细胞培养常用试剂

细胞培养常用试剂第一页，共十五页，2022年，8月28日Hank’s液D-Hank`s液PBSEDTA胰蛋白酶青霉素、链霉素第二页，共十五页，2022年，8月28日Hank`s液与D-Hank`s液

Hank`s液是常见的平衡盐溶液(BSS)之一。D-Hank`s液则是无钙镁离子的Hank`s液（也有资料认为除了不含钙镁离子之外也不含葡萄糖）。BSS与细胞生长状态下的pH值、渗透压及无菌状态一致，且配方简单，是组织培养基本用液，常用于配制培养基及其他用液，或洗细胞等，细胞在这种BSS中可生存几个小时。第三页，共十五页，2022年，8月28日Hank`s液配方Hank`s液（原液）

原液甲：NaCl

160g

KCl

8g

MgSO4·7H2O

2g

MgCl2·6H2O

2g

上述试剂加入800ml双蒸水。溶解。

CaCl2

2.8g溶于100ml双蒸水

上述二液混合，加双蒸水至1000ml，再加2ml氯仿防腐，4℃保存。

原液乙：

Na2HPO4·12H2O

3.04g

KH2PO4

1.2g

葡萄糖

20g

加入800ml双蒸水，溶解。

0.4%酚红溶液

100ml

上述二液混合，加双蒸水至1000ml，再加2ml氯仿防腐，4℃保存。

使用时甲，乙原液按下列比例配成Hanks液

使用液：原液甲1份、原液乙1份、双蒸水18份滤过，20min灭菌，放4℃冰箱保存，使用前用NaHCO3调整pH值。第四页，共十五页，2022年，8月28日D-Hank`s液配方D-Hanks液

NaCl

4.5g

KCl

0.2g

NaHCO3

0.175g

Na2HPO4·12H2O

0.076g

KH2PO4

0.03g

葡萄糖

0.5g

0.4%酚红

2.5ml

将上述成分依次溶解或加入到双蒸水中，最后加双蒸水定容至500ml，以5.6%NaHCO3调整pH值至7.4，4℃冰箱保存备用。第五页，共十五页，2022年，8月28日酚红在低pH值时呈现黄色,在pH6.6至8.0间会呈现橙色，在高pH值时呈现红色。酚红只是起指示酸碱度的作用，有酚红较方便但没有也无妨。有人主张最好不用酚红，可能对细胞生长不利，有时也会影响一些检测结果。此外酚红有雌激素样作用，所以如果做相关的实验最好不加。第六页，共十五页，2022年，8月28日对于Hank`s与D-hank`s液的配制，不同的文献有不同的配方我们可以看到，两者最主要的区别就是D-hank`s液中没有钙镁离子。第七页，共十五页，2022年，8月28日Hank`s液与D-Hank`s液

用途上的比较Hank`s液是组织培养基本用液，常用于配制培养基及其他用液，或洗涤组织、细胞等。细胞在Hank`s液中可以在一段时间内维持一定的活力。另外Hank`s液还可以用于终止EDTA的作用。配制胰酶液或者是胰酶/EDTA的基础液都是D-hanks液，而不能使用Hank`s液。这是由于钙离子和镁离子会影响胰蛋白酶的活性，也会阻碍EDTA的作用。第八页，共十五页，2022年，8月28日PBS磷酸盐缓冲液

磷酸盐是生物化学研究中使用最广泛的一种缓冲剂，由於它们是二级解离，有二个pKa值，所以用它们配制的缓冲液，pH范围最宽：

NaH2PO4：

pKa1＝2.12，

pKa2＝7.21

Na2HPO4：

pKa1＝7.21，

pKa2＝12.32

配酸性缓冲液：用

NaH2PO4，pH＝1～4，

配中性缓冲液：用混合的两种磷酸盐，pH＝6～8，

配碱性缓冲液：用

Na2HPO4，pH＝10～12。

因为低温时钠盐难溶，钾盐易溶，一般情况下用钾盐比钠盐好（使用SDS时除外）。第九页，共十五页，2022年，8月28日PBS与Hank`s液的用途区别PBS：磷酸缓冲盐溶液——具有pH缓冲作用的等渗盐溶液。多用于非活体。

Hank`s：平衡盐溶液——无机盐和葡萄糖浓度接近大部分动物（植物）细胞的水平，可作为动（植）物细胞短期培养（保存）。多用于活体。Hank`s液中盐成分较PBS复杂，且有葡萄糖，可为细胞提供简单的营养，而PSB中只有磷酸根，钠，钾，氯离子，只是最简单的盐平衡缓冲液，不能为细胞提供暂时的营养。第十页，共十五页，2022年，8月28日其他缓冲系统碳酸盐缓冲系统一般细胞培养液的pH在之间。由于碳酸盐pH缓冲系统是一种生理pH缓冲系统，大多数培养液用它来保持稳定的pH。为了维持稳定的pH，培养箱中的二氧化碳需要维持在2-10%之间，以保持培养液中溶解的二氧化碳的浓度。第十一页，共十五页，2022年，8月28日HEPES缓冲系统HEPES，即4-羟乙基哌嗪乙磺酸HEPES在之间有很强的缓冲能力，当透气的培养器皿被拿到二氧化碳培养箱外面的时候，由于空气中二氧化碳浓度很低，培养液中碳酸盐缓冲系统就会失去效果，这时候HEPES缓冲系统就能继续保持pH的稳定。第十二页，共十五页，2022年，8月28日EDTA与胰蛋白酶EDTA，常用的阳离子螯合剂。组织细胞间存在钙黏蛋白（一类Ca2+依赖的细胞黏着糖蛋白）。而EDTA可以通过螯合金属离子，破坏Ca2+或Mg2+依赖性的细胞黏着。胰蛋白酶水解细胞间的蛋白质，方便形成细胞悬液。第十三页，共十五页，2022年，8月28日消化细胞时