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文档简介

盐析法分离蛋白质当前1页，总共27页。沉淀定义沉淀特点应用范围沉淀分类1.沉淀法概述当前2页，总共27页。盐析法

有机溶剂沉淀法选择性变性沉淀法等电点沉淀法离子型聚合物沉淀法聚电解质沉淀法高价金属离子沉淀法沉淀法分类当前3页，总共27页。活性蛋白非活性蛋白理化性质溶解度提取方法蛋白质的理化性质的回顾

当前4页，总共27页。盐析沉淀步骤加沉淀剂方式陈化条件脱盐处理2.盐析沉淀当前5页，总共27页。盐析机理示意图当前6页，总共27页。当前7页，总共27页。当前8页，总共27页。①盐离子与蛋白质分子争夺水分子，降低了用于溶解蛋白质的有效水量，减弱了蛋白质的水合程度，破坏了蛋白表面的水化膜，导致蛋白质溶解度下降；②盐离子电荷的中和作用，使蛋白质溶解度下降；③盐离子引起原本在蛋白质分子周围有序排列的水分子的极化，使水活度降低。盐析的机理当前9页，总共27页。Cohn方程式logS=β-KsIKs盐析β盐析二次盐析盐析沉淀基础当前10页，总共27页。图1碳氧血红蛋白的溶解度与硫酸铵离子强度的关系图当前11页，总共27页。不同蛋白质的溶解度曲线当前12页，总共27页。蛋白质的盐析分布曲线当前13页，总共27页。溶解度曲线(a)和盐析分布曲线(b)

当前14页，总共27页。对β影响对Ks影响盐种类盐浓度温度pH值盐析影响因素当前15页，总共27页。无机盐种类的影响图7不同盐溶液中碳氧血红蛋白的溶解度与离子强度的关系（25℃）

(○)NaCl;(▼)KCl;(◘)MgSO4;(▲)NH4)SO4;(●)Na2SO4;(□)K2SO4;(■)柠檬酸三钠当前16页，总共27页。温度的影响当前17页，总共27页。pH对β的影响当前18页，总共27页。蛋白质起始浓度的影响当前19页，总共27页。二次盐析当前20页，总共27页。盐析操作当前21页，总共27页。3等电点沉淀实例①从猪胰脏中提取胰蛋白酶原：胰蛋白酶原的pI＝8.9，可先于pH3.0左右进行等电点沉淀，除去共存的许多酸性蛋白质(pI=3．O)。工业生产胰岛素(pI＝5.3)时，先调pH至8.0除去碱性蛋白质，再调pH至3.0除去酸性蛋白质(同时加入一定浓度的有机溶剂以提高沉淀效果)。②碱性磷酸酯酶的pI沉淀提取：发酵液调pH4.0后出现含碱性磷酸酯酶的沉淀物，离心收集沉淀物。用pH9.0的0.1mol/LTris-HCl缓冲液重新溶解，加入20～40%饱和度的硫酸铵分级，离心收集的沉淀Tris-HCl缓冲液再次沉淀，即得较纯的碱性磷酸酯酶。当前22页，总共27页。4有机溶剂沉淀原理图当前23页，总共27页。有机溶剂沉淀实例当前24页，总共27页。酵母干粉中加入0.066mol/L磷酸氢二钠溶液，37℃水浴保温2h，室温搅拌3h，离心收集上清液，升温至55℃，保温20min后迅速冷却离心去除热变性蛋白，上清液中多为热稳定性较高的醇脱氢酶。5选择性热变性沉淀实例当前25页，总共27页。（1）非离子型聚合物沉淀法（2）聚电解质沉淀法（3

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