标准解读

《NY/T 544-2002 猪流行性腹泻诊断技术》是一项针对猪流行性腹泻（PED）的诊断标准。该标准详细规定了用于诊断猪流行性腹泻的方法和技术要求，旨在为兽医及相关从业人员提供科学依据和技术指导，以准确识别和控制这种疾病在猪群中的传播。

根据该标准，猪流行性腹泻的诊断主要基于临床症状观察、实验室检测以及流行病学调查三个方面进行：

  • 临床症状：包括但不限于仔猪出现严重的水样腹泻、呕吐、脱水等症状；成年猪可能出现轻微的症状或无明显症状。
  • 实验室检测：通过采集患病动物的新鲜粪便样本或其他相关样本，采用直接免疫荧光法、酶联免疫吸附试验(ELISA)、RT-PCR等方法来检测病毒的存在与否及其类型。
  • 流行病学调查：收集并分析发病场点的信息，如地理位置、饲养管理条件、近期是否有新引进猪只等因素，帮助判断疫情的发生原因及可能的发展趋势。


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  • 被代替
  • 已被新标准代替
  • 2002-08-27 颁布
  • 2002-12-01 实施
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文档简介

IcS.11.220n41NY中华人民共和国农业行业标准NY/T544-2002猪流行性腹泻诊断技术Diagnostictechniquesforporcineepidemicdiarrhoea2002-08-27发布2002-12-01实施中华人民共和国农业部发布

NY/T544-2002猪流行性腹泻是猪的严重传染病之一.症状与猪传染性胃肠炎相似，病毒形态上也基本相同，但两者的抗原性不一样。本标准是根据国内研究成果和参考国外同类研究成果编写的。本标准的附录A、附录B、附录C均为规范性附录。本标准由农业部童牧兽医局提出本标准由全国动物检疫标准化技术委员会归口。本标准起草单位：中国农业科学院哈尔滨兽医研究所、中国人民解放军军需大学本标准主要起草人：马思奇、王明、宜华、冯力、传有恩。

NY/T544-2002猪流行性腹泻诊断技术范园本标准规定了猪流行性腹泻（PED)的病毒分离鉴定与检测病毒抗原的直接免疫荧光法、双抗体夹心醇联免疫吸附试验(ELISA).检测抗体的血清中和试验、间接ELISA试验技术。本标准适用于对猪流行性腹泻的诊断、产地检疫及流行病学调查等。2病毒分商与鉴定2.1材料准备2.1.1器材倒置显微镜，冷冻离心机，微孔滤器，细胞培养瓶，盖玻片，温箱等。2.1.2培养基及溶液的配制磷酸盐缓冲液(PBS)、细胞培养液、病毒培养液及N-2-羟乙基哌噪-N'-2-乙烷磺酸(HEPES)液（配制方达见附录A）。2.1.3细胞Vero细胞系、2.2病赛分商2.2.1病料采集采采病仔猪空肠内容物及小肠内容物用于分离病毒.样品冷冻保存。2.2.2病料处理将采集的小段空肠连同肠内容物用含1000IU/ml.青雅索、1000g/mL链蛋素、PBS液制成5倍悬液，在4℃条件下3000r/min离心30min,取上清液，经0.22m微孔滤膜过滤，分装，-20℃保存备用。2.2.3接种及观察将过滤液(病毒培养液的10%)接种于Vero细胞单层上，同时加过滤液量50%的病毒培养液，37℃吸附1h,根据组织培养瓶大小漆加病毒培养液至病毒培养总量，暨37℃培养，逐日观察3d～4d，按致细胞病变作用(CPE)变化情况，可官传2代～3代。2.3结果判定CPE变化的特点是:细胞面粗糙，颗粒增多，有多核细胞(7个～8个甚至几十个),并可见空斑样小区，细胞遥渐脱落，这是特征性的CPE,可与(猪)传染性胃肠炎(TGE)病毒的CPE相区别。同时在细胞培养瓶中加盖玻片，收毒后用直接荧光做鉴定试验。有条件时可进行电镜观察，用负染法在阳性样品中电镜观察可见到冠状病毒粒子。3直接茨光抗体法3.1材料准备3.1.1器材：茂光显微镜、冷冻切片机、载玻片、盖玻片、温箱、滴管等。3.1.2荧

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