检测系统及分析性能评价

自建检测系统及

分析性能评价河北医科大学第四医院高社军行业要求国家卫生行政管理部门，《医疗机构临床实验室管理办法》，第三章24条：20.1是否对检测系统(仪器设备、试剂、校准品)进行了有效性的评价？包括对准确度、精密度、分析测量范围、参考范围、分析干扰等的评估。认可要求ISO15189认可要求5.5检验过程5.5.1检验程序的选择、验证和确认5.5.1.1总则5.5.1.2检验程序验证在常规应用前，应由实验室对未加修改而使用的已确认的检验程序进行独立验证。实验室应从制造商或方法开发者获得相关信息，以确定检验程序的性能特征。实验室进行的独立验证，应通过获取客观证据（以性能特征形式）证实检验程序的性能与其声明相符。验证过程证实的检验程序的性能指标，应与检验结果的预期用途相关。ISO15189认可要求5.5检验过程5.5.1检验程序的选择、验证和确认5.5.1.1总则5.5.1.2检验程序验证

5.5.1.3检验程序的确认实验室应对以下来源的检验程序进行确认：a)非标准方法；b)实验室设计或制定的方法；c)超出预定范围使用的标准方法；d)修改过的确认方法。概念评估（Evaluation）：实验室通过实验，测量新方法的分析性能。确认（Validation）：通过提供客观证据对特定的预期用途或应用要求已得到满足的认定。验证（Verification）：提供客观证据对规定要求得到满足的认定。系统的确认和验证检测系统什么是检测系统？完成一个项目检测涉及的仪器、试剂、校准品、测定方法、质量控制、保养计划等的（规定）组合。如果是手工操作，则还必须包括操作人员。检测系统检测系统分类：贝克曼LX20生化仪贝克曼的检测试剂盒贝克曼的校准品葡萄糖氧化酶法贝克曼LX20生化仪罗氏的检测试剂盒贝克曼的校准品葡萄糖氧化酶法标准检测系统自建检测系统两个不同的检测系统检测系统的要素校准品试剂分析仪均值与真值相接近的程度偏倚(Bias)系统误差重复测定结果之间接近的程度标准差SD，CV随机误差仪器主要技术性能验证建立相关档案记录建立相关SOP并培训、授权环境条件设备档案

检测系统支持文件设备档案大型仪器设备登记表：仪器名称、型号、序列号、购买时间、价格、附加说明、使用专业组等小型仪器设备登记表仪器和项目SOP仪器校验行业标准

河北医科大学第四医院仪器校验零点漂移吸光度准确度吸光度重复性杂散光吸光度线性试剂舱温度样本针携带污染……河北医科大学第二医院仪器校验河北医科大学第四医院检验科试剂和校准品试剂三证试剂出入库管理试剂开瓶时间试剂评价溯源性最准确可靠的结果就是：在参考实验室,用国际公认的参考方法对新鲜的血清标本做出的值溯源性就是通过一条不间断的比较链（方法学比较），使检测结果或检测标准的值能够与规定的参考标准，通常是与国家标准或国际标准一致.一级校准品制造厂商在生产时所使用的校准品一级参考方法二级参考方法制造厂商所推荐的测定操作法二级校准品制造厂商在销售时所使用的校准品制造厂商所常用的测定操作法用户的日常检验法日常样品测定结果SI单位的定义不准确度的大小溯源的体系图检测系统性能评价的参考标准NCCLS(美国临床实验室标准化委员会)

－NationalCommitteeforClinicalLaboratoryStandardsCLSI(临床实验室标准化协会)

－ClinicalandLaboratoryStandardsInstitute分析性能评价指标准确度精密度（NCCLSEP5）线性范围（NCCLSEP6）参考区间（NCCLSC-28A)初步评价（NCCLSEP10）抗干扰能力（NCCLSEP7）基质效应（NCCLSEP14）定性实验方法的评价（NCCLSEP-12P）比对及偏差（NCCLSEP9）EP5-A（临床化学设备操作精密度评价核准指南）-EvaluationofPrecisionPerformanceofClinicalChemistryDevices;ApprovedGuidelineEP6-P2(定量分析方法的线性评价：统计方法，提议指南)-EvaluationoftheLinearityofQuantitativeAnalyticalMethods:AStatisticalApproach;ProposedGuideline

EP7-P

(临床化学干扰试验；建议指南)-InterferenceTestinginClinicalChemistry;ProposedGuideline

EP10-A

(定量临床实验室方法的初步评价，核准指南)

-PreliminaryEvaluationofQuantitativeClinicalLaboratoryMethods;ApprovedGuideline

EP12-P

(用于定性实验评价的用户协议，提议指南)-UserProtocolforEvaluationofQualitativeTesterformance;ProposedGuideline精密度评价：EP5-A概念：精密度先做一个初步的批内精密度测定，即一个标本重复测定20次，计算出均值，标准差和变异系数。分别准备正常值血清和病理值血清，并分装冻存。每天分别取出正常值血清和病理值血清各一支，室温复溶、混匀待测。EP5-A2个标本每天测定2次(2次测定间隔不得少于2小时)，每次测定均作双份，共测定20天。每次测定至少做一个质控。数据整理于精密度实验方案表。离群点的检查：“离群点”应弃去或重做。统计分析：数据录入精密度实验方案表后，按EP5-A文件中计算公式计算总精密度ST，批内标准差Swr，批间标准差Srr，日间标准差Sdd。精密度评价实验-基本方法分析物:肌酐样本:低/中/高值血清；HN1530/HE1532仪器:OlympusAU400试剂来源/批号:Lot12-1218P校准物来源/批号:RandoxCAL2351/Lot476UE以肌酐酶法试剂为例，验证EP5-A2基本方法精密度评价实验-基本方法天数(I)第一批Run1第二批Run2日均值XiXi11Xi12批均值Xi1Xi21Xi22批均值Xi212……20总均值

X

●●●数据记录表格精密度评价实验-基本方法肌酐酶法试剂精密度评价-低值血清μmol/l天数第一批第二批XiXi11Xi12Xi1Xi21Xi22Xi2181.079.980.580.780.880.880.6280.378.979.681.080.680.880.2380.079.679.880.281.380.880.3479.379.479.479.479.579.579.4579.279.979.680.078.979.579.5679.779.479.679.379.379.379.4778.178.478.378.178.078.178.2878.678.678.680.179.079.679.1979.180.079.681.080.080.580.01080.780.180.479.279.579.479.91178.478.878.681.481.181.379.91281.881.081.481.981.681.881.61381.179.980.582.981.382.181.31479.881.680.781.080.080.580.61580.079.579.879.480.179.879.81679.880.780.379.779.579.679.91780.381.180.779.479.979.780.21880.180.680.479.378.679.079.71978.278.278.278.678.678.678.42079.980.380.178.076.777.478.7总均值79.8精密度评价实验-基本方法天数第一批第二批（第一批均数－第二批均数）2（每天均数-总均数）2（Xi11-Xi12）2（Xi21-Xi22）2（Xi1-Xi2）2（Xi●●-X●●●）211.210.010.090.6021.960.161.440.1430.161.210.900.2040.010.010.010.1850.491.210.010.1160.0900.060.1670.090.010.042.81801.210.900.5790.8110.900.04100.360.091.100.00110.160.097.020.01120.640.090.123.05131.442.562.562.17143.2410.040.60150.250.490.000.01160.810.040.420.01170.640.251.100.12180.250.491.960.0319000.162.04200.161.697.561.22求和12.7711.6126.4214.06（1）（2）（3）（4）精密度评价实验-基本方法重复性

其中：I 总的运行天数（通常为20）j 为每日的批次（1或者2）Xij1

为第i日第j批第1次的结果Xij2 为第i日第j批第2次的结果=0.55精密度评价实验-基本方法室内精密度评价

I ＝总的运行天数（有两个批次）Xi1●

＝第i日第1批运行结果的均值Xi2● ＝第i日第2批运行结果的均值

=0.81精密度评价实验-基本方法室内精密度评价

I ＝总的运行天数Xi●●

＝第i日所有结果的均值X

●●● ＝所有结果的均值

=0.86精密度评价实验-基本方法室内精密度评价=0.642=0.712精密度评价实验-基本方法室内精密度评价其中：

Sdd为日间标准差Srr为批间标准差Sr为重复性标准差（批内标准差）=1.11举例-酶法肌酐精密度评价肌酐酶法试剂

精密度评价-低值血清μmol/l天数I20

批均值标准差A0.81

日均值标准差B0.86

总均值meanX

●●●

79.8

CV重复性RepeatabilitySr0.550.7%批间精密度Between-runSrr0.710.9%日间精密度Between-daySdd0.640.8%室内精密度Within-laboratoryST1.111.4%举例-酶法肌酐精密度评价研发4度试剂精密度评价(μmol/l)SerumPrecisionHN1530HE1532Serum1Serum2Serum3NO.ofDataPoints8080808080Mean(μmol/l)128.3375.879.8184.1379.5Within-RunSD0.842.130.551.172.15CV%0.70.60.70.60.6Within-LaboratorySD1.343.531.111.924.17CV%1.00.91.41.01.1依据EP-5A2文件要求，测定试剂精密度临床实验室精密度验证结果判定与厂家声明的批内不精密度和室内不精密度比较与国家标准比较与CLIA’88推荐的允许总误差比较实验室自定标准线性评价：EP6-P2概念：线性范围、可报告范围、临床可报告范围将H和L样品按：5L、4L+1H、3L+2H、2L+3H、1L+4H、5H关系各自配制混合，形成系列评价样品。一天内做两次实验，第一次实验由低到高重复测定3次，第二次实验由高到低重复测定3次，即每个实验样品做6次重复测定。综合所有结果作统计学处理。EP6-P2依照稀释关系，计算各实验样品的预期值。按实验要求，每个样品做6次重复测定，得6个实测值，它们和预期值形成6对数据。用直线回归对6对数据进行统计，得直线回归方程Y=bX+a，若b在0.97～1.03范围内，a接近于0，则可直接判断测定方法可报告范围在实验已涉及浓度。若不符合，可去除某点，缩小分析范围作为真实的可报告范围。准确度评价准确度：检测结果与被测量物真值之间的一致程度。方法学比对：EP-9A（标准物质；标准方法比对；回收试验）回收试验室间质评准确度确认若采用某项目的Cal当样品进行检测，该校准品的检测值与靶值间的差异，可认为该项目的不准确度。准确度确认回收实验回收率%=回收浓度/加入浓度×100%

标准液体积加入浓度=标准液浓度×

基础样本体积+标准液体积

回收浓度=样本最终测定浓度-基础样本浓度参考范围参考范围的建立：新分析物或新分析方法参考范围的转移与验证：已获得测量的、可靠性公认的分析物

项目参考范围来源红细胞计数(RBC)男：（4.00~5.50）×1012/L女：（3.50~5.00）×1012/L全国临床检验操作规程（第二版），第8页血红蛋白(Hb)男：120~160g/L女：110~150g/L全国临床检验操作规程（第二版），第8页红细胞比容(Hct)男：0.370~0.500女：0.350~0.450MCV(fl)男：79.0~101.0女：79.0~101.0MCH(pg)26.0~35.0MCHC(g/L)310~370RDW(%)11.5~14.5白细胞计数(WBC)男：（4.0~10.0）×109/L女：（4.0~10.0）×109/L河北省临床检验管理与技术规程，第64页我们的参考范围从哪里来的？建立参考范围的要点纳入标准（供参考）

没有影响检测结果的生理指征无服用药物或进行饮食治疗发育正常，无器质性疾病

3个月内无输血、手术史妇女不在妊娠期及哺乳期选取人数（随机至少120个观察对象）

确定参考范围的最小样本量检测：统计分析：参考对象群体值的特定百分数（通常是95％）

非参数和参数分析：是否正态分布参考范围的转移和确认

使用相同类型的分析体系使用不同分析体系同一实验室内从一个实验室到另一个实验室检测对象相同的地理区域和相同的统计学总体

观测对象及方法学是一致或可比的

基于已确立的有效参考范围，转移是可行、节约的参考范围转移拿来主义

通过调查评估转移的可接受性，无需确认而进行转移

检测较小参考个体的样本量（n＝20）评估确认转移

检测参考个体（n＝60）评估和确认转移

三种基本方法转移有前提对象的一致性方法的一致性不多于2个落在参考限值外确认有效3个以上结果落在参考限值之外重新取20个样本不多于2个落在参考限值之外3个或更多的值落在限值外生物学特性不同建立参考范围20个检测值确认有效初步性能评价：EP10-AEP9-A（用患者样本进行方法对比及偏差评估—批准指南）

-MethodComparisonandBiasEstimationUsingPatientSamples;ApprovedGuideline

方法对比试验

目的：方法对比试验的主要目的是获得候选方法的系统误差的偏倚估计，即准确度的评估。方法应是参考方法或推荐方法,如该测定没有参考方法或推荐方法，亦可以用公认的常规方法。但须具备:(1)比对试验方法有更好的精密度。

(2)干扰影响已知。

(3)与试验方法使用相同的计量单位。对比方法的选择

应有足够的时间熟悉所用的仪器、试验方法、比较方法及比较方案。比对前的准备工作实验标本的选择1）收集新鲜的正常和异常的临床标本,样品大小至

少为40个标本。2）足够宽的浓度范围,各浓度应有合适的比例（部分项目见表1）。

注意：尽可能使50%的实验标本分析物含量不在参考范围内，分析物含量分布越宽越好。若不能及时测定需保存标本，应确保它们的稳定性。只能使用一种能符合两个方法要求的保存条件，以免因条件不一引出新的变异。

项目A组B组C组D组E组

Glu(mg/dl)<50(10%)51～110(40%)111-150(30%)151-251(10%)251-SL(10%)BUN(mg/dl)<15(10%)12～25(40%)26-50(20%)51-100(20%)101-SL(10%)Cr(mg/dl)<1.0(20%)1.1～2.5(30%)2.6-5.0(20%)5.1-10(20%)10-SL(10%)Na(mmol/L)120～130(20%)131～140(40%)141-150(30%)151-160(10%)K(mmol/L)<3.0(20%)3～4.5(40%)4.5-6.0(30%)>6(10%)Cl(mol/L)80～95(30%)96～105(40%)106-120(30%)

TP(g/L)<50(10%)51～70(40%)71-90(40%)>90(10%)Alb(g/L)<30(10%)31～40(40%)41-50(40%)>50(10%)

GGT(U/L)0～NL(40%)NL～2NL(40%)2NL～4NL(10%)4NL～SL(10%)表1：部分项目浓度范围建议注SL=可测范围上限NL=正常范围上限

1）每天测定8个标本,双份测定时第一次按顺序1,2……7,8,

第二次,8，7……2,1,共测5天。

２）整理数据成表2（以ALT测定为例）。实验操作样品实验方法比较方法实验方法比较方法

结果1结果2结果1结果2结果1-2（

DYi）

结果1-2（DXi）11415161511202221232235373235233575659561348082797623524524023224058678671173330313332...4015114815615036表2实验方法与比较方法测定ALT结果比较结果处理方法内离群点的检查方法间离群点的检查作图线性相关的目测检查X取值范围检查线性回归计算预期偏差和相对偏差结论方法内离群点的检查1、绝对偏差界限的计算

X-对比仪器结果Y-实验仪器结果

>4：离群点2、相对的绝对偏差界限的计算

>4：离群点方法间离群点的检查1、绝对偏差界限计算

>4为离群点2、相对的绝对偏差界限计算

>4为离群点

离群点处理如果只有一个离群点，可将此样品的全部数据(X、Y)进行删除，继续进行下面的分析。如果超过两个以上的离群点，则需查找原因，如果仅仅是样品的因素，则替换这些离群点数据或重新分析所有数据。1、对的散点图

2、所有结果的散点图

以每次测定的Y值为Y轴，双份测定的X的均值为X轴3、偏差图以每个样本两种仪器双份测定的均值差(Yi一Xi)为Y轴；对比仪器每样本双份测定的均值(Xi)为x轴，以直线X=0为水平中线作图4.偏差图

以每个样本两种仪器每次测定的差(Yi一Xi)为Y轴；对比仪器每样本双份测定的均值(Xi)为X轴，以直线X=0为水平中线作图

作为比较方法,理论上要求应该没有误差,但在临床实验室这是不可能达到的,EP9A文件指出,可用相关系数(r)来粗略估计X取值范围是否足够宽。r≥0.975(或者是r2≥0.95)则认为X范围适合。用相关系数r的计算公式附注：如r<0.975,则使用部分个别差异法计算平均偏差。X