W4402单增李斯特氏菌检验-国标解读与检验准备2微

单增李斯特氏菌检验—国标解读与检验准备微生物检验技术国标解读1检验准备2目录页CONTENTSPAGE1国标解读TRANSITIONPAGE一、标准版本二、标准范围三、标准检测流程GB/T4789.30-2010标准版本与GB/T4789.30-2008相比，主要变化如下：

——修改了标准的中英文名称；——删除“第二法全自动酶链荧光免疫分析仪筛选法”；——删除“第三法全自动病原菌检测系统筛选法”。一、标准版本本标准规定了食品中单核细胞增生李斯特氏菌(Listeriamonocytogenes)的检验方法。

本标准适用于食品中单核细胞增生李斯特氏菌的检验。二、标准范围2增菌

分离1三、标准检测流程34初筛鉴定5结果与报告综合生化试验和溶血试验结果，报告25g（mL）样品中检出或未检出单核细胞增生李斯特氏菌。三、检测标准流程①增菌培养：无菌取样品25g(mL)放入灭菌均质杯或均质袋中加225mLLB1增菌液，充分均质。于30℃±1℃培养24h，移取0.1mL，转种于10mLLB2增菌液内，于30℃±1℃培养18h～24h。三、检测标准流程②分离培养：取LB2二次增菌液划线接种于PALCAM琼脂平板和李斯特氏菌显色培养基上，于36℃±1℃培养24h～48h，观察各个平板上生长的菌落。PALCAM琼脂：三、检测标准流程PALCAM琼脂平板培养结果：空白对照三、检测标准流程局部放大的菌落三、检测标准流程显色培养基：三、检测标准流程③初筛：④鉴定：染色镜检、动力试验、生化鉴定、溶血试验木糖、鼠李糖发酵管TSA-YE平板划线纯化36℃±1℃培养24h30℃±1℃培养24h～48h选择性琼脂平板典型运动李斯特氏菌为革兰氏阳性短杆菌，挑取25℃培养的TSAYE平板上的菌落，制备水浸片，显微镜下观察李氏菌的翻滚、旋转运动。染色镜检：三、检测标准流程动力试验：伞状动力挑取TSBYE肉汤培养物穿刺接种SIM或半固体动力培养基试管，25℃培养5-7d。李氏菌有动力、呈现典型的伞状生长。三、检测标准流程生化鉴定：过氧化氢酶试验李氏菌过氧化氢酶阳性三、检测标准流程溶血试验：1、伊氏李斯特氏菌产生大的透明溶血环。2-3、单增李斯特氏菌和斯氏李斯特氏菌在羊血琼脂平板刺种点周围产生狭小的透明溶血环4、英诺克李斯特氏菌无溶血环协同溶血实验

两条竖线与三条横线：1、马红球菌2、金黄色葡萄球菌A.单增李斯特氏菌，在靠近金黄色葡萄球菌接种端溶血增强。B.斯氏李斯特氏菌溶血也增强。C.伊氏李斯特氏菌在靠近马红球菌接种端溶血增强。单增李斯特菌马红球菌金葡斯氏李斯特氏菌伊氏李斯特氏菌可选择生化鉴定试剂盒或全自动微生物生化鉴定系统等对TSA-YE平板上中3个～5个纯培养的可疑菌落进行鉴定。VIDAS2检验准备TRANSITIONPAGE一、设备和材料二、培养基和试剂实验设备天平、均质器、生物安全柜、恒温恒湿培养箱。实验用具无菌手术剪、镊子、样品罐、无菌吸管灭菌筒（含1mL、10mL移液管）、无菌试管、接种环、微量移液器及吸头、无菌培养皿。培养基及试剂（1）增菌试剂李氏增菌肉汤LB1，主要用于李斯特菌的选择性增菌培养。单增李斯特氏菌增菌肉汤吖啶黄素萘啶酮酸LB1液（2）二次增菌试剂李氏增菌肉汤LB2，主要用于李斯特菌的选择性增菌培养。单增李斯特氏菌增菌肉汤吖啶黄素萘啶酮酸LB2液（3）分离纯化平板PALCAM琼脂平板，用于单增李斯特氏菌选择性分离，要求每100ml基础培养基中无菌加入PALCAM选择性添加剂1支，匀后铺平板备用。基础培养基PALCAM琼脂平板选择性添加剂还有显色培养基：配置说明参考显色培养基说明书含0.6%酵母浸膏的胰酪胨大豆琼脂（TSA-YE）平板，用于单增李斯特氏菌的纯培养。（4）鉴定试剂：革兰氏染液、半固体动力培养基、过氧化氢酶实验试剂、血平板和干制生化鉴定试剂盒及其辅助试剂（糖发酵添加剂、甲基红、VP甲乙液）