标准解读

《GB/T 40183-2021 DNA甲基化的测定 焦磷酸测序法》是一项国家标准，旨在为使用焦磷酸测序技术检测DNA甲基化状态提供规范性指导。该标准适用于生物学、医学研究领域内对特定基因区域或全基因组范围内CpG位点的甲基化水平进行定量分析。

标准中详细规定了从样本准备到数据解读的整个流程，包括但不限于：

  • 样品采集与处理：描述了如何正确收集生物样品（如血液、组织等），以及如何通过提取DNA来获得适合后续步骤使用的高质量核酸。
  • DNA片段化与纯化：介绍了将长链DNA打断成适合焦磷酸测序所需长度的方法，并强调了去除RNA和蛋白质杂质的重要性。
  • 亚硫酸氢盐转化：这是整个过程中非常关键的一环，利用化学方法将未被甲基化的胞嘧啶转化为尿嘧啶，而甲基化的胞嘧啶则保持不变，从而在后续测序时能够区分两者。
  • PCR扩增及文库构建：说明了如何选择合适的引物对目标序列进行扩增，并介绍了一种有效的文库制备策略以确保高通量测序的成功率。
  • 焦磷酸测序操作指南：提供了关于仪器设置、试剂配比等方面的建议，以保证实验结果的准确性与重复性。
  • 数据分析与报告撰写：指出了在完成测序后，应采用哪些软件工具来进行数据分析，并给出了编写正式研究报告时需包含的信息类型。


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....

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  • 现行
  • 正在执行有效
  • 2021-05-21 颁布
  • 2021-12-01 实施
©正版授权
GB/T 40183-2021DNA甲基化的测定焦磷酸测序法_第1页
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文档简介

ICS07080

A21.

中华人民共和国国家标准

GB/T40183—2021

DNA甲基化的测定焦磷酸测序法

DeterminationofDNAmethylation—Pyrosequencing

2021-05-21发布2021-12-01实施

国家市场监督管理总局发布

国家标准化管理委员会

GB/T40183—2021

前言

本标准按照给出的规则起草

GB/T1.1—2009。

本标准由中国标准化研究院提出并归口

。

本标准起草单位河北医科大学中国标准化研究院河北省食品检验研究院中国科学院遗传与发

:、、、

育生物学研究所农业资源研究中心河北师范大学

、。

本标准主要起草人吕品马爱进张岩林浩李永鹏李东明黄芸杨宏超

:、、、、、、、。

Ⅰ

GB/T40183—2021

DNA甲基化的测定焦磷酸测序法

1范围

本标准规定了用焦磷酸测序法测定甲基化的方法

DNA。

本标准适用于动植物组织或体外培养细胞甲基化测定

DNA。

2规范性引用文件

下列文件对于本文件的应用是必不可少的凡是注日期的引用文件仅注日期的版本适用于本文

。,

件凡是不注日期的引用文件其最新版本包括所有的修改单适用于本文件

。,()。

分析实验室用水规格和试验方法

GB/T6682

3术语和定义缩略语

、

31术语和定义

.

下列术语和定义适用于本文件

。

311

..

DNA甲基化DNAmethylation

在甲基转移酶的催化下以腺苷甲硫氨酸为甲基供体将甲基转移至碱基特定结构上的

DNA,S-,

过程

。

32缩略语

.

下列缩略语适用于本文件

。

脱氧核糖核酸

DNA:(deoxyribonucleicacid)

聚合酶链式反应

PCR:(polymerasechainreaction)

4原理

经重硫酸盐硫化处理后双链中未甲基化的胞嘧啶转化为尿嘧啶通过将尿嘧啶

DNA,DNA,PCR

转化为胸腺嘧啶根据产物中相应甲基化位点的胞嘧啶和胸腺嘧啶的比例进行定量

,PCR。

5试剂或材料

除非另有规定仅使用分析纯试剂

,。

51水二级水

.:GB/T6682,。

52动物基因组提取试剂盒

.DNA。

53植物基因组提取试剂盒

.DNA。

54焦磷酸

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