细胞融合定稿

细胞融合定稿第一页，共二十二页，2022年，8月28日细胞融合的应用领域

细胞融合（cellfusion)

是细胞工程技术的重要手段之一，是研究细胞遗传、基因定位、细胞免疫、病毒和肿瘤的重要手段。第二页，共二十二页，2022年，8月28日显微镜下细胞融合过程第三页，共二十二页，2022年，8月28日融合过程中两个细胞膜从彼此接触到破裂形成细胞桥的变化过程图解第四页，共二十二页，2022年，8月28日融合的助融剂依据融合过程采用的助融剂不同，细胞融合可分为：病毒诱导的细胞融合，如仙台病毒（HVJ）；化学因子诱导的细胞融合，如聚乙二醇（PEG）；电场诱导的细胞融合；激光诱导的细胞融合第五页，共二十二页，2022年，8月28日用灭活的病毒诱导的动物细胞融合过程示意图第六页，共二十二页，2022年，8月28日实验目的了解聚乙二醇（PEG）诱导体外细胞融合的基本原理。通过PEG诱导鸡血细胞之间的融合实验，初步掌握细胞融合的基本方法。第七页，共二十二页，2022年，8月28日实验原理PEG是乙二醇的多聚化合物，可改变各类细胞的膜结构，使两细胞接触点处脂类分子发生疏散和重组，诱导产生细胞融合。商品PEG存在一系列不同分子质量的多聚体，一般应用PEG4000~6000的溶液，能够产生高频率的细胞融合。第八页，共二十二页，2022年，8月28日PEG诱导融合的特点优点：是融合成本低，勿需特殊设备；融合子产生的异核率较高；融合过程不受物种限制。缺点：是融合过程繁琐，PEG可能对细胞有毒害。

第九页，共二十二页，2022年，8月28日聚乙二醇（PEG）法细胞融合过程第十页，共二十二页，2022年，8月28日实验仪器、用具注射器滴管烧杯容量瓶载玻片离心机水浴锅显微镜酒精灯盖玻片第十一页，共二十二页，2022年，8月28日试剂Hanks原液（10×）NaCl280.0gNa2HPO4·12H2O1.2gKCl4.0gKH2PO40.6gMgSO4·7H2O2.0g葡萄糖10.0gCaCl21.4g第十二页，共二十二页，2022年，8月28日试剂Hanks原液（10×）称取1.4gCaCl2，溶于30-50ml蒸馏水中取1000mL的烧杯及容量瓶各1个，先放重蒸水800mL于烧杯中，然后按上页表顺序逐一溶解药品。直到葡萄糖完全溶解后，再将已溶解的CaCl2溶液加入，最后加水定容至1000mL第十三页，共二十二页，2022年，8月28日试剂Hanks液Hanks原液100mL重蒸水896mL0.5%酚红4mL配好的Hanks液，分装包扎好贴上标签，经过灭菌后，4℃保存。第十四页，共二十二页，2022年，8月28日试剂生理盐水50%（m/V）PEG溶液称取0.5克PEG(MW=4,000)放入试管内，在酒精灯上融化之，迅速加入1ml预热的Hanks液混匀制成50％的PEG溶液。放入37℃水浴中待用。第十五页，共二十二页，2022年，8月28日方法与步骤1.鸡血细胞储备液的制备（已完成）取鸡血，加入肝素（100U/5mL全血）制成抗凝全血。再加入4倍体积生理盐水，制成红细胞储备液2.鸡血细胞的处理用5mL离心管取鸡血细胞储备液1mL，加入4mL生理盐水，混匀后，800rpm离心5min，弃上清，用5mL生理盐水重悬浮沉淀，重复离心操作1次。第十六页，共二十二页，2022年，8月28日方法与步骤3.鸡血细胞悬液的制备在离心后的鸡血细胞沉淀中加入2mlHanks缓冲液，将细胞悬浮，于37℃保温。4.PEG诱导细胞融合吸取1mL鸡血悬液放在10mL离心管中，逐滴加入37℃的50%PEG约0.5mL,边加边轻轻摇动，1min加完，混匀后于37℃水浴静置3min。第十七页，共二十二页，2022年，8月28日方法与步骤5.终止PEG作用缓慢加入5mLHanks缓冲液，轻轻吹打混匀，于37℃水浴中静置5min。6.制备细胞悬液用吸管轻轻吹打细胞团数次使其分散，离心使细胞沉淀，用1-2mLHanks缓冲液重悬浮。7.镜检吸取细胞悬液，在凹面载玻片上滴一滴，盖上盖玻片，在显微镜下观察细胞融合情况。第十八页，共二十二页，2022年，8月28日注意事项温度、融合时间、PEG的浓度与作用时间、细胞密度、机械力等因素均影响融合率，实验操作时应予以注意，并在需要的时候及时镜检。第十九页，共二十二页，2022年，8月28日实验结果第二十页，共二十二页，2022年，8月28日计算细胞融合率细胞融合率是指在显微镜的视野内，已发生融合细胞的细胞核总数与该