HIVHBV梅毒实验室检测

HIVHBV梅毒实验室检测第1页/共94页

妇幼机构

确证实验室1个0.87%筛查实验室52个45.6%检测点8个7%

江西省妇幼保健机共114个，省级1个，市级12个，县级101个）

全省第2页/共94页一、HIV、梅毒和HBV的

实验室检测简介3第3页/共94页综合产前检查服务+检测孕产妇参加产前检查服务检测前信息HBV检测梅毒检测HIV检测全血细胞计数和其它检测取血样4第4页/共94页HIV和HBV筛查检测筛查检测用于诊断产检、临产及分娩的孕产妇是否感染HIV和HBVHIV抗体检测乙肝表面抗原（HBsAg）检测筛查检测应具有较高的灵敏度和特异度操作简单、容易获得、便宜尽可能在“当日”获得结果5第5页/共94页iPMTCT筛查检测

何时使用何种检测？HIVHBV检测方法HIV快速检测和/或ELISAHBsAg检测如果有条件，其他乙肝标记物检测检测时间第一次产检（孕早期）或下一次产检时此前未检测，分娩时应检测第一次产检（孕早期）或下一次产检时此前未检测，分娩时应检测6第6页/共94页二、HIV试验和检测7第7页/共94页《全国艾滋病检测技术规范（2014

年修订版）》中的变化

2009年版第8页/共94页2014年版第9页/共94页2014年版第10页/共94页补充试验（核酸）第11页/共94页补充试验包括抗体补充试验和核酸补充试验等。建议首选抗体补充试验，如蛋白免疫印迹试验（WB，原确证试验）、条带/线性免疫试验（RIBA/LIA）。第12页/共94页HIV检测：抗体检测一个人感染了HIV病毒后，体内将产生特异性抗体对抗HIV病毒*。HIV抗体通常在感染后4–6周出现，但也有时也会在感染后3个月才出现。从感染HIV病毒到出现特异的HIV抗体的一段时期称为“窗口期”。标准的HIV诊断检测**是识别HIV抗体。注意：*与其他大多数疾病不同，HIV抗体没有保护性作用。

**所有HIV检测工具应经过SFDA审批，并在有效期内使用。13第13页/共94页感染HIV后各种标志物消长变化第14页/共94页孕产妇艾滋病检测方法包括抗体筛查试验和补充试验。•抗体筛查试验包括快速检测（RT）、酶联免疫吸附试验（ELISA）、化学发光免疫试验（CLIA）、明胶颗粒凝集试验（PA）等。补充试验包括抗体补充试验和核酸补充试验等。建议首选抗体补充试验，如蛋白免疫印迹试验（WB，原确证试验）、条带/线性免疫试验（RIBA/LIA）。第15页/共94页HIV抗体检测类型16第16页/共94页HIV检测：病毒核酸检测这些检测检测HIV感染者血液或血浆中的病毒必须由经过专门培训的实验室人员操作实验室需有资质，并配备专门设备昂贵，不是针对所有人进行的常规检测方法PCR（多聚酶连反应法）检测HIVDNA-PCR定性检测血液中是否含有病毒，用于诊断18月龄内婴儿是否感染HIVHIVRNA-PCR定量检测病毒载量，即血浆中的病毒数量，用于监测对抗病毒治疗的反应。17第17页/共94页第18页/共94页HIVEIA/ELISA（酶联免疫试验）试剂第19页/共94页HIV筛查检测结果的含义HIV筛查检测结果“阴性(-)”：受检者没有感染HIV或者受检者已经感染了HIV，但处于窗口期：3个月后再次进行检测HIV筛查检测结果“阳性(+)”：病人可能已经感染HIV但应再次重复检测20第20页/共94页HIV确认试验结果的含义如果筛查检测结果阳性，两次重复检测中1次或2次检测结果为阳性，需要进行确认试验免疫印迹法（WB）确认试验结果：阳性病人确认感染HIV阴性受检者没有感染HIV不确定结果为“不确定”受检者必须在4周后再次采血，重复前述所有步骤进行检测21第21页/共94页抗体检测中的问题

初筛实验中的假阳性

血液恶性病变

自身免疫性疾病

多发性胆汁型肝硬化

酒精性肝炎

疫苗接种（流感，乙肝）

多发性骨髓瘤

肾移植或慢性肾衰竭

疟疾或丝虫病

•其他

第22页/共94页抗体检测中的问题初筛实验中的假阴性•窗口期•免疫移植•换血输血•恶性肿瘤•免疫功能丧失（B细胞功能缺损）•其他（试剂或操作原因第23页/共94页中国预防艾滋病、梅毒和乙肝母婴传播HIV检测流程在产前检查服务中开展整合的检测咨询所采用的HIV检测流程24第24页/共94页产时HIV抗体检测流程中国预防艾滋病、梅毒和乙肝母婴传播HIV检测流程*有关确认试验详见幻灯片1425第25页/共94页三、儿童HIV检测26第26页/共94页HIV暴露婴儿和儿童的HIV抗体检测

不是所有HIV感染母亲所生儿童都会感染HIV，但是如果对12-18个月以内的婴儿进行HIV抗体检测，所有HIV感染母亲所生婴儿都将是HIV检测结果阳性。-即使婴儿并没有感染HIV-由于母体自身抗体可通过胎盘进入胎儿体内。母体传入的抗体可在婴儿体内持续18个月，所以12-18月龄以内的婴儿不能应用抗体检测方法进行诊断。27第27页/共94页未感染婴儿HIV-1抗体S/CO比值动态曲线第28页/共94页婴儿感染早期诊断（EID）

HIV病毒检测（DNA-PCR）HIV病毒检测（DNA-PCR）检测细胞内的HIV病毒，能够检测低至1–10拷贝前病毒DNA，以及可在HIV暴露婴儿出生后6周内诊断HIV感染用于HIV暴露婴儿HIV感染早期诊断（EID）29第29页/共94页应用DNA-PCR方法进行

婴儿感染早期诊断（EID）（1）如果可以开展HIVDNA-PCR检测，应用干血斑（DBS）在婴儿6周龄时进行PCR检测。如果PCR检测结果阳性尽快再次采血再次进行DNA-PCR检测如果第二次PCR检测结果阳性，婴儿确定感染HIV如果PCR检测结果阴性婴儿出生后3个月再次进行PCR检测30第30页/共94页应用DNA-PCR方法进行

婴儿感染早期诊断（EID）（2）出生后3个月再次进行HIVDNA-PCR检测如果PCR检测结果阳性尽快再次采血再次进行DNA-PCR检测如果第二次PCR检测结果阳性，婴儿确定感染HIV如果PCR检测结果阴性婴儿视为未感染HIV考虑在婴儿满12月龄时进行HIV抗体检测（如有必要，在18月龄时再次进行检测）检测结果阴性的婴儿接受母乳喂养，必须在停止母乳喂养后6周再次进行PCR检测，以确保婴儿没有在母乳喂养期间感染HIV。31第31页/共94页婴儿HIV感染早期诊断流程32第32页/共94页HIV暴露婴儿/儿童的HIV抗体检测所有HIV感染母亲所生儿童，在出生后6周或3个月未接受EID检测者，应进行HIV抗体检测。检测时间：满12月龄和满18月龄（必要时，见HIV抗体检测流程）出生后3个月EID检测结果为阴性的儿童也应接受HIV抗体检测满18月龄HIV抗体检测阳性，可确认儿童HIV感染。33第33页/共94页HIV暴露儿童HIV抗体检测流程34第34页/共94页四、收集、制备干血斑（DBS）操作练习35第35页/共94页什么是干血斑（DBS）？干血斑是直接用滤纸收集一滴全血进行干燥用于血样本的长时间储存DBS是用HIVDNA-PCR方法进行婴儿HIV感染早期诊断检测的最佳采血方法HIVDNA和HIV抗体可稳定地保存在干血斑中转运方便：无需冷藏36第36页/共94页如何采集干血斑血样本（1）时刻遵循“普遍防护原则”采集足跟血选择合适的采血部位，皮肤消毒（图片中阴影部位）必要时保暖足跟使用一次性消毒采血针足跟置于心脏水平位或之下不要“挤”足跟37第37页/共94页

样本类型

末梢血制备DBS

抗凝静脉血制备DBS第38页/共94页如何采集干血斑血样本（2）1.用消毒纱布擦掉第一滴血2.收集此后滴出的大滴血液3.快速、轻柔地用滤纸片的一面接触血滴4.让血液滴到采血圈中重复步骤1-4，直到整个采血圈全部充满血液。在卡片上标注患者的编号。每个儿童用一张新纸片。收集2-4个血斑。不要：用滤纸片按压出血部位不要多次在同一个采血圈中涂抹血滴在滤纸片两面均滴入血滴39第39页/共94页如何采集干血斑血样本（3）采血圈充满后：避免碰触或涂抹血滴水平放置滤纸片，室温下自然晾干血样本（至少4小时）避免阳光直射，不要加热不要将多张滤纸片叠放在一起，避免血滴接触其他表面一旦血样本完全干燥：放入可封闭的塑料袋中加入干燥剂和湿度指示卡干燥、阴凉保存干血斑滤纸片包装袋，直到转送到相关实验室40第40页/共94页五、HIV感染的实验室监测41第41页/共94页HIV感染的实验室监测实验室监测主要用于：决定开始抗病毒治疗还是预防性应用抗病毒药物是否有抗病毒治疗指征？效果监测抗病毒治疗有效吗？毒性监测抗病毒药物是否引起了其他问题？42第42页/共94页CD4+T淋巴细胞是HIV病毒攻击的靶细胞CD4+T淋巴细胞检测用于：决定开始抗病毒治疗还是预防性应用抗病毒药物为判断抗病毒治疗成功或失败提供定量依据对调整抗病毒治疗方案提供指导孕期每3个月及产后4–6周应进行CD4+T淋巴细胞检测（急性感染时可适当推迟检测，因为在急性感染期，CD4+T淋巴细胞通常会下降）CD4+T淋巴细胞检测43第43页/共94页第44页/共94页CD4+T细胞绝对数的临床意义评价免疫功能减退的程度和AIDS进程指导治疗策略的制订确定预防机会感染的最佳时机监控抗逆转录病毒（ARV）治疗、细胞因子治疗和保护治疗性疫苗的疗效第45页/共94页《艾滋病诊疗指南》CD4+T淋巴细胞计数>350个细胞／ul时，建议定期复查，暂不予治疗；CD4+T淋巴细胞计数在200～350个细胞／ul时，需考虑患者CD4+T淋巴细胞计数和病毒载量(如有条件检测)的变化以及患者的经济条件和依从性等综合因素后再考虑是否开始治疗。CD4+T淋巴细胞<200个细胞／ul时，应给予抗卡氏肺孢子虫肺炎的预防性治疗。第46页/共94页病毒载量测量血浆中的病毒数量病毒载量检测可用于：是抗病毒治疗失败早期、最可靠的标记物，抗病毒治疗失败的原因，如：依从性差耐药监测对抗病毒治疗的反应诊断HIV感染后和孕晚期各进行一次病毒载量检测病毒载量（RNA-PCR）检测47第47页/共94页第48页/共94页在HIV/AIDS中进行病毒载量检测的意义一、早期诊断和辅助诊断二、病程监控、预测疾病进程三、开始进行抗病毒治疗的指针四、评价药物的疗效（无效、耐药）1、检测的频度应在基线后每3-4月进行1次2、新药应在2-4周进行。病毒载量下降≥50%(0.3log10)才有意义3、治疗理想的反应：第4周病毒载量下降1.5-2log10,12-16周小于500cp/ml,16-24周小于50cp/ml第49页/共94页检测检测对象原因临床指导CD4+T淋巴细胞计数所有HIV感染孕产妇基线评估是否需要抗病毒治疗孕产妇：抗病毒治疗：CD4<350个细胞/mm3预防应用抗病毒药物：CD4≥350个细胞/mm3全血细胞计数（CBC）所有HIV感染孕产妇AZT可引起贫血或白细胞计数降低如果Hb<9g/dl，不用使用AZT转氨酶所有HIV感染孕产妇如果ALT或AST升高，NVP肝损害副作用的风险较高如果ALT/AST升高超过3倍，不要使用NVP尿肌酐所有HIV感染孕产妇如果升高，需要调整抗病毒药物的剂量需要参考各种抗病毒药物剂量说明HIV感染孕产妇常规实验室监测（1）50第50页/共94页检测检测对象原因临床指导血糖所有HIV感染孕产妇PI类药物可致血糖升高糖尿病人避免应用PI类药物血脂如果使用PI类药物PI类药物可致血脂升高如果血脂升高，避免应用PI类药物梅毒血清学试验所有HIV感染孕产妇筛查是否同时感染梅毒如果梅毒检测阳性，治疗梅毒HBsAg如果需要，丙肝血清检测所有HIV感染孕产妇筛查HBV/HCV感染HBV暴露婴儿出生后24小时内给予HBV疫苗和免疫球蛋白注射；如果HBV/HCV阳性，避免使用NVP胸部X线片和/或结核皮肤试验所有HIV感染孕产妇筛查结核进一步调查如果活动结核，治疗如果必要，考虑异烟肼预防性治疗（IPT）HIV感染孕产妇常规实验室监测（2）51第51页/共94页六、HBV感染的检测52第52页/共94页妊娠期HBV感染筛查标记物描述作用动力学乙肝表面抗原（HBsAg）

感染过程中位于病毒表面的蛋白血液中可检测到提示感染无法鉴别急性或慢性感染暴露后3–5周后出现，持续到感染消除所有孕产妇均应在孕期尽早接受HBsAg检测筛查是否感染HBV如果分娩前尚未有检测结果，应在分娩前尽快进行检测如果HBsAg检测阳性，有条件可考虑进行其他HBV标记物检测。注意，暴露婴儿的处置不受母亲其他HBV标记物检测结果的影响53第53页/共94页乙肝标记物列表抗原/抗体解释

临床意义

HBsAg 潜在感染出现症状前数周或之后数月可检测到慢性感染时持续存在感染HBVHBeAg病毒复制，传染性高有传染性抗HBs抗体对HBV免疫（疫苗或既往感染）对HBV免疫抗HBc抗体（总）急性、慢性或既往感染暴露抗HBcIgM抗体急性感染急性感染54第54页/共94页HBV暴露婴儿的实验室检测HBsAg阳性母亲所生婴儿，出生时应接受乙肝疫苗接种，并在完成全部3剂乙肝疫苗接种后的

6个月接受HBsAg和抗HBs抗体检测（即出生后12个月时）结果解释：如果HBsAg阳性并持续6个月，婴儿慢性感染如果抗Hbs抗体阳性（>100mIU/ml），婴儿有免疫保护如果HBsAg阴性和抗HBs抗体<100mIU/ml，婴儿应再次接受3剂乙肝疫苗接种55第55页/共94页七、妊娠期整合检测采血程序56第56页/共94页妊娠期整合检测HIV、梅毒和HBV的

采血程序检测前提供相关信息后，医务人员应：获得孕产妇及配偶（如果配偶也同时接受检测）的口头同意戴上乳胶手套，采血摘掉手套标记采血管（根据当地方案要求），填写化验单，登记患者编号和采血日期用合适的容器将血样本转送到实验室进行检测向孕产妇解释如何能够获得检测结果57第57页/共94页八、要点小结58第58页/共94页要点-HIV使用快速筛查试验诊断HIV感染。筛查检测结果阳性，进行确认试验以保证结果的准确性。HIV感染抗病毒治疗应根据：CD4+T淋巴细胞计数检测结果，反映HIV对免疫系统的影响HIV病毒载量检测结果，反映血液中HIV病毒的数量如果有条件，应用HIV-DNAPCR检测方法诊断婴儿是否HIV感染儿童满12-18月龄，HIV抗体检测方可确认儿童是否感染59第59页/共94页要点--HBV通过筛查HBsAg诊断HBV感染如有条件，筛查HBsAg结果阳性，可进一步检测其他HBV标记物，如乙肝二对半、乙肝三对HBsAg阳性母亲所生婴儿，出生时接受乙肝疫苗接种，应在出生后12个月接受HBsAg和抗HBs抗体检测60第60页/共94页婴儿艾滋病感染早期诊断工作方案第61页/共94页第62页/共94页一、梅毒的实验室检测简介63第63页/共94页综合产前检查服务+检测孕产妇参加产前检查服务检测前信息HBV检测梅毒检测HIV检测全血细胞计数和其它检测取血样64第64页/共94页梅毒筛查检测筛查检测用于诊断产检、临产及分娩的孕产妇是否感染梅毒：梅毒血清学检测筛查检测应具有较高的灵敏度和特异度操作简单、容易获得、便宜尽可能在“当日”获得结果65第65页/共94页iPMTCT筛查检测何时使用何种检测？梅毒检测方法非梅毒螺旋体抗原血清学试验（RPR或TRUST检测）梅毒螺旋体抗原血清学试验（TPPA、ELISA或梅毒快速检测）检测时间第一次产检（孕早期）或下一次产检时如有必要，孕晚期再次检测此前无检测结果，则在分娩时检测66第66页/共94页二、梅毒感染的检测67第67页/共94页梅毒早期诊断的依据之一是病原学检测，即在组织或分泌物中检测到苍白螺旋体：暗视野显微镜镀银染色镜检梅毒诊断检测（1）68第68页/共94页血清学试验检测梅毒感染相关抗体非梅毒螺旋体抗原血清学试验（检测非特异性抗体）RPR（快速血浆反应素环状卡片试验）TRUST（甲苯胺红不加热血清试验）VDRL（性病研究实验室试验）梅毒螺旋体抗原血清学试验（检测特异性梅毒螺旋体抗体）TPPA（梅毒螺旋体颗粒凝集试验）ELISA（酶联免疫吸附试验）POC（快速检测、一站式检测）梅毒诊断检测（2）69第69页/共94页梅毒血清学试验基本实验室设备检方法检测样本类型必要设备血清血浆全血RPR/TRUST√√水平旋转仪TPPA√√震荡仪ELISA√√酶标仪、洗板机POC检测√√√无需特殊设备70第70页/共94页非梅毒螺旋体抗原血清学试验（1）

梅毒螺旋体感染可产生非特异性抗体（非梅毒螺旋体抗体）非梅毒螺旋体抗体又称之为反应素，是抗心磷脂等抗原的抗体随菌体和宿主细胞的类脂质抗原量升高除梅毒外，其他医学情况会造成非梅毒螺旋体抗原血清学试验假阳性结果，包括结核、疟疾、妊娠和风湿关节炎、狼疮及硬皮病等自体免疫学疾病71第71页/共94页非梅毒螺旋体抗原血清学试验（2）抗体滴度通常与疾病活动度有关。治疗后（可能几个月）非梅毒螺旋体抗原血清学试验通常转变为不反应如果用同一种实验，相同试验滴度4倍变化（如从1:16下降到1:4或从1:8上升到1:32）为临床显著变化有些病人，抗体滴度可始终处于较低水平，有时可持续终生（血清固定）注意：病人血清学监测应在同一个实验室使用同一种检测方法（RPR、TRUST）进行连续多次检测；RPR和TRUST方法均有效，但检测的滴度结果不能直接进行比较72第72页/共94页非梅毒螺旋体抗原血清学试验的特点非梅毒螺旋体抗原血清学试验：快速、简便、便宜敏感性和特异性较高硬下疳后1-2周变为阳性可用于筛查样本评估对治疗的反应鉴别复燃还是再次感染73第73页/共94页治疗后非梅毒螺旋体抗原血清学试验

抗体滴度变化的临床意义一期梅毒和二期梅毒：成功治疗，抗体滴度应3个月后下降2倍6个月后下降4倍一期梅毒：1年后抗体滴度转阴二期梅毒：2年后抗体滴度转阴晚期梅毒：治疗后抗体滴度缓慢下降50%的病人2年后抗体滴度仍为阳性74第74页/共94页确保非梅毒螺旋体抗原血清学试验

质量的关键点按照标准操作程序（SOP）进行操作推荐使用评价特性较好的试剂*按照统一的标准报告结果开展实验室室内质控（IQC）和参加室间能力验证（PT）*由中国疾病预防控制中心性病中心国家参比实验室提供75第75页/共94页梅毒螺旋体抗原血清学试验梅毒螺旋体抗原血清学试验检测梅毒螺旋体抗原特异性抗体可用于确认非梅毒螺旋体抗原血清学试验的阳性结果，排除其假阳性阳性结果可持续存在，即使治疗后仍可为阳性。*

梅毒螺旋体抗原血清学试验与疾病的活动度无关，不能用于鉴别现症感染还是既往感染，也不能用于判断疗效*一期梅毒治疗病人中，15%-25%可在2-3年后转为血清学阴性76第76页/共94页梅毒诊断方法学比较一期梅毒二期梅毒三期梅毒敏感性特异性敏感性特异性敏感性特异性非特异性抗体（RPR、TRUST)74-87%96-99%100%96-99%34-94%96-99%特异性抗体(TPPA、ELISA)70-100%94-100%100%94-100%95-98%94-100%第77页/共94页妊娠期梅毒检测所有孕产妇应进行梅毒筛查检测：孕期尽早（如果可能，在孕早期时）以及

如果在分娩前/临产时没有筛查检测结果，在分娩时检测筛查检测可应用以下任何一类方法：非梅毒螺旋体抗原血清学试验（滴度）或

梅毒螺旋体抗原血清学试验所有筛查检测结果阳性的孕产妇都应用另外一类检测方法进行复检确认是否为现症梅毒所有产妇及所生婴儿出院前，产妇梅毒检测结果都应记录在病历中，以确保需要时给予治疗78第78页/共94页孕产妇梅毒检测流程非梅毒螺旋体抗原血清学试验梅毒螺旋体抗原血清学试验孕产妇治疗后，随访监测非梅毒螺旋体抗原血清学试验非梅毒螺旋体抗原血清学试验梅毒螺旋体抗原血清学试验每3个月进行非梅毒螺旋体抗原血清学试验如果需要进行治疗报告：非梅毒螺旋体抗原血清学试验阴性报告：两种检测均阳性治疗病人报告：

梅毒螺旋体抗原血清学试验阴性报告：非梅毒螺旋体抗原血清学试验阳性梅毒螺旋体抗原血清学试验阴性报告：梅毒螺旋体抗原血清学试验阳性非梅毒螺旋体抗原血清学试验阴性阳性反应阴性反应阴性反应阳性反应阳性反应或阴性反应阳性反应阴性反应阳性反应79第79页/共94页HIV感染病人的梅毒血清学试验一些HIV感染病人，其梅毒血清学试验结果不典型，包括滴度超常高或超常低滴度不断变动如果临床表现提示早期梅毒，而血清学试验结果与此不一致，考虑病灶活检

或暗视野显微镜检查注意：对于大多数HIV感染病人而言，梅毒血清学试验是诊断梅毒感染、随访观察疗效准确、可靠的检测方法80第80页/共94页梅毒血清学检测结果的解释非梅毒螺旋体试验梅毒螺旋体试验临床参考意义+

-RPR假阳性–考虑其他医学状况*++现症梅毒-+既往感染或极早期梅毒--排除梅毒感染由于免疫缺陷，也可发生于艾滋病晚期*包括结核、疟疾、风湿性关节炎或妊娠。81第81页/共94页三、暴露婴儿的梅毒检测82第82页/共94页梅毒暴露婴儿先天梅毒检测母体非梅毒螺旋体和梅毒螺旋体IgG抗体可通过胎盘，所以应谨慎地对婴儿梅毒血清学试验结果进行解释婴儿需要接受预防性治疗还是规范的抗梅毒治疗应根据：母亲确诊梅毒感染母亲治疗情况婴儿梅毒感染的临床表现、实验室或放射线检查结果母亲及婴儿非梅毒螺旋体抗原血清学试验滴度水平的比较（尽可能在同一个实验室使用相同的试验方法）83第83页/共94页先天梅毒的诊断标准梅毒暴露婴儿具有以下条件之一：

任何先天梅毒临床表现暗视野显微镜检梅毒螺旋体阳性（+）梅毒螺旋体IgM抗体阳性*RPR/TRUST检测阳性，滴度比母亲分娩前最近一次滴度高4倍及以上RPR/TRUST监测随访中，任何一次滴度不下降或反而上升满18月龄后，梅毒螺旋体抗原血清学试验（TPPA、ELISA或梅毒快速检测）检测阳性*IgM抗体反映近期感染，可帮助鉴别婴儿先