生物化学实训教案

学实训教案天津开发区职业技术学院2007——2008学年度第一学期教案（实践课）工学院生物技术系（部）生物专业06年级课程生物化学实验班级生物061~2姓名张冲实践课教案首页课题名称生物化学实验课程类型实验课课时（或单元）4课时实验课类型生物化学实践教材（名称、生物化学实验讲义（自编）作者、出版社）教学场所生物实验室接受实践教学单位性质与特色教学目的学习柱色谱的原理和操作方法重点、难点分析实验原理与操作技法实践分组要求3~4人一组，以个人为单位撰写实验报告感谢阅读组长条件与职责管理本组的实验器材和设备，组织组员进行实验感谢阅读25250精品文档放心下载实践课所需仪器滴管，中性氧化铝和碱性氧化铝（100—200目，干燥失精品文档放心下载重不大于1%）每组各1595%乙醇和蒸馏水，谢谢阅读设备与条件1毫升每组，滤纸，玻璃棉或脱脂棉实验题目日期实验目的实践报告（总结）基本原理要求实验步骤实验结果与分析思考题学生对基本理论的理解一般，操作能力有待进一步提高。小结说明：由于该教案涵盖较广，因此不是各栏必须填写教案纸实验一柱色谱法分离物质原理一、目的要求学习柱色谱的原理和操作方法二、基本原理柱色谱法可看作是一种面—液色普法，它是通过色谱柱进行分离的。色谱柱是一根长谢谢阅读约20厘米，内径为2厘米，下端具有一个活塞或具有一橡皮管带有弹簧夹的玻璃管，精品文档放心下载谢谢阅读液体样品从柱顶加入，被吸附在柱的上端，然后从分液漏斗加入洗脱溶剂（流动相）精品文档放心下载如丙酮、石油醚等，由于吸附剂对各组分的吸附能力不同，被吸附较弱的组分随溶剂精品文档放心下载精品文档放心下载如各组分为不同颜色的物质，则可以观察到谱带。如为无色物质，则不可直接观察到谢谢阅读谱带，有时有的物质在紫外光照射下发出荧光，有时也可以分段收集一定体积的流出精品文档放心下载液，再用薄层色谱或其他方法检定。三、实验内容柱色谱分离有色物质四、仪器和试剂色谱柱（25分液漏斗（250烧杯，滴管，中性氧化铝和碱性氧化铝（100—200目，干燥失重不大于1%15精品文档放心下载95%乙醇和蒸馏水，样品：亚甲基蓝，荧光黄，1毫升每组，滤纸，玻璃棉或脱脂棉开发区职业技术学院教案纸五、实验步骤1、装柱将已经洗干净并烘干的色谱柱固定在铁架台上，在柱子的底部铺放一点玻璃感谢阅读精品文档放心下载谢谢阅读部约3—4厘米即可。然后在柱顶加入柱径大小的滤纸或加入5毫升的砂层。感谢阅读0.5—1.0厘米高的溶剂以免柱子感谢阅读感谢阅读在本实验中在层析柱底端放一点棉花，加入0.5厘米的石英砂，关闭阀门加精品文档放心下载入10毫升95%5克氧化铝，开塞保持流速为每秒一滴，使氧化铝均匀感谢阅读1厘米石英砂。感谢阅读2、上样将色谱柱中的溶剂从下端放出，直到液面与石英砂表面一致时，停止放出。精品文档放心下载用滴管或玻璃棒引流将样品缓慢的注入柱中。注意不要把氧化铝冲浮起来。待样精品文档放心下载品加完后，放开柱子的活塞使液体流出，直到液面与石英砂表面一致时，停止放感谢阅读出，用0.5毫升乙醇清洗壁上余样；放开柱子的活塞使液体流出，直到液面与石精品文档放心下载英砂表面一致时，停止放出，再用0.5毫升乙醇清洗壁上余样；放开柱子的活塞精品文档放心下载使液体流出，直到液面与石英砂表面一致时，停止放出。3、洗脱分离先用95%的乙醇进行洗脱，流速控制在每秒一滴，待接收亚甲基蓝后，将乙感谢阅读醇界面放至石英砂表面，关闭活塞。在用蒸馏水进行洗脱，流速控制在每秒一滴，待接收荧光黄（注意：在更换精品文档放心下载开发区职业技术学院教案纸六、实验结果测量回收组分的体积，并计算组分的稀释倍数七、思考题1、洗脱液的流速过快或太慢时，对分离效果有什么影响？谢谢阅读2、为什么极性大的组分要用极性大的洗脱剂来洗脱？板书设计：生物化学实验一、实验室规则二、试验报告要求三、考核办法四、考勤办法实验一柱色谱法分离物质原理一、目的要求二、基本原理三、实验内容四、仪器和试剂五、实验步骤1、装柱2、上样3、洗脱分离六、实验结果七、思考题开发区职业技术学院实践课教案首页课题名称氨基酸的纸层析课程类型实验课课时（或单元）4课时实验课类型生物化学实践教材（名称、生物化学实验讲义（自编）作者、出版社）教学场所生物实验室接受实践教学单位性质与特色教学目的学习氨基酸的提取和分离方法重点、难点分析实验原理与操作技法实践分组要求3~4人一组，以个人为单位撰写实验报告精品文档放心下载组长条件与职责管理本组的实验器材和设备，组织组员进行实验感谢阅读层析用滤纸——国产新华1号中速滤纸，层析器，喷雾器。实践课所需仪器80%乙醇；氨基酸显色剂（0.1%茚三酮—谢谢阅读准氨基酸混合液（分别将甘氨酸、丝氨酸、亮氨酸各1设备与条件毫克溶于5毫升80%感谢阅读醇：乙醇：水=4：1：5）实验题目日期实验目的实践报告（总结）基本原理要求实验步骤实验结果与分析思考题学生操作的规范性有待提高小结说明：由于该教案涵盖较广，因此不是各栏必须填写教案纸实验二氨基酸的纸层析一、目的要求色谱法是现代一种新的分析分离技术，除纸色谱法外，还发展有气相色谱法，液谢谢阅读相色谱法，离子交换色谱法，以及薄层色谱法等，已成为现代生物化学研究中的重要精品文档放心下载工具。精品文档放心下载糖类、脂肪酸、维生素等多种物质进行分离鉴定，是生化研究中的重要手段之一。精品文档放心下载二、基本原理纸色谱法是以滤纸为支持剂的一种层析方法。是根据各种溶质在两种不相混溶的谢谢阅读溶剂中的分配系数不同而将不同物质分离开来，它属于分配色谱分离的范畴。精品文档放心下载由于滤纸是由纤维素组成的，具有亲水性，能吸附一层水膜，这层固定在滤纸上感谢阅读的水膜称为固定相，用做推动（或冲洗）样品的试剂称为流动相。感谢阅读将待分离的样品溶于适当的溶剂，点样于滤纸的一端，在层析时借毛细作用使作谢谢阅读为流动相的溶剂，从滤纸一端推向另一端，样品中的各个组分由于分配系数不同，而精品文档放心下载RfRf谢谢阅读值的显色定性，洗脱定量，达到分离的目的。Rf值=某物质移动的距离/溶剂移动的距离物质结构，溶剂的酸碱性，滤纸质量，层析温度等均能对Rf值产生影响。谢谢阅读本实验进行的是上行纸层析法，除此之外，还有下行纸层析法，双向纸层析法，感谢阅读连续纸层析法等，可参阅有关资料介绍。三、材料与设备层析用滤纸——国产新华1号中速滤纸，层析器，毛细管，剪刀，研钵，漏斗，感谢阅读漏斗架，小烧杯，移液管，喷雾器。开发区职业技术学院教案纸80%乙醇；氨基酸显色剂（0.1%茚三酮—感谢阅读甘氨酸、丝氨酸、亮氨酸各1毫克溶于5毫升80%感谢阅读醇：乙醇：水=4：1：5）四、实验步骤1、取材2—4感谢阅读加入10毫升80%乙醇，在沸水浴中提取5分钟，冷却过滤，收集滤液（可反复过滤三感谢阅读80℃水浴上浓缩至约为2毫升左右，放入冰箱中备用。精品文档放心下载2、滤纸准备将层析用滤纸裁成5×15平方厘米的长条（注意：保持滤纸洁净，汗手、唾沫切精品文档放心下载2厘米处用铅笔轻划一条线，线上距左右侧1厘米处各点一点，感谢阅读为点样处。3、点样精品文档放心下载氨基酸溶液，分别点样于点样处，注意使毛细管口与滤纸垂直，轻轻碰触点中心，此感谢阅读时，样品就能自动流出，控制样品滴直径在0.5厘米以内（点样量以各种氨基酸含谢谢阅读5—20谢谢阅读样5—10次。标准氨基酸点样2次。4、展层15毫升注入底部，谢谢阅读盖盖备用。将已点样的滤纸靠近上沿1厘米处打眼穿线后，将此滤纸条悬挂于已准备谢谢阅读好的层析器中，饱和一小时后，迅速将层析纸垂直浸入溶剂中，盖紧盖子，放于恒温感谢阅读处进行层析，待流动相的溶剂已达到滤纸上沿1.5厘米处，开盖，小心取出滤纸，用精品文档放心下载铅笔在溶剂前沿轻划一线，后悬挂于凉处，使溶剂挥发，滤纸干燥，准备显色。感谢阅读开发区职业技术学院教案纸5、显色将0.1%茚三酮—丙酮溶液装在喷雾器中，将滤纸条喷湿后，静置挥发丙酮，待丙精品文档放心下载酮挥发后放在65℃烘箱（或使用吹风机的暖风）内保温显色，滤纸上有氨基酸的地方感谢阅读显现紫红色。五、实验结果根据显色情况计算Rf值，判断提取液中氨基酸数量，并与标准氨基酸比较。谢谢阅读六、思考题试比较不同萌发时期种子氨基酸有何不同？板书设计：实验二氨基酸的纸层析一、目的要求二、基本原理：分配色谱三、材料与设备四、实验步骤1、取材2、滤纸准备3、点样4、展层5、显色五、实验结果六、思考题开发区职业技术学院实践课教案首页斐林试剂比色法测定课题名称课程类型实验课还原糖课时（或单元）4课时实验课类型生物化学实践教材（名称、生物化学实验讲义（自编）作者、出版社）教学场所生物实验室接受实践教学单位性质与特色学习721型分光光度计的使用方法教学目的学习低速离心机的使用方法掌握实验原理和方法重点、难点分析721型分光光度计的使用方法实践分组要求3~4人一组，以个人为单位撰写实验报告精品文档放心下载组长条件与职责管理本组的实验器材和设备，组织组员进行实验感谢阅读1.斐林试剂A液：40gCuSO4.5H2O溶解于蒸馏水定感谢阅读容至1L。实践课所需仪器2.斐林试剂B液：200g酒石酸钾钠谢谢阅读（KNaC4H4O6.5H2O150gNaOH设备与条件谢谢阅读容至1升。A、B两液分别贮存，使用前等体积混合。3.0.1％葡萄糖标准液：取80℃下烘至恒重的葡精品文档放心下载萄糖0.1000g，加蒸馏水溶解，定容至100ml。谢谢阅读实验题目日期实验目的实践报告（总结）基本原理要求实验步骤实验结果与分析思考题实验结果的准确度不够小结说明：由于该教案涵盖较广，因此不是各栏必须填写教案纸实验三斐林试剂比色法测定还原糖一、实验原理植物组织中的可溶性糖可分为还原糖（主要是葡萄糖和果糖）和非还原糖（主要精品文档放心下载是蔗糖）两类。还原糖具有醛基和酮基，在碱性溶液中煮沸，能把斐林试剂中的Cu2+感谢阅读还原成Cu+，使蓝色的斐林试剂脱色，脱色的程度与溶液中含糖量成正比。感谢阅读二、材料、仪器设备及试剂（一）材料：新鲜植物样品或烘干粉碎过的植物样品。（二）仪器设备：1.2.分析天平（感量1／100003.4.具塞刻度试管；感谢阅读5.刻度吸管；6.容量瓶；7.研钵；8.离心机。谢谢阅读（三）试剂：1.斐林试剂A液：40gCuSO4.5H2O溶解于蒸馏水定容至1L。精品文档放心下载2.斐林试剂B液：200g酒石酸钾钠（KNaC4H4O6.5H2O）与150gNaOH溶于蒸馏水精品文档放心下载中，并定容至1升。A、B两液分别贮存，使用前等体积混合。精品文档放心下载3.0.1％葡萄糖标准液：取80℃下烘至恒重的葡萄糖0.1000g，加蒸馏水溶解，精品文档放心下载定容至100ml。4.0.1NNaOH。5.甲基红指示剂：0.1g甲基红溶于250ml60％乙醇中。谢谢阅读6.10％Pb（Ac）2。7.饱和Na2SO4。开发区职业技术学院教案纸三、实验步骤1.标准曲线的绘制：各管混合后加塞，于沸水浴中加热15min。取出后自来水冷却，1500rpm离心15min。感谢阅读取上清液，用分光光度计在590nm波长下比色，以蒸馏水作对照，读取吸光度用空白精品文档放心下载管的吸光度与不同浓度糖的各管的吸光度之差为横坐标，对应的糖含量为纵坐标，绘谢谢阅读制标准曲线。2.样品中还原糖的提取：取新鲜的植物样品洗净、擦干、剪碎，称取10.00g，放入研钵中研磨至糊状，用水感谢阅读洗入250ml容量瓶中。当体积近150ml左右时，加2～3滴甲基红指示剂，如呈红色，谢谢阅读可用0.1mol/L的NaOH中和至微黄色。若用风干样品，可称取干粉3.00g，先在烧杯精品文档放心下载中用少量水湿润，然后用水洗入250ml容量瓶中，如显酸性，可用上法中和。将容量感谢阅读瓶置于80℃的恒温水浴中保温30min，其间摇动数次，以便将还原糖充分提取出来。精品文档放心下载10％Pb(Ac)2感谢阅读淀时，加饱和Na2SO4除去多余的铅离子。30min后取出冷却，定容至刻度，摇匀后过精品文档放心下载滤待测。3.样品测定：吸取6ml待测液，加4ml斐林试剂，其它操作与标准曲线相同，在590nm波长下读精品文档放心下载取吸光度。以不含样品的空白管的吸光度减去样品管的吸光度，在标准曲线上查出糖谢谢阅读含量.四、结果计算按下式计算还原糖的百分含量：×样品总体积×稀释倍数/(测定时取用体积×样品重精品文档放心下载×1000)×100开发区职业技术学院教案纸板书设计实验三斐林试剂比色法测定还原糖一、实验原理植物组织中的可溶性糖可分为还原糖（主要是葡萄糖和果糖）和非还原糖（主要精品文档放心下载是蔗糖）两类。还原糖具有醛基和酮基，在碱性溶液中煮沸，能把斐林试剂中的Cu2+精品文档放心下载还原成Cu+，使蓝色的斐林试剂脱色，脱色的程度与溶液中含糖量成正比。感谢阅读二、材料、仪器设备及试剂1.分光光度计的工作原理2.分光光度计的使用方法3.台式低速离心机的工作原理4.台式低速离心机的使用方法三、实验步骤1.标准曲线的绘制：2.样品中还原糖的提取：3.样品测定：四、结果计算按下式计算还原糖的百分含量：×样品总体积×稀释倍数/(测定时取用体积×样品重谢谢阅读×1000)×100开发区职业技术学院实践课教案首页还原糖的测定课题名称（35二硝基水杨酸课程类型实验课比色法）课时（或单元）4课时实验课类型生物化学实践教材（名称、生物化学实验讲义（自编）作者、出版社）教学场所生物实验室接受实践教学单位性质与特色教学目的掌握3，5二硝基水杨酸比色法测定还原糖感谢阅读重点、难点分析实验原理与操作技法实践分组要求3~4人一组，以个人为单位撰写实验报告谢谢阅读组长条件与职责管理本组的实验器材和设备，组织组员进行实验感谢阅读仪器：分光光度计、恒温水浴、沸水浴、分析天平、具塞刻度试管、刻度吸管、容量瓶、烧杯、研钵、漏斗实践课所需仪器试剂：设备与条件1毫克/毫升葡萄糖标准液3，5二硝基水杨酸溶液实验题目日期实验目的实践报告（总结）基本原理要求实验步骤实验结果与分析思考题对数据的分析能力需要提高小结说明：由于该教案涵盖较广，因此不是各栏必须填写教案纸实验四还原糖的测定（3，5二硝基水杨酸比色法）一、目的要求掌握还原糖测定方法测定的基本原理，学习比色法的基本操作；熟悉721分光光谢谢阅读度计的使用方法。二、基本原理35谢谢阅读35二硝基水杨酸共感谢阅读35二硝基水杨酸被还原成3-氨基-5-谢谢阅读成糖酸及其它产物。在一定范围内还原糖的量与棕红色物质颜色的深浅的程度成一定感谢阅读的比例关系，在540nm下测定棕红色的消光值，查对标准曲线，便可求出样品中还原感谢阅读糖的含量。三、实验内容3，5二硝基水杨酸比色法测定苹果中的还原糖四、仪器和试剂仪分光光度计、恒温水浴、沸水浴、分析天平、具塞刻度试管、刻度吸管、容量精品文档放心下载瓶、烧杯、研钵、漏斗试剂：1)1毫克/80℃烘至恒重的分析纯葡萄糖100精品文档放心下载后定容到100毫升，冰箱中保存待用2)3，5二硝基水杨酸溶液：称取1克3，5二硝基水杨酸溶于20毫升1MnaOH溶液中，加入50毫升蒸馏水，再加谢谢阅读入30100谢谢阅读备用，勿使二氧化碳进入。开发区职业技术学院教案纸五、实验步骤1.标准曲线的制作取15毫升具塞刻度试管7支，编号，分别加入葡萄糖标准液0，0.1，0.3，谢谢阅读0.50.71.0毫升，然后用刻度吸管向各管加蒸馏水，时最后体积为1.0毫升，精品文档放心下载35二硝基水杨酸溶液15分钟，谢谢阅读取出冷却，用蒸馏水稀释至8毫升混匀，用分光光度计在540nm下测定消光值。精品文档放心下载以消光值为纵坐标，以葡萄糖含量为横坐标，绘制标准曲线。谢谢阅读2.样品中还原糖的提取将植物样品（苹果）洗净，吸干其表面水分，切碎混匀，称取1克放入研钵感谢阅读中，加少许石英砂，磨成匀浆，转移到100毫升容量瓶中，加水达70~80毫升，精品文档放心下载摇匀，置于80℃恒温水浴浸提半小时，其间摇动数次，使还原糖浸出。谢谢阅读3.还原糖含量的测定待上述提取液冷却后，定容到100毫升（如果蛋白质含量过多时，需作沉淀精品文档放心下载5100谢谢阅读而定）过滤，取滤液1毫升放入15毫升具塞试管中，加入1毫升3，5二硝基水精品文档放心下载515OD540（作精品文档放心下载两个重复取平均值）六、实验结果从标准曲线上查出样品的OD540值对应的还原糖量A（毫克/精品文档放心下载下式计算样品中还原糖的含量。还原糖的含量=A*样品稀释总体积（毫升）/样品重*1000谢谢阅读开发区职业技术学院教案纸附注：沉淀蛋白质的方法5%硫酸锌50.3N,Ba(OH)2溶液5谢谢阅读Ba(OH)2感谢阅读向容量瓶加水至刻度。方法二：向提取液中滴入10%醋酸铅，至不再产生白色絮状沉淀为止。过多精品文档放心下载的铅离子加饱和硫酸铵除去。七、思考题A)比色测定法的原理及特点是什么？B)比色测定法中为什么要设空白？设空白时要注意什么？谢谢阅读C)试分析一下样品的稀释倍数是如何确定的以及对测定结果的影响？精品文档放心下载板书设计实验四还原糖的测定（3，5二硝基水杨酸比色法）一、基本原理二、实验步骤1.标准曲线的制作2.样品中还原糖的提取3.还原糖含量的测定三、实验结果还原糖的含量=A*样品稀释总体积（毫升）/样品重*1000谢谢阅读四、思考题A)比色测定法的原理及特点是什么？B)比色测定法中为什么要设空白？设空白时要注意什么？感谢阅读C)试分析一下样品的稀释倍数是如何确定的以及对测定结果的影响？精品文档放心下载开发区职业技术学院实践课教案首页蛋白质的两性反应和课题名称课程类型实验课等电点的测定课时（或单元）4课时实验课类型生物化学实践教材（名称、生物化学实验讲义（自编）作者、出版社）教学场所生物实验室接受实践教学单位性质与特色教学目的观察蛋白质的两性反应，掌握等电点的测定方法精品文档放心下载蛋白质的结构和两性反应的关系重点、难点分析梯度缓冲溶液的配置等电点的测定方法实践分组要求3~4人一组，以个人为单位撰写实验报告谢谢阅读组长条件与职责管理本组的实验器材和设备，组织组员进行实验谢谢阅读材料：酪蛋白试剂：0.5%酪蛋白液，0.01%溴甲酚绿指示剂（变色范谢谢阅读实践课所需仪器围是PH3.8~5.40.02NHCl溶液，0.02NNaOH溶谢谢阅读液，1.00N醋酸溶液设备与条件10毫升试管10支，5毫升移液管4支，2毫升精品文档放心下载移液管1支。实验题目日期实验目的实践报告（总结）基本原理要求实验步骤实验结果与分析思考题需要加深对基本理论的理解小结说明：由于该教案涵盖较广，因此不是各栏必须填写教案纸实验五蛋白质的两性反应和等电点的测定一、目的要求掌握蛋白质等电点的测定方法二、基本原理蛋白质由许多氨基酸组成，虽然绝大多数的氨基与羧基结合成肽键，但是总有一谢谢阅读定数量自由的氨基与羧基以及酚基、巯基、胍基、咪唑基等酸碱基团，因此蛋白质和谢谢阅读氨基酸一样具有两性电解质的性质。调节溶液的酸碱度达到一定的离子浓度时，蛋白谢谢阅读质分子所带的正电荷和负电荷相等，以兼性离子状态COO-—R—NH3+存在,在电场内该感谢阅读PH值称为该蛋白质的等点精品文档放心下载点（PIPH值低于蛋白质等电点时，即在H+较多的条件下，蛋白质分子带谢谢阅读正电荷成为阳离子，当溶液的PH大于等电点时，即在OH-较多的条件下，蛋白质分子感谢阅读带负电荷成为阴离子。本实验采用蛋白质在不同PH感谢阅读溶解度最小，最容易沉淀析出。三、实验内容蛋白质等电点的测定四、仪器和试剂材料：酪蛋白试剂：0.5%酪蛋白液，0.01%溴甲酚绿指示剂（变色范围是PH3.8~5.40.02NHCl感谢阅读溶液，0.02NNaOH溶液，1.00N醋酸溶液设备：10毫升试管10支，5毫升移液管4支，2毫升移液管1支。感谢阅读开发区职业技术学院教案纸五、实验步骤一)蛋白质的两性反应1.取10.5%酪蛋白20滴和0.01%PH精品文档放心下载3.8~5.4。在酸性溶液中为黄色，而在碱性溶液中为蓝色）5~7滴，混匀，观察溶液感谢阅读的颜色。2.用滴管缓慢加入0.02NHCl溶液，随加随摇，直到有大量沉淀产生。说明原谢谢阅读因，并观察溶液颜色的变化。3.继续滴入0.02NHCl溶液，观察沉淀和溶液颜色的变化，说明原因。精品文档放心下载4.再滴入0.02NNaOH溶液，观察溶液沉淀和颜色的变化过程，说明原因。谢谢阅读二)酪蛋白等电点的测定1.取9支试管编号后按下表顺序准确加入试剂，加入每种试剂后应混匀。感谢阅读管号123456789蒸馏水（毫升）2.43.2/2.03.03.51.52.753.38感谢阅读1.00NHac（毫升）1.60.8///////感谢阅读0.10NHac（毫升）//4.02.01.00.5///谢谢阅读0.01NHac（毫升）//////2.51.250.62感谢阅读酪蛋白-NaAc（毫升）1.01.01.01.01.01.01.01.01.0谢谢阅读溶液的最终PH3.53.84.14.44.75.05.35.65.9谢谢阅读沉淀出现的情况2.静置约20--++++++++++符号表示精品文档放心下载沉淀的多少。根据观察结果，指出哪个PH是酪蛋白的等电点。精品文档放心下载六、实验结果按照上表的统计结果进行分析开发区职业技术学院教案纸七、思考题1.何为蛋白质的等电点？2.在等电点时蛋白质的溶解度为什么最低？板书设计实验五蛋白质的两性反应和等电点的测定一.基本原理二.仪器和试剂三.实验步骤1)蛋白质的两性反应0.01%溴甲酚绿指示剂（变色范围是PH3.8~5.4。在酸性溶液中为黄色，而在谢谢阅读碱性溶液中为蓝色）2)酪蛋白等电点的测定管号123456789蒸馏水（毫升）2.43.2/2.03.03.51.52.753.38感谢阅读1.00NHac（毫升）1.60.8///////精品文档放心下载0.10NHac（毫升）//4.02.01.00.5///感谢阅读0.01NHac（毫升）//////2.51.250.62谢谢阅读酪蛋白-NaAc（毫升）1.01.01.01.01.01.01.01.01.0谢谢阅读溶液的最终PH3.53.84.14.44.75.05.35.65.9感谢阅读沉淀出现的情况四.实验结果五.思考题1.何为蛋白质的等电点？2.在等电点时蛋白质的溶解度为什么最低？开发区职业技术学院实践课教案首页双缩脲法测定蛋白质课题名称课程类型实验课含量课时（或单元）4课时实验课类型生物化学实践教材（名称、生物化学实验讲义（自编）作者、出版社）教学场所生物实验室接受实践教学单位性质与特色教学目的掌握双缩脲法测定蛋白质含量的技术重点、难点分析原理与操作技法实践分组要求3~4人一组，以个人为单位撰写实验报告谢谢阅读组长条件与职责管理本组的实验器材和设备，组织组员进行实验谢谢阅读材料：大豆、蛋清试剂：实践课所需仪器标准牛血清蛋白，酪蛋白粉末，PH7.2磷酸缓冲液（0.2M设备与条件设备：7215毫升移液感谢阅读管1支，2毫升移液管1支、50毫升容量瓶11感谢阅读个。实验题目日期实验目的实践报告（总结）基本原理要求实验步骤实验结果与分析思考题数据的平行性不好小结说明：由于该教案涵盖较广，因此不是各栏必须填写教案纸实验六双缩脲法测定蛋白质含量一、目的要求学习蛋白质含量测定的原理掌握蛋白质测定的方法二、基本原理蛋白质含有两个以上的肽键，因此有双缩脲反应。在碱性溶液中蛋白质与Cu2+形感谢阅读成紫红色络合物，其颜色的深浅与蛋白质的浓度成正比，而与蛋白质的分子量及氨基谢谢阅读酸的成分无关，因此被广泛应用。在一定的实验条件下，未知样品的溶液与标准蛋白质溶液同时反应，并于精品文档放心下载540~560nm下比色，可以通过标准蛋白质的标准曲线求出未知样品的蛋白质浓度。标精品文档放心下载准蛋白质溶液可以用结晶牛血清蛋白、卵清蛋白或酪蛋白粉末配制。感谢阅读除—CONH—有此反应外，—CONH2、—CH2—NH2、—CS—NH2等基团亦有此反应。精品文档放心下载三、实验内容双缩脲法测定蛋白质含量四、仪器和试剂材料：大豆、蛋清试剂：标准牛血清蛋白，酪蛋白粉末，PH7.2磷酸缓冲液（0.2M感谢阅读开发区职业技术学院教案纸设备：721型分光光度计，5毫升移液管12毫升移液管1精品文档放心下载支、50毫升容量瓶1个、烧杯1个。五、实验步骤1.标准曲线的绘制：取600.40.81.21.62.0感谢阅读补足到2415~2530540nm感谢阅读波长下用721分光光度计比色测定。最后以光密度为纵坐标，酪蛋白的含量为横坐标精品文档放心下载绘制标准曲线。2.样品蛋白质含量的测定：1克吸胀的大豆种子，用PH7.2磷酸缓冲液研磨，浸提302000rpm离心20精品文档放心下载50224毫精品文档放心下载升双缩脲试剂，反应30分钟，进行比色。比色之后在标准曲线上查出蛋白质浓度。感谢阅读六、实验结果计算样品的蛋白质含量七、思考题对于作为标准的蛋白质应有何要求？开发区职业技术学院教案纸板书设计实验六双缩脲法测定蛋白质含量一、目的要求二、基本原理蛋白质含有两个以上的肽键，因此有双缩脲反应。在碱性溶液中蛋白质与Cu2+形成紫谢谢阅读红色络合物，其颜色的深浅与蛋白质的浓度成正比，而与蛋白质的分子量及氨基酸的感谢阅读成分无关，因此被广泛应用。三、实验内容四、仪器和试剂五、实验步骤1、标准曲线的绘制：取600.40.81.21.62.0感谢阅读补足到2415~2530540nm感谢阅读波长下用721分光光度计比色测定。最后以光密度为纵坐标，酪蛋白的含量为横坐标感谢阅读绘制标准曲线。2、样品蛋白质含量的测定：1PH7.230分钟，2000rpm离心20分钟，谢谢阅读上清液用磷酸缓冲液定容至50224毫升双缩谢谢阅读脲试剂，反应30分钟，进行比色。比色之后在标准曲线上查出蛋白质浓度。谢谢阅读开发区职业技术学院实践课教案首页POD课题名称课程类型实验课性的测定课时（或单元）4课时实验课类型生物化学实践教材（名称、生物化学实验讲义（自编）作者、出版社）教学场所生物实验室接受实践教学单位性质与特色教学目的学习和掌握酶活的测定方法重点、难点分析实验原理与操作技法实践分组要求3~4人一组，以个人为单位撰写实验报告感谢阅读组长条件与职责管理本组的实验器材和设备，组织组员进行实验感谢阅读容量瓶（25251毫实践课所需仪器721型分光光度计，分析天平，秒表0.2M磷酸缓冲液（PH6.0）：将0.2MNaH2PO4溶设备与条件液87.7毫升于0.2MNa2HPO4溶液12.3毫升混合，蒸馏水稀释至200毫升。反应混合液：0.2M磷酸缓冲液（PH6.0）100毫升，谢谢阅读加入愈伤木酚0.01930%过氧化氢精品文档放心下载0.02毫升，摇匀。实验题目日期实验目的实践报告（总结）基本原理要求实验步骤实验结果与分析思考题需要进一步培养严谨的科学态度小结说明：由于该教案涵盖较广，因此不是各栏必须填写教案纸实验七过氧化物酶（POD）活性的测定二、目的要求掌握酶活性的测定方法和原理三、基本原理过氧化物酶是一种含铁卟啉的氧化酶，是利用H2O2将代谢中的一些化合物氧化，感谢阅读其活性与呼吸作用和其一些生理过程有关。测定过氧化物酶的活性变化是生理和病理感谢阅读上一个重要指标。过氧化物酶能催化过氧化氢对某些物质的氧化，如催化过氧化氢氧化愈伤木酚作谢谢阅读为被氧化的基质，呈现的棕色可在OD470检测。四、实验内容植物过氧化物酶活性的测定五、仪器和试剂容量瓶（25251感谢阅读721型分光光度计，分析天平，秒表0.2M磷酸缓冲液（PH6.0）：将0.2MNaH2PO4溶液87.7毫升于0.2MNa2HPO4感谢阅读溶液12.3毫升混合，蒸馏水稀释至200毫升。0.2M磷酸缓冲液（PH6.0）100毫升，加入愈伤木酚0.019毫升，开精品文档放心下载始实验前加入30%过氧化氢0.02毫升，摇匀。六、实验步骤称取马铃薯外皮10.2M磷酸缓感谢阅读冲液（PH6.0）磨成匀浆，加入20毫升缓冲液浸提15分钟后4层纱布过滤放入50毫精品文档放心下载升容量瓶中，用缓冲液定容，摇匀，放置澄清后取上清液测活性。感谢阅读开发区职业技术学院教案纸1.在光径为1厘米的比色杯中加反应液3毫升，再迅速加入1毫升酶液，立谢谢阅读即用聚乙烯薄膜蒙住比色杯上口，用拇指压紧，中指持比色杯底，反复摇动比色谢谢阅读杯，使反应系统迅速混匀。2.注意：当一开始注入酶液时就同时启动秒表计时，以1毫升酶液加3毫升感谢阅读不含过氧化氢的反应混合液作空白对照，选用470nm波长，每30秒记光密度值，精品文档放心下载共计约10分钟。3.以时间为横坐标，光密度值为纵坐标，绘制酶促反应的进程曲线，并根据谢谢阅读反应初速度计算酶的相对活性（以OD470/g/min精品文档放心下载4.OD值为活性单位即可，如要精确计算氧化愈谢谢阅读伤木酚的数量，需作一标准曲线以计算其氧化量。七、实验结果1.记录和计算过氧化物酶活性记录表时间（秒）光密度值（OD）植物材料：用量：2.绘制酶促反应的进程曲线，计算酶的相对活性。八、思考题1）比较过氧化物酶和和过氧化氢酶在反应中的主要区别？感谢阅读2）精品文档放心下载液中不加过氧化氢作空白对照？开发区职业技术学院教案纸板书设计实验七过氧化物酶（POD）活性的测定一.基本原理二.实验内容三.仪器和试剂四.实验步骤1)称取马铃薯外皮10.2M精品文档放心下载PH6.020毫升缓冲液浸提15分钟后4层纱布谢谢阅读过滤放入50精品文档放心下载性。2)在光径为1厘米的比色杯中加反应液3毫升，再迅速加入1毫升酶液，立即谢谢阅读用聚乙烯薄膜蒙住比色杯上口，用拇指压紧，中指持比色杯底，反复摇动比感谢阅读色杯，使反应系统迅速混匀。3)注意：当一开始注入酶液时就同时启动秒表计时，以1毫升酶液加3毫升不感谢阅读470nm30秒记光密度值，精品文档放心下载共计约10分钟。4)以时间为横坐标，光密度值为纵坐标，绘制酶促反应的进程曲线，并根据反精品文档放心下载应初速度计算酶的相对活性（以OD470/g/min谢谢阅读5)OD值为活性单位即可，如要精确计算氧化愈伤精品文档放心下载木酚的数量，需作一标准曲线以计算其氧化量。五.实验结果绘制酶促反应的进程曲线，计算酶的相对活性。开发区职业技术学院实践课教案首页蛋白质的沉淀反应与课题名称课程类型实验课透析课时（或单元）4课时实验课类型生物化学实践教材（名称、生物化学实验讲义（自编）作者、出版社）教学场所生物实验室接受实践教学单位性质与特色教学目的掌握蛋白质沉淀，盐析，盐溶，透析等操作技术谢谢阅读重点、难点分析实验原理与操作技法实践分组要求3~4人一组，以个人为单位撰写实验报告谢谢阅读组长条件与职责管理本组的实验器材和设备，组织组员进行实验谢谢阅读0.10mol/L醋酸溶液、蛋白质溶液、pH4.7醋酸—醋酸感谢阅读实践课所需仪器3%95%0.1mol/L0.1mol/L氢设备与条件氧化钠溶液、0.05mol/L钡溶液，半透膜实验题目日期实验目的实践报告（总结）基本原理要求实验步骤实验结果与分析思考题需要理解过程理论小结说明：由于该教案涵盖较广，因此不是各栏必须填写教案纸实验八蛋白质的沉淀反应一、目的掌握蛋白质及氨基酸的特性，加深理解课堂内容。二、原理在水溶液中的蛋白质分子由于表面生成水化层和双电层而成为稳定的亲水胶体颗谢谢阅读粒，在一定的理化因素影响