发酵之菌种选育

发酵之菌种选育第一页，共五十七页，2022年，8月28日（二）放线菌（actinomyces）最大的经济价值在于产生多种抗生素（antibiotic）链霉菌（Streptomyces）小单孢菌属（Micromonospora）第二页，共五十七页，2022年，8月28日

（三）霉菌（mould）1.曲霉属（Aspergillus）黑曲霉（A.niger）米曲霉（A.oryzae）黄曲霉（A.flavus）2.青霉属（Penicillum）桔青霉（P.citrinum）产生5’－磷酸二酯酶，降解核糖核酸为四个单核苷酸。第三页，共五十七页，2022年，8月28日3.根霉属（Rhizopus）米根霉（R.oryzae）华根霉（R.chinensis）4.红曲霉属（Monascus）第四页，共五十七页，2022年，8月28日（四）酵母（yeast）酵母属（Saccharomyces）啤酒酵母（Saccharomycescerevisiae）2.假丝酵母属（Candida）产朊假丝酵母（Candidautilis）3.毕赤酵母属（Pichia）第五页，共五十七页，2022年，8月28日（五）其它微生物1.担子菌（basidiomycetes）即菇类（mushroom）2.藻类（alga）第六页，共五十七页，2022年，8月28日几种菌落第七页，共五十七页，2022年，8月28日

（六）噬菌体（phage）

危害以细菌和放线菌为生产菌株的发酵工业。第八页，共五十七页，2022年，8月28日烈性噬菌体

——引起寄主细胞迅速裂解。受感染的细菌称敏感性细菌。温和噬菌体

——随寄主细胞的繁殖而繁殖。含温和噬菌体的细菌称溶原性细菌。第九页，共五十七页，2022年，8月28日吸附注入核酸合成核酸和蛋白质释放装配第十页，共五十七页，2022年，8月28日二、微生物工业对菌种的要求1.原料廉价，生长迅速，目的产物产量高。2.易控制培养条件，发酵周期较短。3.抗杂菌和噬菌体的能力强。4.不易变异和退化，不产生任何有害物质和毒素。第十一页，共五十七页，2022年，8月28日

第二节工业微生物菌种的选育一、自然选育1.采样2.增殖培养方法：（1）控制培养基成分（2）控制培养条件（3）抑制不需要的菌类第十二页，共五十七页，2022年，8月28日3.纯种分离（1）划线法：简单、快捷。（2）稀释法：菌落单一均匀。第十三页，共五十七页，2022年，8月28日固体培养基四区划法接种法第十四页，共五十七页，2022年，8月28日接种针先以火焰灭菌法灭菌

步骤一第十五页，共五十七页，2022年，8月28日轻触营养平板上无菌的琼脂处冷却

步骤二第十六页，共五十七页，2022年，8月28日以接种针轻触菌落，使接种针上沾有细菌。

步骤三第十七页，共五十七页，2022年，8月28日更换一个新的无菌营养平板

步骤四第十八页，共五十七页，2022年，8月28日将接种针上的细菌划于一个新的营养平板上。此为第一菌区。步骤五第十九页，共五十七页，2022年，8月28日重复第一步骤，将接种针以火焰灭菌法灭菌，然后轻触琼脂无菌处冷却。步骤六第二十页，共五十七页，2022年，8月28日由第五步骤的第一区中划出第二区，如右上图。步骤七第二十一页，共五十七页，2022年，8月28日重复第六以及第七步骤，由第七步骤的第二区中划出第三区，如右上图。

步骤八第二十二页，共五十七页，2022年，8月28日重复第六以及第七步骤，由第八步骤的第三区中划出第四区，划满剩下的空间。完成后的营养平板，如右上图。步骤九第二十三页，共五十七页，2022年，8月28日在营养平板上贴好标签，标示好接种日期、操作者姓名、菌种学名以及培养基名称。步骤十第二十四页，共五十七页，2022年，8月28日固体培养基的稀释涂抹接种法第二十五页，共五十七页，2022年，8月28日需要使用的仪器——震荡机

第二十六页，共五十七页，2022年，8月28日吸取准备好欲稀释的菌液第二十七页，共五十七页，2022年，8月28日吸取充分均匀后的菌液

第二十八页，共五十七页，2022年，8月28日取含有9mL无菌水之试管，将试管口过火灭菌。将菌液置入，此时试管须做记号为第一次稀释。第二十九页，共五十七页，2022年，8月28日将试管于震荡机上，使菌液混合均匀第三十页，共五十七页，2022年，8月28日取出试管中的第一次十倍稀释菌液1mL，加入另一个新的含9mL无菌水的试管中。重复此步骤直至所需要的稀释浓度。

第三十一页，共五十七页，2022年，8月28日从最后稀释菌液中吸取0.1mL菌液，置入准备好的无菌琼脂内。第三十二页，共五十七页，2022年，8月28日将三角玻璃棒浸于酒精中

第三十三页，共五十七页，2022年，8月28日将三角玻璃棒在火焰上燃烧（须注意勿使燃烧中的酒精滴入酒精瓶中，引起燃烧）

第三十四页，共五十七页，2022年，8月28日使用玻璃棒将菌液均匀涂布开来，将培养皿置于恒温培养箱中隔天观察菌落数目，再依照稀释倍数推算出菌液浓度。

第三十五页，共五十七页，2022年，8月28日第三十六页，共五十七页，2022年，8月28日4.生产性能的测定一般采用两步法：初筛：以量为主复筛：以质为主第三十七页，共五十七页，2022年，8月28日二、诱变育种用各种物理、化学的因素人工诱发基因突变。诱变剂：能够提高生物体突变频率的物质。诱变剂物理：紫外线，快中子化学：硫酸二乙酯，亚硝基胍{第三十八页，共五十七页，2022年，8月28日诱变育种的主要环节（1）以合适的诱变剂处理细胞悬浮液

——诱变（2）用合适的方法淘汰负效应变异株，选出性能优良的正变异株——筛选第三十九页，共五十七页，2022年，8月28日第三节生产菌种的改良一、原生质体融合（protoplastfusion）1.标记菌株的筛选2.原生质体的制备3.原生质体的融合与再生聚乙二醇（PEG）－脱水剂助融剂Ca2+－提高融合频率4.融合子的选择第四十页，共五十七页，2022年，8月28日二、DNA重组技术（DNArecombinationtechnology）目标DNA片断的获得与载体DNA分子的连接重组DNA分子引入宿主细胞从中选出所需重组DNA分子的宿主细胞第四十一页，共五十七页，2022年，8月28日第四节菌种的衰退、复壮与保藏一、菌种的衰退衰退的原因：1.菌种保藏不当2.菌种生长条件没有得到满足第四十二页，共五十七页，2022年，8月28日二、菌种的复壮1.纯种分离2.通过寄主体进行复壮3.淘汰已衰退的个体第四十三页，共五十七页，2022年，8月28日三、菌种保藏1.原理低温、干燥、缺氧、缺营养物质2.方法（1）斜面保藏法（2）干燥保藏法（3）悬液保藏法（4）冷冻干燥保藏法（5）低温保藏法第四十四页，共五十七页，2022年，8月28日第五节种子的扩大培养一、微生物的培养方法1.表面培养2.固体培养3.液体深层培养第四十五页，共五十七页，2022年，8月28日第四十六页，共五十七页，2022年，8月28日二、菌种的扩大培养菌种扩大培养的目的：为每次发酵罐的投料提供相当数量的代谢旺盛的种子。

第四十七页，共五十七页，2022年，8月28日

（一）种子制备的工艺流程

摇瓶保藏菌种试管斜面活化茄瓶斜面种子罐固体培养基第四十八页，共五十七页，2022年，8月28日第四十九页，共五十七页，2022年，8月28日第五十页，共五十七页，2022年，8月28日摇瓶种子培养发酵培养第五十一页，共五十七页，2022年，8月28日第五十二页，共五十七页，2022年，8月28日第五十三页，共五十七页，2022年，8月28日（二）斜面菌种的培养1.不宜多次移种。2.活化斜面中加0.1%葡萄糖。培养基特点：原料较精细。第五十四页，共五十七页，2022年，8月28日（三）一级种子培养（摇瓶）培养基特点：

使用的原料基本接近于发酵培养基。第五十五页，共五十七页，2022年，8月2