药物制剂的微生物学检查

药物制剂的微生物学检查第一页，共三十七页，2022年，8月28日无菌制剂的无菌检查

各种注射剂、手术用滴眼剂要求无菌、无热原质，尤其是直接注入病人血管内的注射剂，如被微生物或热原质污染即有可能引起发热、菌血症、中毒性休克甚至死亡等等。因此药典规定出厂前都必须做无菌检查以确保安全。第二页，共三十七页，2022年，8月28日无菌检查的基本原则：在无菌操作情况下将被检测的药品，按其剂型的不同分别取一定量加入适合各类微生物生长的不同培养基（需氧菌、厌氧菌及真菌培养基）中，在各自适宜的条件下进行培养。在规定时间内观察有无微生物生长，以判断药品是否符合要求确为无菌。第三页，共三十七页，2022年，8月28日一般注射剂系指本身不含任何抗菌或抑菌成分，而且其为水溶性的药品的无菌检查特殊注射剂油剂性药物含抑菌或防腐成分药物第四页，共三十七页，2022年，8月28日一般注射剂的无菌检查直接接种法第五页，共三十七页，2022年，8月28日需氧菌和厌氧菌的培养已全部采用硫乙醇酸钠培养基检查。在同一培养基中，需氧菌在培养基表面生长，而厌氧菌在培养基内生长。真菌检查用真菌培养基

第六页，共三十七页，2022年，8月28日硫乙醇酸钠培养基硫乙醇酸钠还原剂亚甲蓝氧化还原指示剂下层－－厌氧－－无色上层－－需氧－－蓝绿色第七页，共三十七页，2022年，8月28日阳性对照：需氧菌：藤黄八叠球菌厌氧菌：产芽胞杆菌真菌：白色念珠菌方法：在培养基中加入对照菌。意义：阳性对照必须长菌，证明微生物确实可在应用的实验条件下生长。第八页，共三十七页，2022年，8月28日阴性对照：用未加药物和对照菌的培养基意义：证明培养基本身无菌。

第九页，共三十七页，2022年，8月28日

测试时用无菌操作法吸取一定量的药物加入各种培养基内在适宜的温度下培养，并每天观察作出记录。如在规定时间内无任何微生物生长则可判定待检药品符合标准.需氧菌、厌氧菌：37℃５天真菌：25℃７天第十页，共三十七页，2022年，8月28日特殊注射剂的无菌检查１、油剂性药物的检测油剂性药物因难于和培养基充分混合，往往影响检出结果。如果加入吐温－80，与油剂性药物混合乳化，再用培养基稀释，可以使药品均匀分布在培养基中。对照：吐温－80。第十一页，共三十七页，2022年，8月28日２、含抑菌或防腐成分药物的检测有些药品本身含有抑菌成分，或于制作过程中加入防腐剂等，如按上法检测往往不能证明它们是否真正无菌，必须先经一定的处理。灭活法、稀释法、微孔滤膜过滤法和离心沉淀集菌法第十二页，共三十七页，2022年，8月28日薄膜滤菌器第十三页，共三十七页，2022年，8月28日口服药及外用药物

的微生物学检查

口服药：细菌总数、霉菌总数、大肠杆菌、活螨的检测。

外用药：绿脓杆菌、金黄色葡萄球菌和破伤风杆菌。一般眼科制剂：细菌总数、霉菌总数、绿脓杆菌、金黄色葡萄球菌。均不能检出致病菌。第十四页，共三十七页，2022年，8月28日细菌总数测定

细菌总数，指每克或每毫升待检药品内含有的活菌总数。它能判明待检药品被细菌污染的程度，生产单位的原料、设备及工艺流程的卫生状况。第十五页，共三十七页，2022年，8月28日方法：普通琼脂培养基倾注平皿计数法。

37℃，72小时将一定稀释度的药物和琼脂培养基混合后，培养一定时间，计数平板内的菌落，根据数得菌落均值和相应稀释度的乘积，得到每克或每毫升待检药品中所含细菌总数，判断药品是否符合标准。一般选取菌落数在30-300之间的平板计数。第十六页，共三十七页，2022年，8月28日霉菌总数测定

霉菌总数测定是了解待检药品每克或每毫升内含有的活霉菌总数，借以判明药品的真菌污染程度。第十七页，共三十七页，2022年，8月28日琼脂倾注平皿计数法虎红培养基25℃，72小时选取菌落数在5-50个的平板，根据数得菌落均值和相应稀释度的乘积，得到每克或每毫升待检药品中所含细菌总数，判断药品是否符合标准。第十八页，共三十七页，2022年，8月28日病原菌检验大肠杆菌沙门菌绿脓杆菌金黄色葡萄球菌破伤风杆菌第十九页，共三十七页，2022年，8月28日大肠杆菌

大肠杆菌是人、畜肠道主要寄生菌。它随粪便排出体外，故常作为食品、饮水等被粪便直接或间接污染的指示菌。如药品中检出大肠杆菌，表明该药品已被粪便污染，可能有肠道致病菌和寄生虫卵等病原体存在，服用后有被感染的危险性。因而，不能用灭菌方法处理的口服药物，大肠杆菌检测是常规项目之一。第二十页，共三十七页，2022年，8月28日

检测时先把一定量药均经增菌后转种到选择鉴别培养基——麦康凯平板或伊红美兰平板（EMB平板）。培养后挑取可疑菌落作革兰染色及生化反应。生化反应包括IMViC试验和乳糖发酵试验。大肠杆菌IMViC试验结果为+、+、—、—第二十一页，共三十七页，2022年，8月28日

大肠杆菌的鉴定主要靠形态和生化反应两方面的特征。但由于大肠杆菌和产气杆菌在形态和生化反应方面有相似之处，而产气杆菌一般多存在于水中，无卫生学意义。因而检测大肠杆菌要与产气杆菌相鉴别。二者的鉴别一般采用IMViC试验（I——吲哚试验，M——甲基红试验，Vi——V．P．试验，C——椽枸酸盐利用试验）来鉴定。第二十二页，共三十七页，2022年，8月28日

如检测结果为革兰阴性杆菌，乳糖发酵阳性及IMViC试验符合，则可判断每克或每毫升药品检出大肠杆菌。第二十三页，共三十七页，2022年，8月28日沙门菌

寄生于人和动物的肠道内，能引起伤寒、副伤寒、急性胃肠炎（食物中毒）和败血症。第二十四页，共三十七页，2022年，8月28日1、革兰阴性，杆菌2、分离培养：EMB平板上菌落无色或粉红色。3、生化反应：4、血清学反应：凝集反应：抗原——可疑菌，抗体——沙门菌A-F组的多价血清（抗O抗体）第二十五页，共三十七页，2022年，8月28日O抗原：细菌细胞壁脂多糖中的特异性多糖，100℃不被破坏。至少有58种，可将沙门菌分为多个组。引起人类疾病的为A-E组。H抗原：鞭毛抗原，不耐热，60℃，30分钟被破坏。第二十六页，共三十七页，2022年，8月28日绿脓杆菌绿脓杆菌为条件致病菌，对烧伤、眼科疾病等病人可因感染后病情加重，造成患者创伤处组织化脓，严重的可引起败血症、眼角膜溃疡甚至失明。第二十七页，共三十七页，2022年，8月28日将被检药品经增菌后转种明胶十六烷三甲基溴化胺琼脂平板上，经培养后根据菌落特征、蓝绿色色素、革兰阴性杆菌，氧化酶试验和绿脓菌素试验均阳性，可得出结论。

第二十八页，共三十七页，2022年，8月28日氧化酶试验细菌的氧化酶能将二甲基对苯二胺脱氨而成带有红色的醌类化合物。绿脓菌素试验绿脓菌素溶于氯仿内，加入盐酸变成粉红色第二十九页，共三十七页，2022年，8月28日

金黄色葡萄球菌

金黄色葡萄球菌是最常见的化脓性球菌之一，80%以上的化脓性疾病由本菌引起。它广泛分布于自然界中，常可污染药品及食品，也经常存在于人的皮肤及某些腔道中。在制药过程中可被混入药品内，在条件合适时引起疾病。因而目前规定，凡外用药和眼科制剂不得检出金黄色葡萄球菌。第三十页，共三十七页，2022年，8月28日药物在检测时先经亚碲酸钠肉汤增菌，然后转种选择培养基（如甘露醇高盐琼脂、卵黄高盐琼脂等）经培养后挑取可疑菌落作革兰染色及生化反应。根据选择培养基上典型菌落、革兰阳性菌、发酵甘露醇及血浆凝固酶阳性。可得出结论，检测到金葡菌。第三十一页，共三十七页，2022年，8月28日破伤风杆菌

破伤风杆菌广泛存在于土壤及人和牲畜的粪便中。以根，茎、叶类植物为原料的中草药制剂特别易受破伤风杆菌污染，在条件合适时感染伤口引起病变。因此用于深部组织、创面和溃疡面的外用制剂不得检出破伤风杆菌。第三十二页，共三十七页，2022年，8月28日检测时首先把待检药品加入到0.1％葡萄糖庖肉培养基中进行增菌产毒培养。根据培养基所表现出的破伤风杆菌生长特有的现象（产气、有恶臭味、消化庖肉），再经革兰染色及动物毒力试验和保护力试验证实。如找到革兰阳性破伤风杆菌的典型形态，毒力试验和保护力试验阳性，可确证存在破伤风杆菌。第三十三页，共三十七页，2022年，8月28日毒力试验和保护力试验取破伤风杆菌液体培养物于小鼠后肢肌肉注射，动物发病时，腿及尾巴强直，肢体痉挛，最后死亡。在对照组动物中，先注射破伤风抗毒素，再注射液体培养物，则该动物得到特异性保护。第三十四页，共三十七页，2022年，8月28日上述致病菌检测时，皆需同时作相应细菌的阳性对照试验，即与药品检测同步用阳性对照菌作对照试验。目的是检测待检药品本身有无干扰因素（如抑菌或防腐成分）；以及所用常规检测方法的灵敏度。方法是将所要检测菌的相应阳性对照菌株，稀释成每毫升含活菌1000个的菌液，将其0.lml吸到待检药品的相应培养液中，在同等条件下进行检测。如果阳性对照菌生长良好，说明检测结果有效。第三十五页，共三十七页，2022年，8月28日活螨的检验

螨本身带有各种