标准解读
《GB/T 35342-2017 松材线虫分子检测鉴定技术规程》是一项国家标准,旨在为松材线虫(Bursaphelenchus xylophilus)的分子生物学检测提供一套标准化的操作流程。该标准详细规定了从样本采集、DNA提取到PCR扩增及结果分析等一系列步骤的具体方法和技术要求。
首先,在样品采集方面,标准明确了不同类型的植物材料如何进行正确采集,并强调了采集过程中需要注意的问题以保证样本的质量和代表性。例如,对于疑似感染松材线虫的树木或木材,应选取典型病斑部位作为取样点;同时,还提出了关于样本保存条件的要求,如使用干燥剂保持样品干燥等措施来防止DNA降解。
其次,关于DNA提取过程,《GB/T 35342-2017》推荐了几种适用于不同类型植物组织的高效DNA提取方法,并对每一步骤所需试剂及其浓度、操作温度与时间等参数进行了具体说明。此外,也提到了如何通过电泳或其他方式评估所提取DNA的质量和纯度。
接下来是PCR反应体系构建部分,本标准给出了推荐使用的引物序列以及针对松材线虫特异性靶标区域设计的扩增条件,包括退火温度、循环次数等关键参数。为了确保实验结果准确可靠,还特别强调了设置阳性对照和阴性对照的重要性。
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....
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- 现行
- 正在执行有效
- 2017-12-29 颁布
- 2018-07-01 实施
文档简介
ICS65020
B16.
中华人民共和国国家标准
GB/T35342—2017
松材线虫分子检测鉴定技术规程
TechnicalregulationformoleculardetectionofBursaphelenchusxylophilus
SteinerandBuhrerNickle
()
2017-12-29发布2018-07-01实施
中华人民共和国国家质量监督检验检疫总局发布
中国国家标准化管理委员会
GB/T35342—2017
前言
本标准按照给出的规则起草
GB/T1.1—2009。
本标准由全国植物检疫标准化技术委员会提出并归口
(SAC/TC271)。
本标准起草单位南京林业大学中国检验检疫科学研究院
:、。
本标准主要起草人叶建仁吴小芹陈凤毛葛建军黄麟孙波
:、、、、、。
Ⅰ
GB/T35342—2017
引言
本文件的发布机构提请注意声明符合本文件时可能涉及和中有关松材线虫分子检
,,5.1.25.3.2
测引物的相关专利的使用
。
本文件的发布机构对于该专利的真实性有效性和范围无任何立场
、。
该专利持有人已向本文件的发布机构保证他愿意同任何申请人在合理且无歧视的条款和条件下
,,
就专利授权许可进行谈判该专利持有人的声明已在本文件的发布机构备案相关信息可以通过以下
。。
联系方式获得
:
专利持有人姓名叶建仁
:
地址南京市龙蟠路号南京林业大学
:159,(210037)
请注意除上述专利外本文件的某些内容仍可能涉及专利本文件的发布机构不承担识别这些专
,。
利的责任
。
Ⅱ
GB/T35342—2017
松材线虫分子检测鉴定技术规程
1范围
本标准规定了松材线虫分子检测鉴定的技术规程
。
本标准适用于进出境植物检疫国内植物检疫以及林业有害生物调查中松材线虫及其寄主植物和
、
制品携带松材线虫的分子检测鉴定工作
。
2术语和定义
下列术语和定义适用于本文件
。
21
.
松材线虫pinewoodnematodeBursaphelenchusxylophilusSteineretBuhrerNickle
[()]
一种无脊椎动物属于线虫门侧尾腺纲滑刃目滑刃
,(Nematoda)、(Secernentea)、(Aphelenchida)、
总科滑刃科伞滑刃亚科伞滑刃属
(Aphelenchoidoidea)、(Aphelenchoididae)、(Bursaphelenchinae)、
Bursahelenchus的植物寄生线虫
(p)。
22
.
松材线虫病pinewiltdiseasecausedbypinewoodnematode
又名松树萎蔫病是由松材线虫寄生在松树体内所引起的一种松树毁灭性森林病害
,。
23
.
分子检测moleculardetection
以功能基因核糖体等区域为靶标采用分子生物学的方法在基因水平上对物种进行鉴定
、ITS,。
24
.
寄主植物及其制品pinewoodandwoodproducts
松材线虫寄主植物及其原木锯材和用于承载包装铺垫支撑加固货物的木质材料如木板箱
、、、、、,、
木条箱木托盘木框木桶木轴木楔垫木枕木和衬木等经人工合成或经加热加压等深度加工的
、、、、、、、。、
包装木质材料如胶合板纤维板等除外
,、。
25
.
引物primer
一段短核苷酸序列其功能是作为核苷酸聚合作用的起始点在聚合反应时引导合成一条与模板
。,,
互补的的序列
DNA。
26
.
TaqMan探针TaqManprobe
一段寡核苷酸序列两端分别标记一个报告荧光基团和一个淬灭荧光基团探针完整时报告基团
,。,
发射的荧光信号被淬灭基团吸收扩增时酶的外切酶活性将探针酶切降解使报告荧光
;PCR,Taq5'-3',
基团和淬灭荧光基团分离从而荧光监测系统可接收到荧光信号即每扩增一条链就有一个荧
,,DNA,
光分子形成荧光信号与扩增的拷贝数具有一一对应的关系
,。
27
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