发酵饲料生产工艺与应用讲义

{生产管理培训}发酵饲料生产工艺与应用讲义发酵饲料生产工艺与应用灵璧县立腾同创农牧科技有限责任公司二0一二年十一月目录安徽省立腾同创农牧科技有限公司简介安徽省立腾同创农牧科技有限公司企业文化安徽省立腾同创农牧科技有限公司的十年发展战略—————安徽省立腾同创农牧科技有限公司的第一个发展五年发展计划第一章发酵饲料生产的菌种及发酵工艺第二章发酵饲料生产技术第一章发酵饲料生产的菌种及发酵工艺第一节概述一、发酵饲料的定义料原料。采用发酵技术生产的动物饲料或饲料原料，其特性主要是：（1）含有大量的活性微生物；（2）多数以厌氧发酵方式进行生产；（3）未经干燥的物料含水量通常在30%以上；（4）物料的酸性物质明显增加，营养组成更合理；（5）生产原料以植物性农副产品为主。酵饲料。二、发酵饲料的概述厌氧发酵。发酵物料的含水量为30%~50%，发酵时间和温度受环境影响很大，基本不进行人为控制和调节。物，能降低饲料生产成本，但基本不具备生物学活性和功能。本节主要论述厌氧固态发酵工艺，常规的发酵饲料生产流程如：原料→消毒→冷却接种→培养→干燥→包装的大剂量使用。合饲料中添加5.0%以上）使用高活菌含量的微生物发酵饲料可生产成本通常都在10元/kg10%的比例使用在配合800致生产设备投资增加的主要原因。如能简化生产操作工艺步骤，用具备强大的市场竞争力。第二节发酵饲料的生产菌种和霉菌。一、乳酸菌目前生产中使用的乳酸菌至少有30性乳酸发酵和双歧杆菌异型乳酸发酵。（一）同型乳酸发酵C6H12O6——→2CH3CH(OH)COOH酸乳球菌。（二）专性异型乳酸发酵C6H12O6——→CH3CH(OH)COOH+CH3COOH+CO2↑低得多，而且还有产气损失。典型的生产菌种主要有:发酵乳杆菌、高加索酸奶杆菌、短乳杆菌、巴氏乳杆菌。（三）兼性乳酸发酵两种代谢进行的程度和比例取决于菌种的性质和外界培养条件。酒乳杆菌。（四）双歧杆菌异型乳酸发酵2C6H12O6——→2CH3CH(OH)COOH+3CH3COOH度慢一些，而乳酸的生成速度却快一些。醇和CO2。二、芽孢菌用芽孢杆菌发酵饲料的目的主要是为了消耗培养体系中残留的氧气，为乳酸菌创造一个厌氧环境。另外，近年来研究还发现，有些芽孢杆菌能产生杀灭大肠杆菌和沙门氏菌等有害微生物的类型的微生物细胞有破坏作用，对酵母菌和乳酸菌没有影响。三、酵母菌度为25~35pH4.0~6.0（EMP20多种，主要为以下三种：酿快，在适宜的温度和营养条件下，它们的世代倍增时间不超过3h，特别适合处理食品加工业产生的废水。2~6μm乳酸菌的1000倍左右。工业生产中常用的酵母菌主要有酿酒酵理。四、霉菌目前在生产中应用的霉菌有近十种，主要为：米曲霉、黑曲霉、5cm。点上说，霉菌发酵不适于生产饲料或者饲料原料。维素酶和蛋白酶的特性，利用廉价的粗蛋白原料作为发酵底物，生产高活性的蛋白饲料或者粗酶制剂。五、选用生产菌种的基本原则（一）安全性（必须同时符合以下两个要求）（1）菌体本身不产生有毒有害物质。（2）不会危害环境固有的生态平衡（主要针对某些基因工程（二）有效性（能满足一个要求即可）（1）菌种本身具有很好的生长代谢活力，能有效降解大分子好抗营养因子，合成小肽和有机酸等小分子物质。（2）能保护和加强动物微生物区系的正平衡。这种功效主要是指能有效维护和提高有益微生物在动物消化道料的生产菌种本身就是从饲养的目标动物的消化道中分离出来现第二种途径的方式可以多种多样，比较常用的有：耗尽氧气，降低体系的氧化还原电位；降低环境的pH值；代谢物中含有能选择性杀灭大肠杆菌和沙门氏菌等有害微生物的抗菌物质等。第三节发酵饲料生产菌种之间的相互关系目前人类可利用的这些发酵技术基本上都是纯培养技术，而实际上在自然界中很难找出单一微生物存在的生态环境。据已有的微生物研究报道，地球上存在的微生物超过100万10研究的不超过1万种。根据目前已有的研究成果，大体可以把微生物之间的关系分为以下几种：中性共生、同住、互惠共生、共生、竞争、拮抗和寄生。一、中性共生这是指两种或两种以上的微生物同时存在于同一个环境中，但是它们之间没有直接的生态关系，各自生活互不干扰。例如淡水中生长的衣藻和水生细菌。二、同住浓度的糖液（25%左右）中生长。当糖被酵母菌消耗以后，糖浓另外一些只能利用还原性单糖的微生物生长提供营养。发酵饲料的重要理论基础。三、互惠共生这是两种微生物互惠互利的现象，比较典型的菌种是阿拉伯考虑这种组合优势。四、共生一个形态和生理单位。蓝藻或蓝细菌的细胞仅限于特定的层内，料的生产过程中很难遇到，少有实用的例子。五、竞争争往往表现的很激烈。件一旦改变，就可能被另一种微生物代替并发育成新的优势种。往往比较低，至少比同类的野生菌低。野生菌的代谢活动是很“经济的。如果从生长速度分析，它们的物质和能量的利用效免。如何巧妙利用微生物之间的生存竞争是研究微生物发酵饲料生用微生物有益菌群种群优势发酵饲料的目的，但是到目前为止，有关方面的成熟技术还是很少。六、拮抗一种微生物可以产生不利于另一种微生物生存的代谢物质，生物的生长，这种现象就称为“拮抗。如：青贮饲料接种的乳酸菌和醋酸菌在发酵过程中，不断降低pH值，结果绝大多数不生存。获得的枯草芽孢杆菌MA139希望的。七、寄生究中还没有遇到。核心。第四节发酵饲料的生产工艺一、固态厌氧发酵高活性生物饲料只要密封得当，即使长期存放也不会腐败变质。目前比较典型的固态厌氧发酵生物饲料的成功例子主要有致，主要有酵母菌、乳酸菌和芽孢杆菌。30%~40%。下进行糖酵解，产生酒精和CO2，乳酸菌也同时增殖、代谢，产生有机酸。随着袋内气压的不断增加，不断有CO2带着酒精和有物料发酵的成熟度。有氧发酵阶段：C6H12O6+6O2——→6CO2+6H2O无氧发酵阶段：C6H12O6——→2CO2+2C2H5OH(乙醇)3~5d如果环境温度低于12CO2O2长时间与接种的乳酸菌接触，会导致乳酸菌活力大减，甚至死亡。菌的含量能达到108cuf/g以上。将其在生羊配合饲料中添加15%~20%10%制的因素很多，质量标准也很难把握，实际推广有一定困难。个月以上；产品在储存和运输过程中不受外界空气干扰。农业部饲料工业中心的微生物发酵饲料课题组发明了呼吸膜可移动式固态厌氧发酵饲料（也称袋装发酵饲料）生产技术。这种发酵技术的具体工艺流程如图1-1。压的硅胶膜。在发酵过程中，微生物会产生CO2等气体，使得袋从而也就排除了外界杂菌的干扰。原料不需要消毒就可以直接用于接种培养。这种工艺很简单，如果以日产30t计算，设备投资不超过40万元，特别适合在我国广大农村推广使用。第三章发酵饲料生产技术第一节发酵饲料用乳酸菌的分离筛选乳酸菌是一类最常见的益生菌，生物饲料的发酵生产一般都少有20多种。大量实验证明，只有动物消化道国有的微生物才菌是动物消化道内起主要作用的微生物。一、样品的采集本。E.ColiK88,这是一种常见的5~7d生羊进行屠宰，在无菌环境中提取它的胃液、小肠液和大肠液，迅速保存在无菌生理盐水（NaCl的浓度为0.9%）中。适量的半胱氨酸，半胱氨酸有巯基（—SH可以消除溶液中残余的氧。二、乳酸菌的分离纯化对样品进行选择性增殖培养，以增加目标乳酸菌的含量。抗生素牛奶中补充6%~8%的蔗糖，高温消毒、冷却，然后用氮气或者二氧化碳驱除溶液中残留的空气，再接入适量采集的样品，在30~32℃条件下厌氧培养10~24h量比较低，可以适当延长培养时间。下一步分离纯化操作。乳酸菌分离培养基通常采用MRS琼脂培养基，其营养组成与pH如下：蛋白胨：5.0g/L；牛肉浸膏：4.0g/L；酵母膏：2.0g/L；葡萄糖：12.0g/L；玉米浆：10.0mL;司盘80：1ml;磷酸氢二钾：1.0g/L；三水乙酸钠：3.0g/L；柠檬酸三铵：1.0g/L；硫酸镁：0.1g/L；硫酸锰：0.03g/L；琼脂：18.0g/L。pH6.2±0.2。加热溶解上述各组分，配制成均匀的溶液，分装在厌氧滚管中（每个管中加5~6mL115℃消毒杀菌30min50℃左右后，在冰水中滚动滚管，使固体培养基均匀凝固在管壁上。0.02%MRS分离培养基中加入适量的半胱氨酸可以在一定时间内维持环境的低电位。了。30~32℃条件下培养1~2d。两天以后不出现理想的菌落，可以再延长培养时间。虽然乳酸菌的最适宜生长温度是37~40℃，但是在分离筛选过程差异可以更明晰，也更有利于挑选理想的菌种。经过上述分离操作，我们获得了5株乳酸菌，它们分别是：1.来源于羊胃的格氏乳杆菌（Lactobacillusgasseri）;2.来源于十二指肠的罗伊氏乳杆菌（Lactobacillusreuteri）;3.来源于小肠的屎肠球菌（Enterococcusfaecium）;4.来源于空肠的嗜酸乳杆菌（Lactobacillusacidophilus）;5.来源于结肠的发酵乳杆菌（Lactobacillusfermentium三、发酵力和耐酸稳定性分析菌的产量，具体方法如下：接种分离获得的细菌纯种于试管培养液中，30~32℃恒温培养12h，然后再扩大接种到牛奶瓶中，30~32℃恒温培养6h，测定乳酸含量。基联苯作用生成在565nm565nm以通过测定565nm处的吸光度来测定乳酸的含量。实验室乳酸含量的测定一、原理565nm乳酸含量。二、试剂1.4.0%硫酸铜溶液将4g无水硫酸铜溶解在水溶液中，定容至100ml。2.羟基联苯（C6H5·C6H4OH）溶液将1g羟基联苯溶解于100ml浓度为0.08mol/L的NaOH溶液中，储存在褐色试剂瓶中。3.乳酸标准液将280mg纯乳酸锂溶于水中，配成250mL溶液，其乳酸浓度为1mg/mL，存放于4℃冰箱中。在做标准曲线时将溶液稀释10倍，使乳酸含量为100μg/mL123456mL稀释液，稀释配制成1，2，3，4，5，6μg/mL乳酸标准液。4.浓硫酸溶液在比色管中分别加入1mL乳酸标准液和0.05mL硫酸铜溶液，然后加入6mL浓硫酸，放置5min，冷却至20℃以下。三、标准曲线的制备和乳酸含量的测定在上述比色管中加入0.05mL羟基联苯溶液，混合均匀，在室温下放置6~8h565nm线。（1）最大吸收波长的确定乳酸发酵液样品显色后，表明，最大吸收波长为565nm。图2-1最大吸收波长的确定（2）最佳显色条件的选择A2B3C2D1E1F3钙0.05g20%硫酸铜0.8ml6ml0.125ml，静置时间15min，加热显色时间5min。（3）乳酸标准曲线的制备乳酸标准应用液浓度在10~80μg/ml范围内与吸光度值基本呈60μg/ml时吸光度值大于1仪器误差的因素，故制备标准曲线时浓度范围取在15、20、25、3035404550μg/ml，得到如图的乳酸标准曲线，求得标准曲线回归方程为A=0.0189C－0.0808(A为吸光度值，C为乳酸浓度，n=8)r=0.998915~50μg/ml范围内呈良好线性关系。（图2-2：乳酸标准应用液浓度与吸光度值之间的关系）（图2-3：乳酸标准曲线）耐酸稳定性分析主要是考虑乳酸菌在实际使用过程中过动物胃酸的成活问题。生长育肥羊的胃酸pH比较低，一般的微生物1.0mL活菌数量已知的培养液，在无菌条件下，接种到生长羊、牛的胃液中，在37℃恒温培养。同时做6个平行，每隔1h取样1次，分析乳酸菌数量的变化。5率都在50%以上（见表2-4）表3-4各种乳酸细菌在生长羊胃液中的稳定性时间/h123456格氏乳杆菌存活率/%88.282.691.495.8112136罗伊氏乳杆菌存活率/%88.481.371.466.957.246.8屎肠球菌存活率/%86.562.176.371.264.855.6嗜酸乳杆菌存活率/%91.288.684.276.871.364.2发酵乳杆菌存活率/%94.692.891.488.586.384.6变异，安全无毒。可以大量应用在牛、羊等饲料中。pH保护的功能。第二节发酵饲料用芽孢杆菌的分离筛选和安全性评价芽孢杆菌也是一类比较常见的发酵饲料生产菌，但是这类菌的应用效果与菌种来源、饲养环境和动物类型都有很大的关系。虽然种类很多，但是真正能体现出稳定的、优良效果的还很少。乳酸菌和酵母菌的安全稳定性一般都很可靠（一些耗氧发酵主管部门关注的重点。芽孢杆菌一般都不是动物消化道内固有菌，它们发挥作用的原因至今还没有统一的定论。但是目前人们对两点原因是比较认可的：产生能杀灭大肠杆菌和沙门氏菌等有害微生物的酸菌的生长繁殖创造厌氧环境。芽孢杆菌的分离筛选主要也是依据上述两个原则。安全性评价主要依据抗生素敏感性以及致毒性，相关的技术都比较成熟。一、样品的采集和初筛与乳酸菌的分离筛选一样，目标芽孢杆菌也是从发生了瘟疫的动物养殖场或者进行攻毒试验幸存的动物体中筛选。1.样品的采集与初筛在发生了大批死亡的养殖场里，我们从土壤和粪便中采集样品，共需采集24个样品，每个样品约2g，在无菌条件下分别保存在20mL12h内进行后续的培养分离，具体方法如下：（1）取0.5ml样品液，加入到5ml的复合营养肉汤（MNB）中。MNB培养基组成与pH：葡萄糖：5.0g/L;蛋白胨：5.0g/L；牛肉膏：3.0g/L;酵母浸粉：1.0g/L;MgSO4·H2O:0.005g/L。pH:7.0±0.2120℃消毒30min冷却到常温，备用。（2）从24种样品中分离得到芽孢杆菌菌株约120株，这些芽孢杆菌均具有革兰氏阳性、过氧化物酶阳性、产生好氧芽6株对E.coliK88具有强烈的抑制作用，它们都基本具备了芽孢杆菌的特性，将此6株菌株编号为：MA23MA139MA257MA59MA633和MA7446株作为后续复筛的备选菌种。二、菌种的复筛在芽孢杆菌的复筛过程中，设计了待筛菌与4种指示菌同步于候选菌株的富集生长；②采用指示菌混合培养，给候选的芽孢杆菌营造一个竞争的环境，有利于产生高抗菌活性的芽孢杆菌，并能在有限的环境中为争夺营养条件，拮抗其他细菌而存活下来。同时在不同的试管中分别接种43.5约为106cfu/mL。表2-54种指示菌及其来源指示菌学名来源金黄色葡萄球StaphylococcusIVDCC56005中国兽医微生物菌种保藏中菌SalmonellatyphimuriumIVDCC79-13心鼠伤寒沙门氏EsherichiacoliIVDCC83901中国兽医微生物菌种保藏中菌EsherichiacoliIVDCC83529心大肠杆菌K88中国兽医微生物菌种保藏中大肠杆菌K99心中国兽医微生物菌种保藏中心在上述4个指示菌中，大肠杆菌K88的抵抗力最强，金黄色葡萄球菌抵抗力最弱。制备指示菌悬液时，用接种针从斜面上挑取少量的指示菌，分别接种到营养肉汤培养基（MNB）中，37℃培养18~24h，保证菌悬液的浓度为108cfu/mL左右。37℃混合震荡培养48h70℃的水浴中保温30min，杀死营养细胞。存活的芽孢经过10倍稀释，取一定的稀释液涂布于MNA固体培养基（在MNB培养液中加入1.8%左右的琼脂）平皿表面，使之形成单菌落。接种到试管斜面中，编号后保存在4℃冰箱中。然后在采用平板扩散的方法，将分离出来的芽孢杆菌用灭菌牙签蘸取少许分别点种到倒好的MNA平板中（平板在使用前置于37℃下培养24h，除去部分水份以便于抗菌物质在培养37℃培养24h的培养皿盖上并熏蒸约40min，以便杀死活细胞并能让菌落固定于平板的表面，然后移去培养皿盖并让平板里残余的氯仿挥发30min指示菌培养液，均匀布满后倾倒出剩余的菌液，晾干平板，置平板于37℃培养16~18h的大小和清晰程度，来判断受试菌对指示菌的抗菌能力。这6种芽孢杆菌当中，MA139对4株指示菌表现出最强的抗菌能力（见表2-6、图2-7表2-6初分离出6株芽孢杆菌对4株指示菌的抑菌圈直径菌株抑菌圈直径/mmE.coliK88E.coliK99S.typhimuriumMA2329.8±0.635.6±0.746.8±0.540.6±0.8MA13932.0±1.035.9±0.747.5±0.542.5±0.7MA35728.2±0.435.0±0.645.4±0.840.8±0.7MA55931.3±0.933.6±0.844.4±1.138.3±0.9MA63429.6±0.731.5±1.245.6±0.638.6±1.0MA74431.0±1.033.6±0.645.7±0.838.4±1.1注：表中值为平均值±标准差。图2-7MA139对指示菌的抑制作用（A、B、C、D分别代表对大肠杆菌K88、K99的抑制作用）三、芽孢杆菌的抗逆性试验与乳酸细菌的耐受性试验一样，芽孢杆菌也需要进行类似的检胰液素对它的毒害作用。分别提取生长羊（体重40~60kg）的胃食糜和小肠食糜，分别是用4生羊胃液中含有的食糜量对胃酸的pH一些（通常取10份）混合以后在用纱布挤压过滤。经过筛选出来细菌MA139MNB培养基中，37℃下225r/min震荡培养36h，将培养液置于80℃水浴保温15min，离心收集芽孢（相对离心力为2500×g，5minPBS:0.144%Na2HPO4,0.024%KH2PO4,pH7.0溶在PBS缓冲液中，即为菌悬液，用于后续的抗逆耐受性试验。3h24h内不生长，而24h后开始生长，培养液变得浑浊。在试验的第5天，MA139在小MA139的芽孢可以在羊小肠中存活并通过营养体增殖。四、芽孢杆菌的鉴定通过上述的分离筛选，我们获得了比较有价值的杆菌MA139，但必须做严格的鉴定。1.形态学鉴定兰氏染色及芽孢染色。MA139的细胞呈直杆状，芽孢椭圆形近中生，孢囊不膨大。在MNA培养基上培养12h，产生黏液，细胞形24h培养至36h，菌体均以休眠体芽孢的形式存在，菌落呈白色[图2-8（1）]。在液体静止培养时有菌膜形成。图2-82.生理生化鉴定形态鉴定结果（图2-8）符合芽孢杆菌的特性，接着进行生理生化鉴定。生理生化鉴定比较复杂，涉及的操作步骤很多。参照发酵试验、需氧性测定、V-P试验、淀粉水解试验、明胶水解试验、过氧化氢酶试验、柠檬酸盐利用试验、石蕊牛奶试验等。芽孢杆菌鉴定用培养基如下：（1）糖醇发酵培养基及葡萄糖产气试验培养基组成：（NH4）2HPO41.0g/L;MgSo4·7H200.2g/L；酵母浸膏0.2g/L。配好后加入2%的溴百里香兰指示剂1mL/LpH为7.2加入1%将杜兰管口朝下放入试管，115℃灭菌30min。（2）运动型培养基琼脂：3g/L;牛肉膏：3.0g/L;氯化钠：5.0/g；蛋白胨：10g/L。pH7.0~7.2。121℃灭菌15min。（3V-P试验培养基蛋白胨：5.0g/L；K2HPO4:5.0g/L;葡萄糖：5.0g/L。pH7.0±0.2。2mL/支分装试管，121℃灭菌15min。（42%5%7%10%的NaCl,pH7.0~7.2。121℃灭菌15min。（5）石蕊牛奶试验培养基石蕊乙醇溶液25mL，脱脂牛奶1000mL，4mL/支分装试管，115℃灭菌15min。（6）柠檬酸盐试验培养基NaCl:5.0g/L；MgSO4·7H20:0.2g/L；（NH4H2PO41.0g/LK2HPO41.0g/L5.0g/L溴百里草酚兰（浓度为4%pH6.8±0.2。分装试管，121℃灭菌15min。（7）明胶水解培养基蛋白胨：0.5%；明胶：10%~15%。pH7.0~7.2。分装试管，115℃灭菌20min。（820g/LKNO31.0g/L；NaCl:0.5g/L；K2HPO4：0.5g/L；MgSO4·7H2O:0.1g/L；琼脂：2.0g/L。pH7.0~7.2。121℃灭菌15min。（9充氮除氧，121℃灭菌15min。生理生化试验结果见表2-9。表2-9试验菌的生理生化试验结果项目MA139项目MA139葡萄糖发酵+葡萄糖产气-麦芽糖发酵+运动性+棉籽糖发酵+厌氧生长-乳糖发酵+淀粉水解试验+甘露醇发酵+H2O2酶试验+2%NaCl+柠檬酸盐试验+5%NaCl+石蕊牛奶还原+7%NaCl+V-P试验+10%NaCl-明胶液化试验+“+”为反应阳性；“-”为反应阴性。MA139是芽孢杆菌。3.基因鉴定：16SrRNA分析列分析。16SrRNA分析是目前比较常用的分析手段。采用基因组DNA提纯试剂盒提取MAA139基因组DNA菌16SrRNA基因特性引物进行PCR测定16SrRNA究所实验室都能进行。其结果证实MA139是枯草芽孢杆菌。五、芽孢杆菌的安全性评价确证了芽孢杆菌的特性，接下来需要考虑其安全性问题。杆菌MA139为例，简要说明进行芽孢杆菌安全性评价的方法。安全性试验的靶动物一般都选用老鼠，具体可参考如下方法：选择12只体重基本一致的SD大鼠（Sprague-Dawley,SD,初始体重在200~220g比较适合，雌雄各半，分为两个实验组，一组用5mL芽孢菌悬液（108cfu/mL）注射到大鼠腹腔中；另一组用5mL6h时间为1周。灌服MA139的芽孢后，所有大鼠均无明显临床症状，无一死亡，试验组和对照组间，没有明显差异，证明MA139安全无毒。六、抗生素敏感性试验在实际生产中，绝大多数的动物饲料都添加了抗生素，动进细菌间耐药性基因的传递和转移。所以在选择菌种的时候，生素的敏感性进行检验。研究结果显示（表2-10，图2-11MA139对试验的十种细菌具有一定的同源性。图2-11MA139对抗生素的敏感性表2-10MA139对抗生素的敏感性抗生素名称浓度抑菌圈直径/mm结果判定大观霉素[Spectinomycin(SPT)]100μg/片26.5+杆菌肽[Bacitracin(B)]0.04IU/片0.0-卡那霉素[Kanamycin(K)]30μg/片24.1+多黏菌素B[PolymyxinB(PB)]300μg/片12.8+呋喃唑酮[Furazolidone(FR)]300μg/片21.3+红霉素[Erythromycin(E)]15μg/片24.0+氯霉素[Chloramphenicol(C)]30μg/片28.7+四环素[Tetracycline(TE)]30μg/片17.7+万古霉素[Vanycin(VA)]30μg/片19.2+利福平[Rifampin(RA)]5μg/片27.8+注：“+”为敏感；“-”为不敏感。导致很严重的后果。第三节发酵饲料生产菌种的制备和保存在获得了饲料生产菌种以后，需要对生产菌种进行扩大培养部分购买，部分自己制备。和干燥保存进行论述。一、乳酸菌的培养乳酸菌是最常用的有益菌，一般都是厌氧菌，很难制成干粉，最好现培养现用。污染的牛奶中加入6.0%~8.0%37℃左右，在无菌条件下接种、厌氧培养，就可以获得比较理想的培养物。以下是在实际生产中采用的乳酸菌扩大培养方法。选取无抗生素污染的纯牛奶10L，加入600~800g白砂糖（也60~70在500mL三角瓶中，用棉花塞塞紧，外包牛皮纸。在110℃左右消毒灭菌10min37提高糖酸转化效率，而且乳酸菌培养过程容易控制气压。在36~40℃恒温培养20~24h，就可以用于后续的发酵饲料扩大接种，乳酸菌培养液与发酵饲料的接种比例为0.2%左右。需要强调的是一定要用无抗生素污染的牛奶。乳酸菌一般对抗生素很敏感，溶液中只要有5mg/kg的抗生素就会对乳酸的生量为8.0%加水调浆（加水量是奶粉分量的8营养浓度。二、乳酸菌培养液的脱水干燥传统的微生物培养液的干燥都是设法先除去培养液中的自由水量一般都超过90%，干物质的含量不超过10%，除水通常需要力损失也越大。90%以上。即使采用瞬时喷雾干燥，活力损失也要超过85%。脱水后的2024h40%以上，给实际推广造成很大困难。近年来，世界各地的畜牧科研工作者在活性乳酸菌的干燥保14%左100℃气流干燥以后，可以比较简单地把水份降低到6%10酸绝培养液混合，使混合物的水份含量为11%~20%，从而使乳酸乳酸菌，在室温条件下保存3个月，乳酸菌的活力可以保存50%以上，保存6个月时，乳酸菌的活力保存在40%左右。此方法简率较高。（一）活性乳酸菌脱水干燥流程干燥载体混合抽真空密封包装乳酸菌培养（二）流程说明1.载体的干燥载体为麦粉、玉米粉或者其他农副产品。粉碎后过20目筛。对仓内，抽气冷却至40℃。如果缓冲仓的物料不超过1t，冷却时间一般不超过2h，干燥后麦粉的含水量只增加0.3%潮，包装袋的容量为10-50kg比较合适。2.乳酸菌扩大培养酵乳杆菌和植物乳杆菌等常用的发酵饲料生产用乳酸菌。0.5%35℃条件下厌氧培养10~14h2.0~4.0×1011cfu/g7.0%为93.0%0.5mg/kg到乳酸菌培养基。将培养基在95~105℃条件下消毒10~15min，冷却至40℃以下。3.干燥载体与乳酸菌菌液混合封。4.菌剂的保存期及活菌损失情况1,3,6个月时，分别菌剂中活菌损失情况。我们进行了6次实际生产试验，结果如表2-11至2-17。表2-11嗜热链球菌制剂保存试验（25℃，真空保存，含水量11.27%）保存时间/d103090180存活率/%91.481.254.231.8表2-122512.88%）保存时间/d103090180存活率/%88.379.262.146.8表2-132514.43%）保存时间/d103090180存活率/%81.664.455.231.5表2-142515.92%）保存时间/d103090180存活率/%67.542.337.632表2-1525