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文档简介
培养基制作及灭菌第一页,共二十页,2022年,8月28日实验一培养基配置和灭菌一、实验目的1.掌握微生物学实验中常用的玻璃器皿的包扎方法与棉塞得制作2.了解配制培养基的原理,并掌握配制培养基的一般方法和步骤3.了解加压蒸汽灭菌的原理,并掌握其具体操作方法第二页,共二十页,2022年,8月28日二、实验原理(1)微生物学常用的玻璃仪器
培养皿,试管,三角瓶(锥形瓶)、吸量管,(大小)(2)培养基的分类
按物理状态分、按组成成分分、按用途分配置培养基时注意的事项:pH(不能回调),T
(3)培养基的灭菌
培养基配置好后应立即灭菌,且不能再次灭菌化学灭菌(甲醛,洁尔灭、升汞),物理灭菌(干热,紫外线等、过滤除菌)、湿热灭菌第三页,共二十页,2022年,8月28日第四页,共二十页,2022年,8月28日第五页,共二十页,2022年,8月28日干燥箱第六页,共二十页,2022年,8月28日第七页,共二十页,2022年,8月28日细菌过滤器第八页,共二十页,2022年,8月28日用于滤过除菌的各式滤器第九页,共二十页,2022年,8月28日手提式灭菌锅坐式灭菌锅第十页,共二十页,2022年,8月28日高压蒸汽灭菌器卧式灭菌锅第十一页,共二十页,2022年,8月28日三、实验器材
1.药品及试剂:牛肉膏、蛋白胨、NaCl、蒸馏水、琼脂2.仪器及其它
试管、三角瓶、烧杯、量筒、玻棒、天平、药匙、高压蒸汽灭菌锅、pH试纸(5.5-9.0)、棉花、牛皮纸、记号笔、麻绳、纱布、干燥箱、培养皿、涂布棒、吸管(1ml)、玻璃珠第十二页,共二十页,2022年,8月28日四、实验方法和步骤微生物常用玻璃仪器的包扎和棉塞的制作
a.培养皿的包装每10套一包,用旧报纸包扎(或放在特制铁皮圆筒里,加盖扣严)。
b.吸管的包装首先在吸管的上端塞上一小段棉花,用长纸条包扎、打结。
c.玻璃涂布棒的包装方法同吸管的包装。
d.三角瓶的包扎第十三页,共二十页,2022年,8月28日第十四页,共二十页,2022年,8月28日2.培养基的制备与分装(1)三角瓶固体培养基的制备
a.称量按培养基配方比例依次准确地称取药品,放入在瓷缸内。(注意药品称量顺序)
b.加入定量的琼脂、水,煮沸,溶解
c.完全溶解后,补充水分,调pH值(不要调过头)
d.分装置三角瓶中,注意装液量
e.加棉塞,包扎,高压蒸汽灭菌,121℃,0.10Mpa,20min第十五页,共二十页,2022年,8月28日(2)试管斜面固体培养基的制备
a.称量按培养基配方比例依次准确地称取药品,放入在瓷缸内。(注意药品称量顺序)
b.加入定量的琼脂、水,煮沸,溶解
c.完全溶解后,补充水分,调pH值
d.在培养基未融化之前,用10mL移液管快速加入试管内,每根7-8mL,塞上棉塞,包扎,灭菌,灭菌完后摆斜面。第十六页,共二十页,2022年,8月28日3.培养基、无菌水、器皿的灭菌
a.将培养基、无菌水放入高压蒸汽灭菌锅内,湿热灭菌。b.灭菌完毕,将试管培养基搁成斜面。c.器皿放入干热灭菌箱内,加热灭菌。第十七页,共二十页,2022年,8月28日牛肉膏蛋白胨培养基配方:牛肉膏3.0g、蛋白胨10.0g、NaCl5.0g、蒸馏水1000ml、琼脂15.0-20.0g(1.5-2.0%)、PH7.4~7.6第十八页,共二十页,2022年,8月28日思考题1.培养基配好后,为什么必须立即灭菌?如何检查灭菌后的培养菌是无菌的?2.加压蒸汽灭菌的原理是什么?是否只要压力表上的指针指到所需的压力时就能达到所需灭菌温度?为什么?3.干热灭菌应该注意哪些事项?4.管
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