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文档简介

标记物制备与鉴定125I-125I或125I+125I-标记物（混合物）Ch-T、LPO氧化取代反应直接标记法化学或酶促反应，将放射性负电碘离子氧化成碘原子或正电碘离子，通过取代反应置换被标记物分子中酪氨酸或酪胺残基以及组胺残基上的氢原子。使用无还原剂的高比放射性碘源被标记物用量要少ch-T用量要低控制总反应体积<200μl反应时间1-2分钟弱碱性反应条件bolton-Hunter间接标记法联接标记(bolton-Hunter)预先将125I用ch-T法标记琥珀酰胺酯，制成的125I化脂功能基团可与蛋白分子上的氨基酸残基反应，从而使待标记物被碘化。聚合、损伤物标记蛋白游离125I125碘-标记物的制备－纯化

凝胶过滤法离子交换层析法聚丙烯酰胺凝胶电泳高效液相色谱法125碘-标记物的制备－鉴定

放射化学纯度单位标记物中结合于被标记物上的放射性占总放射性的百分率应大于95%免疫活性标记物与抗体结合的能力标记物与过量抗体反应百分比该值越大,标记物免疫活性好结果准，测定复杂比放射活性单位化学量标记物中含的放射性强度单位：Ci/gmCi/mgCi/mmol比放射性过高，将影响标记物免疫活性计算法：依据标记反应中放射性核素的利用率（标记率）来计算标记物的比放射性.自身置换法：比较标记抗原与标准抗原的免疫活性来测定标记物的比放射性

结果欠准，计算简便比放射性－计算法

自身置换曲线

反应系统：限量Ab和递增剂量(cpm)的标记抗原标记抗原的结合率(B/T%)随标记抗原总量的增加而减少两条曲线平行,若标记抗原与标准品抗原具有相同的免疫活性标准曲线

反应系统:抗体（限量）、标记抗原（定量）和剂量递增的标准抗原组成标记抗原与抗体的结合率(B/T%)随标准抗原的增加而竞争抑制性减少比放射性=自身置换法比放射性－自身置换法

标准曲线与自身置换曲线平行表明在相同的放射性结合水平上，二实验中抗体上结合的抗原物质总量相同计算置换曲线平行段某结合率的放射性强度(cpm/ml换算为nCi/ml)计算标准曲线平行段相应结合率对应的标准抗原化学量(ng

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