细胞培养的必备设施常用器材和培养基

细胞培养的必备设施常用器材和培养基第一页，共三十页，2022年，8月28日第一节细胞培养的必备设施一、无菌实验室防止微生物污染和有害因素的影响工作环境清洁、空气清新、干燥和无烟尘。第二页，共三十页，2022年，8月28日第三页，共三十页，2022年，8月28日二、超净台第四页，共三十页，2022年，8月28日三、恒温培养箱恒温培养箱CO2培养箱第五页，共三十页，2022年，8月28日第六页，共三十页，2022年，8月28日四、其他设备倒置显微镜电热鼓风干燥箱电子天平恒温水浴箱离心机压力蒸汽消毒器冰箱第七页，共三十页，2022年，8月28日第八页，共三十页，2022年，8月28日第九页，共三十页，2022年，8月28日第十页，共三十页，2022年，8月28日第十一页，共三十页，2022年，8月28日第十二页，共三十页，2022年，8月28日第十三页，共三十页，2022年，8月28日第二节细胞培养常用器材及处理方法一、玻璃器材培养皿滴流瓶刻读吸管、离心管等培养瓶烧杯、量筒等三角烧瓶第十四页，共三十页，2022年，8月28日玻璃器材的消毒处理方法清洁液浸泡，自来水冲10次，单蒸水洗2次，培养瓶再用三蒸水浸泡过夜，烘干，包装，灭菌第十五页，共三十页，2022年，8月28日二、塑料器材多孔培养板培养皿培养瓶第十六页，共三十页，2022年，8月28日塑料器材的消毒处理方法用3%HCl或2%NaOH溶液浸泡过夜（单用或交叉处理）-水洗10次-单蒸水2次-三蒸水浸泡过夜-烘干-紫外线或辐射灭菌第十七页，共三十页，2022年，8月28日三、橡皮器材橡皮制品(最好是硅制品)主要是各种瓶或试管的塞子、盖子。橡皮器材的消毒处理方法5%NaOH煮-水洗-4%盐酸煮-水洗8~10次-单蒸水洗三次、二蒸水洗一次。第十八页，共三十页，2022年，8月28日四、金属器材剪刀、镊子、手术刀、解剖刀、血管钳、组织镊、眼科镊及各种型号针头等金属器材的消毒处理方法纸擦去表面的油脂-洗衣粉煮沸，或用1%碳酸氢钠煮沸15分钟-水洗-95%酒精纱布擦干-包装灭菌第十九页，共三十页，2022年，8月28日五、其他物品纱布注射器和针头第二十页，共三十页，2022年，8月28日第三节常用溶液、培养液及其配制一、平衡盐溶液细胞培养中常用的基本液体。（一）配液时的注意事项1）称量要准确2）物质的纯度3）物质的可溶性4）物质的不稳定性5）贮存液第二十一页，共三十页，2022年，8月28日（二)几种常用溶液的配制方法1、无钙、镁离子溶液2、磷酸盐缓冲液3、Hanks液第二十二页，共三十页，2022年，8月28日1、无钙、镁离子溶液(1000ml)氯化钠(NaCl)8g磷酸二氢钠0.05g氯化钾(KCl)0.2g碳酸氢钠1g柠檬酸三钠葡萄糖1g加去离子水或双蒸水至1000mL第二十三页，共三十页，2022年，8月28日2、磷酸盐缓冲液甲液：0.2mol/L磷酸氢二钠溶液磷酸氢二钠(无水)28.4g氯化钠8.77g加去离子水或双蒸水至1000mL乙液：0.2mol/L磷酸二氢钠溶液磷酸二氢钠(无水)2.4g氯化钠8.77g加去离子水或双蒸水至1000mL甲、乙液于4℃保存，使用时按比例，配制成所需pH浓度，高压灭菌后室温保存。第二十四页，共三十页，2022年，8月28日3、Hanks液

(1)母液甲(20x)配法①NaCl(A.R)160g，KCl(A.R)8g，MgSO4.7H2O（A.R)2g，MgCl.6H2O(A.R)2g，依次溶于800mL双蒸水中，前一物质溶后再加后一种。②CaCl2(A.R)2.8g溶于100mL双蒸水中，溶时不断搅拌（此液应单配，单溶）。待上述两溶液中的“溶质”全溶后，将它们混合，再用双蒸水补至1000mL，向其中加2mL氯仿作为防腐剂，置4℃保存。第二十五页，共三十页，2022年，8月28日(2)母液乙(20×)配法①Na2HPO4.12H2O(A.R)3.04g，KH2PO4(A.R)1.20g，葡萄糖(A.R)20.0g溶于800ml双蒸水中。②0.4%酚红液0.4g酚红放在玻璃研钵后加0.01NNaOH11.28mL，直到全部溶解，移入100mL容量瓶中，加水至100mL，过滤，pH为7.4，4℃保存。待上述各“溶质”完全溶解后，用双蒸水补至1000mL,其中加氯仿2mL作防腐剂，置40℃保存第二十六页，共三十页，2022年，8月28日(3)使用液（1×）配法取母液甲和母液乙各一份，加双蒸水18份，分装后，塞好瓶塞，挂上标志。以115℃高压灭菌25分钟(以免葡萄糖破坏)，置室温后4℃保存，可使用几个月。临用前，用7.5%NaHCO3调至所需pH。第二十七页，共三十页，2022年，8月28日二、其他溶液（一）pH调节液（二）消化液（三）抗生素溶液（四）0.5%台盼兰(Trypanblue)液（五）0.1%结晶紫第二十八页，共三十页，2022年，8月28日三、培养基（维持液、营养液）

(一)天然培养基(组成=平衡盐溶液+天然动物成分)1、血清（马、兔、鸡、小牛、新生小牛和胎牛）（1）收集与保存（2）小牛血清对细胞的作用提供细胞增殖所必须的生长因子（A因子促进；B、C因子对细胞有抑制生长作用；D因子促进细胞粘连）对细胞附壁有利保护作用，解除毒性物质对细胞的毒性作用