革兰阴性球菌课件

第九章革兰阴性球菌奈瑟菌属（Neisseria）奈瑟氏菌属是一群革兰阴性球菌，常成双排列，无鞭毛，无芽胞，有菌毛。人类为奈瑟氏菌属的自然宿主，在奈瑟菌属10个种中，对人致病的只有脑膜炎奈瑟菌和淋病奈瑟菌，两种细菌DNA序列有70％的同源性，其余8个种视为条件致病菌。主要区别点为，淋病奈瑟菌寄居于尿道黏膜，引起泌尿生殖系统疾病；而脑膜炎奈瑟菌和其他奈瑟菌均存在于鼻咽腔黏膜。脑膜炎奈瑟菌有多糖成分。第一节脑膜炎奈瑟菌N.meningitismeningococcus1.1生物学性状——形态脑膜炎奈瑟菌纯培养的镜下形态（革兰染色）脑膜炎奈瑟菌为革兰染色阴性，常呈双排列，直径约为0.6-0.8μm的双球菌。单个菌体呈肾形或豆形。成双排列时，两个凹面相对。无鞭毛，不形成芽胞。新分离菌株大多有荚膜和菌毛。在脑脊液(CSF)直接涂片中，常位于中性粒细胞内外。1.1生物学性状——培养专性需氧，但在5%~10%CO2条件下生长最佳。营养要求高，需血液血清，最常用巧克力平板。形成光滑透明“露滴样”菌落。可产生自溶酶，需及时转种，培养物如不及时转种，超过48h可死亡。脑膜炎奈瑟菌在巧克力琼脂平板上的菌落特征脑膜炎奈瑟菌在巧克力平板上形成圆形、凸起、湿润、光滑、透明露滴状菌落。

血平板：成分：普通营养琼脂（或哥伦比亚琼脂），脱纤维羊血制法：取所需要量的普通营养琼脂，加蒸馏水溶解后，高压灭菌。冷却至50度，加入一定量（5%）羊血，倾注平板。用途：适于各类细菌的生长。脑膜炎奈瑟菌在血琼脂平板上的菌落特征脑膜炎奈瑟菌在培养基上形成圆形隆起、表面有光泽、透明或半透明、直径约1mm～5mm的露滴样粘液型菌落。无色素形成。血平板上无溶血现象。1.1生物学性状——生化反应可产生自溶酶，人工培养时若不及时移种，48h后菌体自溶。大多数脑膜炎奈瑟菌分解葡萄糖和麦芽糖，产酸，不产气。氧化酶和触酶实验阳性。1.1生物学性状——抗原构造根据荚膜多糖抗原不同，分为13个血清群。目前我国流行的血清群，95%以上A群，B群次之，C群较少见，但致病力最强。1.1生物学性状——致病性及免疫性致病物质荚膜（抗吞噬作用，增强细菌侵袭力）菌毛（黏附细胞表面，利于进一步侵袭）内毒素（主要致病物质）所致疾病流行性脑膜炎（简称流脑）人类是唯一的易感宿主，常存在于患者或带菌者的鼻咽腔黏膜中，主要通过飞沫直接从空气中传播。致病机制目前尚未完全清楚。免疫性6月～2岁年龄组婴儿免疫力最低，是易感人群1.2.1标本采集与分离培养1.病人脑脊液、血液和出血点渗出液的分离培养脑脊液离心取上清液检测脑膜炎奈瑟菌特异抗原，沉淀物直接接种巧克力琼脂平板，5%CO2，37℃培养，同时直接染色镜检。病人急性期静脉血用葡萄糖血清肉汤增菌，5%CO2，37℃培养24-72h。每日从肉汤培养物中取样分离培养，余下的血液分离血清检查抗原和抗体效价，病人恢复期血液血清也检测抗体效价。新鲜出血点渗出物接种巧克力平板，同时直接染色镜检。2.健康者咽拭子的分离培养咽拭子直接接种含多粘菌素B和万古霉素的巧克力平板。1.2.2脑膜炎奈瑟菌的鉴定生化鉴定（光滑露珠样菌落）

氧化酶：+DNA酶：-营养琼脂生长：-葡萄糖：+麦芽糖：+1.3鉴定标准1.菌体和菌落特征典型。2.生化反应为分解葡萄糖、麦芽糖产酸不产气。3.普通培养基上不生长。4.能与脑膜炎球菌分群诊断血清发生凝集反应。1.4防治原则综合性预防措施隔离病人、检查带菌者、预防性投药，室内通风流脑疫苗：6个月-2岁接种两次，间隔1月A群脑膜炎球菌多糖抗原。制备疫苗青霉素、磺胺大剂量治疗脑膜炎接种第二节淋病奈瑟菌Gonococcus2.1生物学性状——形态革兰染色阴性，0.6-0.8μm肾形、成双排列有菌毛，无芽胞和鞭毛，新分离株有荚膜2.1生物学性状——形态男性急性淋病患者的尿道分泌物标本直接涂片淋球菌（n.gonorrhoeae）为严格的人体寄生菌，常存在于急性尿道炎与阴道炎的脓性分泌物的白细胞中，形态染色类似于脑膜炎球菌。图片显示白细胞内挤满了革兰阴性双球菌，此种表现为典型的淋病柰瑟菌的特征。2.1生物学性状——培养专性需氧，首次分离时，需供给5%CO2。营养要求高，常用巧克力平板。抵抗力弱，不耐干燥和寒冷，对一般消毒剂敏感，对磺胺、青霉素较敏感，但易产生耐药性。2.1生物学性状——生化反应生化反应只分解葡萄糖，产酸不产气，不分解其它糖类。不分解麦芽糖，区别于脑膜炎球菌。氧化酶及触酶试验均阳性。淋病奈瑟菌在血琼脂平板上的菌落特征淋病柰瑟菌在血琼脂平板上，菌落较小、光滑凸起，无色透明或呈灰白色淋病奈瑟菌在巧克力琼脂平板上的菌落特征淋病奈瑟菌在巧克力琼脂平板上，菌落较小，凸起，光滑，圆形，无色或灰白色与脑膜炎奈瑟菌相似，营养要求更高，只能在巧克力平板及专用培养基上生长，形成灰白色细小S型呈滴露样菌落2.1生物学性状——主要菌体表面抗原构造菌毛与粘附有关，免疫原性不强脂多糖抗原经常变异，相应抗体不能防止再感染外膜蛋白PI：主要外膜蛋白，将淋病奈瑟菌分为18个血清型PII：吸附易感细菌的蛋白2.1生物学性状——致病物质及所致疾病致病物质菌毛脂多糖（内毒素）淋病人类是淋球菌唯一的天然宿主。成人淋病绝大多数通过性接触感染，是重要的性传播疾病（sexuallytransmitteddisease，STD），目前我国流行的发病率最高的性传播疾病。新生儿淋球菌性眼结膜炎“脓漏眼”2.2细菌学检查标本采集与注意事项

男性急性尿道炎患者尿道脓性分泌物；慢性尿道炎患者要求在尿道口内3-4cm处采样；前列腺炎患者采前列腺液。女性尿道炎患者采尿道分泌物；宫颈炎患者在宫颈口内1-1.5cm处取样。取时用特制棉签旋转数周，并停留数秒种后取出。最好床旁接种，或立即置运送培养基中，尽快送至实验室接种培养。保暖（运送时35ºC保温）、保湿、立即送检检验方法直接涂片镜检对男性尿道炎患者镜下见大量白细胞，其内有革兰阴性双球菌可判为阳性。分离培养与鉴定巧克力色培养基快速诊断法：观察典型菌落。ELISA法、核酸杂交、PCR技术生化反应免疫学实验药敏实验淋病奈瑟菌鉴定依据：1.涂片染色为革兰阴性双球菌；

2.巧克力平板上为半透明、灰白色、凸起滴露状菌落；3.氧化酶及触酶均阳性；

4.只分解葡萄糖，产酸不产气；5.血清学试验阳性。2.3细菌鉴别1.与脑膜炎奈瑟菌鉴别脑膜炎球菌可发酵葡萄糖，麦芽糖产酸，淋球菌只分解葡萄糖产酸，还可用血清学试验加以鉴别。2.与其他奈瑟菌鉴别一般没有必要鉴别。利用细菌形态、色素、糖发酵试验。2.4防治原则预防淋病应防止不正当的两性关系。新生儿1%硝酸银滴眼，或红霉素、四环素眼药膏。药物首选青霉素，但多有耐药性，应用新型青霉素族抗生素。比较内容脑膜炎奈瑟菌淋病奈瑟菌生物学性状形态结构G－双球菌；有荚膜、菌毛(新)同左培养特性高营养、5%CO2露滴状、自溶酶高营养、5%CO2

生化反应分解葡萄糖、麦芽糖只分解葡萄糖抗原与分类荚膜多糖群特异Ag外膜蛋白型特异Ag脂多糖Ag核蛋白Ag菌毛蛋白Ag脂多糖Ag外膜蛋白Ag(PⅠ、PⅡ、PⅢ)抵抗力冷、热、干燥、消毒剂均敏感同左致病性致病物质荚膜、菌毛、内毒素荚膜、菌毛、外膜蛋白、IgA1所致疾病流行性脑脊膜炎