医院细胞遗传室常用试验溶液试剂的配置作业指导书

医院细胞遗传室常用实验溶液试剂的配置作业指导书1目的规范试剂的配制，为临床实验的可靠性提供质量保障。2原则专人负责，一剂一皿，一配一录，双人核签。定期校对，可溯源。3性能特征规范试剂的配制，为临床提供准确稳定有效的试剂，减少人为因素对临床试验结果的影响。4方法化学实验试剂的配制方法5试剂与耗材量筒、烧杯、玻棒、电子称、量杯、容量瓶、定容瓶、油纸、药勺、100ul加样枪、100ul枪头6操作步骤生理盐水准确称取氯化钠（NaCl）（生产商xxxx,批号xxxx有效期xxx）8.5g，加二蒸水溶解定容至1L，待充分溶解混匀装瓶，贴标签（配置日期、药品名称、浓度、用途、有效期、配制双人），记录双人签名0.075M氯化钾溶液氯化钾（KC1）5.587g,加二蒸水至1000ml,室温保存，用于细胞低渗处理。12XSSC溶液氯化钠（NaCl）105.3g柠檬酸钠（Na3c6H3O7•5H2O）52.94g加二蒸水至1000ml,室温保存，临用时用二蒸水稀释至所需浓度。0.25%胰蛋白酶溶液（Trypsin）胰蛋白酶粉末（1:250）250mg无Ca2+,MgZ+的PBS加至100ml先用少许消毒的PBS将胰蛋白酶粉末溶解，再补足PBS至100ml,搅拌混匀，置4℃冰箱4小时，用0.22um微孔滤膜除菌，分装成小瓶于-20℃保存，用于消化细胞。Giemsa染色液Giemsa储备液：配制：Giemsa粉末1g加少许甘油混合研碎一共计加入甘油66ml,充分混匀—倒入烧杯中在55-60℃水浴中加热2小时一冷却一加入甲醇66ml,充分混合一在室温中静置2-3周，过滤贮存于棕色瓶中，可长期使用。6%Giemsa工作液：47ml蒸馏水中加入Giemsa储备液3ml,用于染色体标本的染色，一般染色时间为10-20分钟。无钙镁离子溶液氯化钠（NaCl） 8g氯化钾（KCl） 0.2g柠檬酸三钠Z3c6Hs勺24。）lg磷酸二氢钠（NaH2PO4・H2。）0.05g碳酸氢钠（NaHCO3）lg葡萄糖lg依次溶于二蒸水，最后加二蒸水至1000ml,用除菌滤器除菌，保存于4℃冰箱备用。Hank’s溶液（1）原液甲:80g4g1g1g0.714g80g4g1g1g0.714g硫酸镁（MgSO“H2O）氯化镁硫酸镁（MgSO“H2O）氯化镁(MgCl2・6H2O)氯化钙（CaCl2）将氯化钙溶液于50ml二蒸水中，其它依次溶于100ml二蒸水中，两液混合，加二蒸水至500ml，加氯仿保存于4℃冰箱中。（2）原液乙：TOC\o"1-5"\h\z\o"CurrentDocument"磷酸氢二钠（Na2HpO4） 1.52g\o"CurrentDocument"磷酸氢二钾（KH2PO4） 0.6g葡萄糖 10g0.4%酚红液 50ml依次溶于400ml二蒸水中，加入酚红液，加二蒸水至500皿1，加入氯仿，保存于4℃冰箱中。（3）使用液：取原液甲25ml，原液乙25皿1，加入已预先灭菌的二蒸水至500ml，分别装入溶液瓶中，以9磅高压蒸汽灭菌10分钟,冷却后，置4℃冰箱中保存，使用前以3.5%的NaHCO3液调pH。0.02%乙二胺四乙酸二钠溶液TOC\o"1-5"\h\z乙二胺四乙酸二钠（EDTA） 0.1g氯化钠（NaCl） 4g氯化钾（KCl） 0.1g磷酸氢二钠（Na2HPO4・H2O） 0.576g磷酸二氢钾（KH2PO4） 0.1g葡萄糖 0.1g依次溶于二蒸水中，加入0.4%酚红溶液2.5ml，最后加入二蒸水至500ml，用溶液瓶分装，9磅10分钟高压蒸汽灭菌，保存于4℃冰箱，使用时用3.5%碳酸氢钠溶液调pH，用于分散细胞。秋水仙素溶液称取2毫克秋水仙素，溶解于100ml0.85%的NaCl溶液中，用时最终浓度根据不同的培养材料而定，一般0.04-0.0®g/ml培养液。抗菌素和抗霉素溶液为了预防因无菌操作不严而发生污染，通常在培养液内加入适量的抗菌素，常用的有青霉素和链霉素合用，浓度分别为50-100IU/1ml，还有放线菌素B（Actinomycin8）或制霉菌素（mycostatin）可抑制霉菌污染。组织、细胞培养常用

抗生素见表3-5表3-5组织、细胞培养常用抗生素液（引自Pollardetal.1997）抗生素作用对象参考浓度（g/ml）稳定性（d）二性霉素-B真菌13氨苄青霉素革兰氏阳性、阴性菌1003氯霉素革兰氏阴性菌55红霉素革兰氏阳性、支原体1003庆大霉素革兰氏阳性、阴性菌、支原体505卡那霉素革兰氏阳性、阴性菌1005制霉菌素真菌503青霉素-G革兰氏阳性菌100IU/ml3链霉素革兰氏阳性、阴性菌1003利福平革兰氏阳性、阴性菌503四环素革兰氏阳性、阴性菌、支原体104*使用表中所列出的工作浓度，可在37℃长时间控制轻度污染，而对细胞无毒性作用。大多数的体外培养都使用青霉素和链霉素，其它抗生素仅在特殊情况下使用。小牛血清小牛的年龄约6个月，体重限于500磅以内，放血致死，取得小牛血清。肝素溶液取肝素1g加无菌生理盐水2.5ml，即成4%的肝素溶液，可用于肝素化外周血培养基。而抽血时则用临床注射用肝素（每支2ml含肝素12500U）外周血细胞培养液25毫升培养瓶中加入RPMI-1640培养基4ml，小牛血清1ml，PHA适量，0.4%肝素0.05ml，双抗：青霉素和链霉素,终浓度为100U/ml，用3.5%碳酸氢钠调节pH为7.2-7.4（目前实验室已采用商业化培养基）。骨髓及其他悬浮细胞培养液含有20%小牛血清的RPMI1640培养基（或其他人工综合培养基），培养基的用量可视骨髓细胞的多少而定，一般为5ml。rdu和Frdu溶液Brdu250^g/ml称取Brdu62.5mg加生理盐水定容至250mlFrdu2.6mM称取Frdu128.024mg,二蒸水溶解定容至200ml,过滤除菌，避光保存。6.1650%AgNO3称取AgNO35g,HCOOH10ul,加去离子水至10ml卡诺固定液(甲醇:乙酸=3:1)5%Ba(OH)2称取Ba(OH)22.5g加二蒸水50ml溶解7高分辨染色体制备试剂的配制Frdu母液：准确称取5-氟脲喀啶核苷(Frdu)粉末0.0248g，加去离子水溶解，定容至10ml，即配成10-2M的Frdu母液。过滤分装成1ml/管，-20℃中冻存待用。Frdu工作液：准确量取已配制好的10-2MFrdu母液稀释1000倍，即配成浓度为10-5M的Frdu工作液。过滤分装，4℃中冷藏待用。Uridine母液：准确称取脲喀啶核苷(Uridine)粉末0.0246g,加去离子水溶解，定容至10ml，即配成10-2M的Uridine母液。过滤分装成1ml/管，-20℃中冻存待用。Uridine工作液：准确量取已配制好的10-2MUridine母液加去离子水稀释100倍，即配成浓度为10-4M的Uridine工作液。过滤分装，4℃中冷藏待用。TDR母液：准确称取胸腺喀啶核苷（TDR）粉末0.2432g,加去离子水溶解，定容至10ml，即配成10-1MTDR母液。过滤分装成1ml/管，-20℃中冻存待用。TDR工作液:准确量取已配制好的10-1MTDR母液稀释100倍，即配成浓度为10-3M的TDR工作液。过滤分装，4℃