GB/T 36820-2018甘蔗条纹花叶病毒实时荧光反转录聚合酶链式反应(RT-PCR)检测方法

ICS6502001

B16..

中华人民共和国国家标准

GB/T36820—2018

甘蔗条纹花叶病毒实时荧光反转录聚合酶

链式反应RT-PCR检测方法

()

DetectionmethodofSugarcanestreakmosaicvirusbyreal-timereverse

transcritionolmerasechainreactionRT-PCR

ppy()

2018-09-17发布2019-04-01实施

国家市场监督管理总局发布

中国国家标准化管理委员会

GB/T36820—2018

前言

本标准按照给出的规则起草

GB/T1.1—2009。

本标准由全国植物检疫标准化技术委员会提出并归口

(SAC/TC271)。

本标准起草单位福建农林大学国家甘蔗工程技术研究中心农业部甘蔗及制品质量监督检验测试

:、

中心农业部福建甘蔗生物学与遗传育种重点实验室

、。

本标准主要起草人高三基黄美婷傅华英孙生仁张慧丽王锦达陈如凯

:、、、、、、。

Ⅰ

GB/T36820—2018

甘蔗条纹花叶病毒实时荧光反转录聚合酶

链式反应RT-PCR检测方法

()

1范围

本标准规定了甘蔗条纹花叶病毒Suarcanestreakmosaicvirus实时荧光反转录聚合酶链式反

(g)

应检测方法的仪器与设备试剂与材料样品的采集与前处理检测以及结果判断与表述等

(RT-PCR)、、、。

本标准适用于可能带有甘蔗条纹花叶病毒的活体寄主植物的快速检测诊断

、。

2缩略语

下列缩略语适用于本文件

。

外壳蛋白

CP:(coatprotein)

值实时荧光反应中每个反应管内的荧光信号达到设定的阈值时所经历的循环数

Ct:PCR,(cycle

threshold)

与链互补的单链

cDNA:RNADNA(complementaryDNA)

Taq酶热启动聚合酶

ExHS:DNA(hotstartDNApolymerase)

羧基荧光素

FAM:6-(6-carboxy-fluorescein)

聚合酶链式反应

PCR:(polymerasechainreaction)

核糖核酸

RNA:(ribonucleicacid)

反转录聚合酶链式反应

RT-PCR:(reversetranscriptionpolymerasechainreaction)

甘蔗条纹花叶病毒Sugarcanestreakmosaicvirus

SCSMV:()

羧基四甲基罗丹明

TAMRA:6-(6-carboxytetramethylrhodamine)

吸头

Tip:

3方法原理

根据甘蔗条纹花叶病毒基因序列设计一对仅在该病毒基因间保守的特异性引物和一条特

CPCP

异性的荧光双标记水解型寡核苷酸探针探针首先利用反转录酶将病毒反转成

(TaqMan)。RNA

再以为模板在同一反应管内连续进行实时荧光扩增反应水解型寡核苷酸探针

cDNA,cDNAPCR,

探针的荧光信号强度伴随着目标序列扩增产物的增加呈正比关系通过收集扩

(TaqMan)PCR,PCR

增过程的荧光信号值即可判断试样是否带有目标序列甘蔗条纹花叶病信息参见附录

,。A。

4仪器与设备

41实时荧光检测仪激发检测波长范围可用荧光染料和水

.PCR:/350nm~750nm;(SYBRGreenI)

解型寡核苷酸探针探针升降温速度均一性准确性温

(TaqMan);≥2.0℃/s;+/-0.5℃;+/-0.3