其它毒性第二军医大学新药评价中心新药评价课件

其它毒性试验皮肤给药毒性试验皮肤给药的急性毒性试验皮肤给药的长期毒性试验皮肤刺激试验皮肤过敏试验光敏试验其它毒性试验腔道用药毒性试验眼刺激试验滴鼻剂和吸入剂急性毒性试验滴鼻剂和吸入剂刺激试验直肠、阴道用药急性毒性试验直肠、阴道用药刺激试验其它毒性试验药物依赖性试验身体依赖性试验自然戒断试验替代试验催促试验诱导试验精神依赖性试验

皮肤给药急性毒性试验剂量：3个，组距0.65－0.85。家兔每组４只，豚鼠或大鼠每组10只并设赋形剂或空白对照组方法：将受试物均匀涂敷于脱毛区，破损皮肤则在脱毛区划破皮肤后再涂敷受试物。24h后去除，每日观察，连续7-14天。观察动物体重、皮肤、毛发、眼睛和粘膜的变化，呼吸、循环、中枢神经系统、四肢活动等变化。若有死亡则进行尸检，当有肉眼可见病变，则需进行病检判断：试验结果与对照组比较判断

皮肤给药的长期毒性试验目的：观察经皮渗透产生的异常反应和可逆程度，找到靶器官动物：家兔(2kg,6只/组)，豚鼠(300g，10只/组)或大鼠(200g，10只/组)，♀♂各半。给药前24h动物背部脊柱两侧脱毛，面积同急毒受试物：同急性毒性试验剂量：３个，要求同大鼠口服长毒试验，并设赋形剂或空白对照组，若用受试物剂量超过有效浓度20倍以上，仍未见动物有不良反应或死亡时，则只须设一个高剂量组皮肤给药的长期毒性试验方法：受试物均匀涂敷,每次至少接触６h，临床用药疗程的３倍以上时间连续给药。部分动物应于停药后继续观察１-２周，检测指标：除每日观察皮肤、临床变化及皮肤病理学检查外，其血液学、血液生化指标和病理学检查项目同大鼠长期毒性试验要求判断：实验结果应写明安全剂量、中毒剂量、中毒表现、中毒靶器官及中毒的可逆程度等皮肤刺激试验多次给药则每日涂抹一次，连续一周，其余均与一次给受试物的方法和要求一致结果评价：每只动物试验结果进行刺激反应评分，计算出平均分值进行刺激强度评价皮肤刺激反应评分━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━

刺激反应

分值━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━红斑:

无红斑

0

勉强可见

1

中度红斑

2

严重红斑

3

紫红色红斑并有焦痂形成

4水肿:

无水肿

0

勉强可见

1

皮肤隆起轮廓清楚

2

水肿隆起约1mm并范围扩大

4━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━皮肤刺激强度评价━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━强度分值━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━无刺激性<0.5轻度刺激性<2.0中度刺激性<6.0强度刺激性>6.0━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━皮肤过敏试验方法：分受试物组，空白对照组，阳性对照组，每组10只（♀♂各半）1.致敏接触：将受试物0.1-0.2ml(ｇ)涂在左侧脱毛区，持续6h。第７天和第14天，同法各重复一次2.激发接触：末次致敏后14天，将受试物0.1-0.2ml(ｇ)涂于右侧脱毛区，阳性对照用0.1%2,4—二硝基氯代苯，６h后去除，即刻观察，然后于24、48、72h再次观察过敏反应情况结果评价：结果按皮肤反应评分标准评分，根据试验组与对照组豚鼠皮肤反应的差别，判断受试物对皮肤过敏反应性质可用致敏率(红斑或水肿的动物例数/受试动物总数)判断致敏强度皮肤过敏反应评分标准皮肤反应分值红斑形成：无红斑０轻度红斑１中度红斑２重度红斑３水肿性红斑４水肿形成：无水肿０轻度水肿１中度水肿２重度水肿３致敏率分类━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━致敏率（%）反应强度━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━０－10弱致敏性20－30轻度致敏性40－60中度致敏性70－80高度致敏性90－100极度致敏性━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━皮肤给药毒性试验有关问题设立赋形剂对照组，赋形剂各种指标、规格等均应符合药用规格受损皮肤的用药，急毒、长毒等毒性试验也宜以模拟破损皮肤进行高剂量符合制剂工艺要求，以剂型允许配制浓度和允许给药容量给药。不能将外用药厚厚地涂在皮肤上眼刺激试验目的：观察眼睛接触受试物后产生的刺激反应动物：家兔≥４只，体重2－3kg受试物：液体或膏剂均可直接滴入或涂敷剂量：用原液或原膏剂，不必稀释，每只眼睛滴入0.1ml或涂敷0.1g以内方法：滴入或涂敷于动物一侧眼结膜囊内，另一侧作为空白（或赋形剂）对照。给药后使眼睛被动闭合5－10分。记录给药后6、24、48、72h至7天眼的局部反应情况眼刺激试验临床用药超过一周的受试物要进行多次给药刺激试验，连续给药一周以上结果评价：将每只动物的眼角膜、虹膜和结膜的刺激反应的分值相加，即是一只受试动物眼刺激反应的总积分。把每个受试动物的刺激反应积分的总和除以动物数，就是该受试物对眼刺激性的最后分值，以此判定受试物刺激程度眼刺激试验--虹膜评分正常０皱褶明显加深，充血，肿胀，角膜周围轻度充血，瞳孔对光仍有反应１出血，肉眼可见坏死，对光无反应（或出现其中一种反应）２眼刺激试验--结膜评分Ａ.充血（指睑结膜、球结膜部位）血管正常０血管充血呈鲜红色１血管充血呈深红色，血管不易分辨２弥漫性充血呈紫红色３Ｂ.水肿无水肿０轻微水肿（包括瞬膜）１明显水肿，伴有部分眼睑外翻２水肿至眼睑近半闭合３水肿至眼睑超半闭合４Ｃ.分泌物无分泌物０少量分泌物１分泌物使眼睑和睫毛潮湿或粘着２分泌物使整个眼区潮湿或粘着３眼刺激性评价标准━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━刺激程度积分━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━无刺激性０－３轻度刺激性４－８中度刺激性９－１２强度刺激性１３－１６━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━滴鼻剂和吸入剂急性毒性试验方法：大鼠或豚鼠每组10只，家兔每组４只，♀♂各半。滴入或吸入药后，至少接触４小时，给药后即刻观察及7-14天观察动物全身状况、体重、呼吸、循环、中枢神经系统、四肢活动等变化，若出现死亡则病检结果判断：试验结果与对照组比较。如能测出LD50值则按急性毒性试验要求计算滴鼻剂和吸入剂刺激试验目的：观察滴入或吸入后产生的刺激反应动物：同上述急性毒性试验受试物：液体或粉末剂分组：给药组、赋形剂组及空白对照组，每组家兔３只，或大鼠或豚鼠５只方法：将药滴入或喷雾于动物。和粘膜接触至少４h。于24h处死动物，观察有无充血、红肿等现象。若有变化则需进行病检多次给药则每天滴入或吸入一次,连续７天，于末次给药24h后处死动物结果判断：试验结果与对照组比较进行判断直肠、阴道用药刺激试验多次给受试物则一般每日一次，连续７天，于末次给药后24h处死动物并观察结果判断：试验结果与对照组比较判断腔道用药毒性试验要特别注意既要符合剂型要求，又要考虑腔道可给容量身体依赖性试验--自然戒断试验连续给药后突然停药，观察戒断症状，与同类的代表药作对比，判断受试药的依赖性潜力动物：小、大鼠和猴。小鼠体重20-24g，每组≥20只，大鼠体重180-220g，每组≥10只,猴体重3-5kg，每组3～5只，♂♀各半剂量：2～3，须设赋形剂对照和阳性药对照(吗啡，苯巴比妥或巴比妥)。低剂量用ACD；高剂量组依赖性潜力低的药物应选用接近毒性反应的剂量，毒性低的药物选用MTD。药物可采用恒量或剂量递增的方式给予身体依赖性试验--自然戒断试验给药途径：1～2种给药途径，必须有一种与临床用药途径相同给药期限：镇痛药在小、大鼠需给药30天，猴需给药90天；镇静催眠药在小、大鼠需给药60～90天，猴需给药180天。每天上下午各一次身体依赖性试验--自然戒断试验观察指标：镇痛药在停药前24h及停药后48h内每隔4h观察记录外观体征和行为活动、植物神经系统机能变化，并称重。镇静催眠药在停药前一天及停药后的1至2周内每天观察动物的外观体征和行为活动及自发惊厥发生率外观体征和行为活动包括：应激性、神情过敏(猴)、饮食、睡眠、自发运动活动、攻击性、警觉程度、神经反射、竖尾、震颤、惊厥、呼吸、体温、体重植物神经系统机能变化：腹泻、流涎、流泪、恶心、呕吐、瞳孔大小身体依赖性试验--自然戒断试验资料记录及整理：①动物应写明种属、性别、生产合格证号、记录体重、实验室温度及湿度②受试物应写明生产批号、配制方法③戒断症状用记分法统计，对检测指标和体重、惊厥发生率等应设计合理的图表显示。实验结果进行统计处理身体依赖性试验--替代试验给予动物代表药(如吗啡、巴比妥或苯巴比妥)产生身体依赖性后，停止给药，替之以受试药，观察记录动物是否发生戒断症状及发作程度动物：参照“自然戒断试验”剂量：参照“自然戒断试验”给药途径：腹腔注射、灌胃或“药掺食”(drugadmixedfood,DAF)法给予代表药使产生身体依赖性，然后停止给代表药，以同样给药方式给予不同剂量的受试药,观察及记录替代期间动物的戒断行为和体重变化身体依赖性试验--替代试验镇痛药的观察期为停止吗啡前24h和停药后48h内，每4h观察一次；镇静催眠药的观察为停止代表药前一天和停药后的1～2周内，每天观察一次采用1～2种给药途径，必须有一种与临床用药途径相同观察指标：参照“自然戒断试验”资料记录与整理：参照“自然戒断试验”身体依赖性试验--催促试验短时期内给予动物大剂量受试药，然后注射受体对抗剂，观察和记录是否出现戒断症状及其程度。此法只适用于有竟争性受体对抗剂的阿片类药物动物：参照“自然戒断试验”剂量：除低剂量组一般采用临床剂量的1至2倍外，余同“自然戒断试验”给药途径：猴的实验应采用与临床给药途径相同；大、小鼠的实