测灵敏度;对样品具有适当溶解能力等。3.溶剂清洗和更换方便，毒性小、纯度高、价廉等，便于操作和安全。

流动相30当前30页，总共57页。1.溶剂强度参数ε0定义为溶剂分子在单位吸附剂表面积上的吸附自由能，表征溶剂分子对吸附剂的亲和力大小。2.溶解度参数δ它是溶剂与溶质分子间各种作用力的总和，包括色散力、偶极作用力、接受质子能力、给于质子能力等。3.极性参数P’表示每种溶剂与乙醇、二氧六环和硝基甲烷三种极性物质相互作用力的度量，类似于气相色谱固定液的Rohrschneider常数，反映溶剂接受质子、给出质子和偶极相互作用能力及选择性差异，亦作为表征溶剂洗脱强度的指标。

流动相溶剂的特性参数31当前31页，总共57页。32当前32页，总共57页。

优化保留值k和分离选择性α的重要方法是改变流动相溶剂类型和组成。溶剂组成优化用差试法比较麻烦、费时，成功率不一定很高。采用溶剂组成与溶剂强度参数关系的估算,可减少优化实验操作。二元混合溶剂极性参数P’与其体积组成呈线性关系，可按算数平均值求出。例如溶剂A和B混合物的极性参数PAB’可按下式求出:混合溶剂ФA与ФB分别表示溶剂A和溶剂B在混合溶剂中的体积分数。33当前33页，总共57页。高效液相色谱法的主要类型根据分离机制不同，可分为以下几种类型：分配色谱法，包括液-液分配色谱法和化学键合相色谱法；液-固吸附色谱法；离子交换色谱法；尺寸排阻色谱法；亲和色谱法。34当前34页，总共57页。

研究最多、应用最广泛的高效液相色谱类型。可分为液-液色谱和化学键合相色谱。前者是早期主要分配色谱类型，以物理吸附涂渍固定液在多孔载体表面上为固定相；后者以键合相为固定相，即化学键合固定相至载体或基质表面。化学键合相色谱巳成为占绝对优势的分配色谱类型。分配色谱(PartitionChromatography)35当前35页，总共57页。液-液分配色谱(LLPC)固定相载体和固定液（常选用几种极性不同的固定液）流动相要求：对固定相的溶解度尽可能小分类正相分配色谱流动相的极性<固定相的极性适用于极性化合物的分离反相分配色谱流动相的极性>固定相的极性适用于非极性化合物的分离分离原理：与液液萃取相同。36当前36页，总共57页。化学键合相色谱(CBPC)键合固定相类型

利用硅胶表面的硅羟基与有机分子疏水基团极性基团离子交换基团键合相的键型硅酸酯型(SiOR)适用于不含水或醇的流动相；硅氮型(SiN)或硅碳型(SiC)可用于非极性或强极性的溶剂作流动相，当使用水溶液时，必须限制pH在48范围内；硅烷化(SiOSiC)型具有热稳定性好，不易吸水，耐有机溶剂，能在70C以下，pH在28范围内正常工作。采用化学键合相的液相色谱，由于键合固定相非常稳定，在使用中不易流失，适用于梯度淋洗，特别适用于分离容量因子k值范围宽的样品。由于键合到载体表面的官能团可以是各种极性的，因此它适用于种类繁多样品的分离。37当前37页，总共57页。反相键合相色谱法固定相：非极性键合固定相流动相：极性较强的溶剂正相键合相色谱法固定相：极性键合固定相流动相：比键合相极性小的非极性或弱极性有机溶剂离子性键合相色谱法固定相：以薄壳型或全多孔微粒型硅胶为基质，化学键合各种离子交换基团流动相：一般为缓冲溶液优点:改变流动相的组成和种类，可有效分离各种类型化合物（极性、非极性和离子型），适合于梯度淋洗。缺点：不能用于酸、碱度过大或存在氧化剂的缓冲溶液作流动相的体系38当前38页，总共57页。样品种类键合基团流动相色谱类型实例低极性溶解于烃类C18甲醇-水乙腈-水乙腈-四氢呋喃反相多环芳烃甘油三脂、类脂、脂溶性维生素甾族化合物、氢醌中等极性可溶于醇CNNH2乙腈、正己烷氯仿正己烷异丙醇正相脂溶性维生素、甾族、芳香醇、胺、类脂止痛药芳香胺、脂、氯化农药、苯二甲酸C18C8CN甲醇、水乙腈反相甾族、可溶于醇的天然产物维生素、芳香酸、黄嘌呤高极性可溶于水C8CN甲醇、乙腈水、缓冲溶液反相水溶性维生素、胺、芳醇抗菌素、止痛药C18水、甲醇、乙腈反相离子对酸、磺酸类染料、儿茶酚胺SO3-水和缓冲溶液阳离子交换无机阳离子、氨基酸NR3+磷酸缓冲液阴离子交换核苷酸、糖、无机阴离子、有机酸化学键合固定相的选择当前39页，总共57页。液-固吸附色谱法(LiquidSolidAdsorptionChromatography，LSAC)液固吸附色谱固定相

吸附色谱所用固定相多是一些吸附活性强弱不等的吸附剂，如硅胶、氧化铝、聚酸胶等。由于硅胶的优点较多，如线性容量较高，机械性能好，不溶胀，与大多数试样不发生化学反应等，因此，以硅胶用得最多。 在高效液相色谱法中，表面多孔型和全多孔型都可作吸附色谱中的固定相，它们具有填料均匀、粒度小。孔穴浅的优点，能极大地提高柱效。但表面多孔型由于试样容量较小，目前最广泛使用的还是全多孔型微粒填料。以固定吸附剂作为固定相，根据物质在固定相上的吸附作用不同而进行分离。40当前40页，总共57页。洗脱剂的选择：相似相溶极性大的试样用极性强的洗脱剂，极性弱的试样用极性弱的洗脱剂液固吸附色谱流动相吸附色谱分离机理当流动相通过固定相（吸附剂）时，吸附剂表面的活性中心就要吸附流动相分子。同时，当试样分子（X）被流动相带入柱内，只要它们在固定相有一定程度的保留就要取代数目相当的已被吸附的流动相溶剂分子，于是，在固定相表面发生竞争吸附，吸附平衡常数大的组分在吸附剂上的保留强，难于洗脱，后被分离出来。

41当前41页，总共57页。

此法是利用离子交换原理和液相色谱技术的结合来测定溶液中阳离子和阴离子的一种分离分析方法。凡在溶液中能够电离的物质，通常都可用离子交换色谱法进行分离。它不仅适用无机离子混合物的分离，亦可用于有机物的分离，例如氨基酸、核酸、蛋白质等生物大分子。因此，应用范围较广。离子交换色谱法42当前42页，总共57页。

离子交换色谱法是利用不同待测离子对固定相亲和力的差别来实现分离的。其固定相采用离子交换树脂，树脂上分布有固定的带电荷基团和可游离的平衡离子。当待分析物质电离后产生的离子可与树脂上可游离的平衡离子进行可逆交换，其交换反应通式如下：

阴离子交换：

离子交换原理阳离子交换：43当前43页，总共57页。达平衡时，以浓度表示的平衡常数（离子交换反应的选择系数）：

这里，[XR]s、[YR]s和[X]m、[Y]m分别代表X、Y在固定相上和流动相中浓度。色谱过程分布平衡常数为溶质X在固定相和流动相浓度之比，上式重排得:离子交换平衡44当前44页，总共57页。

设色谱柱内离子交换剂的质量是WS，则固定相上溶质的量(mol或g)为[XR]SWS;柱内流动相体积Vm,溶质量为[X]mVm。溶质色谱保留值k为:

对于典型的磺酸型阳离子交换树脂，一价离子的KEX值按以下顺序：

Cs+＞Rb+＞K+＞NH4+＞Na+＞H+＞Li+二价离子的顺序为：

Ba2+＞Pb2+＞Sr2+＞Ca2+＞Cd2+＞Cu2+，Zn2+＞Mg2+对于季铵型强碱阴离子交换树指，各阴离子的选择性顺序为：ClO4-＞I-＞HS04-＞SCN-＞NO2-＞Br-＞CN-＞Cl-＞BrO3-＞OH-

＞HCO3-＞H2P04-＞IO3-＞CH3COO－＞F－离子交换平衡KEX值越大表示待测离子对树脂的亲和力越大，交换能力越大，越易保留而难于洗脱。45当前45页，总共57页。离子交换固定相主要可分为以下几种类型:多孔型离子交换树脂；薄膜型离子交换树脂；表面多孔型离子交换树脂；离子交换键合固定相。离子交换色谱流动相具有其他色谱方法相同的要求，即必须溶解样品，有合适溶剂强度以获得合理的保留时间和k值，和各溶质有差异的相互作用以改进分离选择性α。离子交换色谱流动相是含离子水溶液，常是缓冲剂溶液。流动相缓冲液的类型、离子强度、pH值及添加有机溶剂类型、浓度等是实现分离条件优化的主要因素。离子交换色谱固定相和流动相46当前46页，总共57页。

离子色谱法是由离子交换色谱法派生出来的一种分离方法。离子交换色谱法在无机离子的分析和应用受到限制。例如，对于那些不能采用紫外检测器的被测离子，如采用电导检测器，由于被测离子的电导信号被强电解质流动相的高背景电导信号掩没而无法检测。为了解决这一问题，1975年Small等人提出一种能同时测定多种无机和有机离子的新技术。他们在离子交换分离柱后加一根抑制柱，抑制柱中装填与分离柱电荷相反的离子交换树脂。通过分离柱后的样品再经过抑制柱，使具有高背景电导的流动相转变成低背景电导的流动相，从而用电导检测器可直接检测各种离子的含量。这种色谱技术称为离子色谱。若样品为阳离子，用无机酸作流动相，抑制柱为高容量的强碱性阴离子交换剂。当试样经阳离子交换剂的分离往后，随流动相进入抑制柱，在抑制柱中发生两个重要反应：

离子色谱法(IonChromatography，IC)47当前47页，总共57页。

由反应可见：经抑制柱后，一方面将大量酸转变为电导很小的水，消除了流动相本底电导的影响。同时，又将样品阳离子M+转变成相应的碱，由于OH-离子的淌度为Cl-离子的2．6倍，提高了所测阳离子电导的检测灵敏度。对于阴离子样品也有相似的作用机理。在分离柱后加一个抑制柱的离子色谱亦称为抑制型离子色谱或称双柱离子色谱。由于抑制柱要定期再生，而且谱带在通过抑制柱后会加宽，降低了分离度。后来，Frits等人提出采用抑制柱的离子色谱体系，而采用了电导率极低的溶液，例如1×10-4～5×10-4mol·dm-3苯甲酸盐或邻苯二甲酸盐的稀溶液作流动相，称为非抑制型离子色谱或单柱离子色谱。离子色谱法(IonChromatography，IC)48当前48页，总共57页。离子对色谱法(Ion-PairChromatography)

在色谱体系中引入一种与样品溶质离子电荷相反的离子对试剂，通常称为对离子或反离子(counterion)，它与溶质离子形成离子对，从而改变溶质在两相中的分配，使离子性溶质的保留行为和分离选择性发生显著变化。常用的离子对试剂有提供阴离子的C4-C8烷基磺酸盐、烷基硫酸盐、羧酸盐、萘磺酸盐、高氯酸盐等;提供阳离子的季铵盐和烃基胺，如四丁基铵盐、十六烷基三甲基铵盐、三乙胺等。将离子对试剂涂渍在液液色谱的硅胶载体上或溶于流动相中，可构成液液离子对分配色谱，由于固定相的流失，这类离子对色谱应用不多。在反相色谱中，离子对试剂加入缓冲液和甲醇、乙腈等极性有机溶剂的流动相构成反相离子对色谱。49当前49页，总共57页。

手性高效液相色谱可分为手性固定相(chiralstationaryphase，CSP)/非手性流动相和非手性固定相/含手性选择剂流动相，即手性流动相两种色谱技术。具实用价值手性流动相添加剂品种较少，这里主要介绍前者。采用手性固定相CSP的高效液相色谱体系的流动相与一般分配色谱相似，根据CSP与流动相相对极性不同可构成正相或反相色谱，其中采用极性水溶性流动相的反相手性色谱应用较多。手性色谱法(Chiralchromatohgaphy)50当前50页，总共57页。1.给体-受体手性固定相这是Pirkle研究组最先开发的一类CSP,由含末端羧基或异氰酸酯芳香烃手性配体与氨基键合硅胶缩合，分别形成具手性取代芳香酰胺或脲型结构CSP，亦称为Pirkle手性固定相。手性色谱法(Chiralchromatohgaphy)51当前51页，总共57页。2.多糖类手性固定相主要是纤维素及其衍生物CSP，以引进芳环的取代苯甲酸酯衍生化纤维素居多，如纤维素三(3,5-二甲苯基氨基甲酸酯)，纤维素三(4-甲基苯甲酸酯)，纤维素三乙酸酯等。3.环糊精手性键合固定相

亦称为空穴型固定相。环糊精简称CD，具手性空穴结构，CD-CSP可实施正相和反相两种色谱体系。手性色谱法(Chiralchromatohgaphy)4.蛋白质手性固定相一般通过含氨基、二醇基等键合硅胶中间体将蛋白质键合至硅胶上。这类CSP只能用于反相色谱体系。52当前52页，总共57页。

尺寸排阻或排除色谱(Size-ExclusionChromatography,SEC),亦称为凝胶色谱或凝胶过滤色谱,是分析高分子化合物的色谱技术。SEC填料为微粒均匀网状多孔凝胶材料。比填料平均孔径大的分子被排阻在孔外而无保