标准解读
《GB/T 34265-2017 Sanger法测序技术指南》是针对Sanger测序方法的应用和实施提供指导的国家标准。该标准详细介绍了Sanger测序的基本原理、实验操作流程以及质量控制要求，适用于使用Sanger测序技术进行DNA序列分析的研究机构和技术服务单位。
根据标准内容，Sanger测序是一种基于双脱氧核苷酸终止反应的经典DNA测序技术。它通过在体外合成过程中随机引入ddNTP（双脱氧核糖核苷三磷酸）来终止DNA链的增长，从而生成一系列长度不同的DNA片段。这些片段经过电泳分离后，可通过特定标记物识别其末端碱基类型，进而推断出原始DNA模板的序列信息。
标准中还明确了Sanger测序实验所需的主要试剂与设备，包括但不限于PCR扩增仪、自动测序仪、各种酶类及化学试剂等，并对如何正确选择引物设计软件提出了建议。此外，对于样品准备阶段的操作步骤也做了详尽说明，比如DNA提取纯化的方法选择、定量检测的重要性以及如何优化PCR扩增条件等。
关于数据处理方面，《GB/T 34265-2017》强调了序列读长、准确度和可重复性的关键指标，并给出了相应的评估方法。同时，该文件还讨论了可能出现的问题及其解决策略，如背景噪声干扰、假阳性结果产生原因等，并提供了故障排除指南。
最后，标准特别指出，在整个Sanger测序过程中必须严格遵守实验室安全规范和个人防护措施，确保操作环境符合生物安全要求。
如需获取更多详尽信息，请直接参考下方经官方授权发布的权威标准文档。
....
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- 现行
- 正在执行有效
- 2017-09-07 颁布
- 2018-04-01 实施
文档简介
ICS07080
A40.
中华人民共和国国家标准
GB/T34265—2017
Sanger法测序技术指南
GuideforthemethodofSangersequencing
2017-09-07发布2018-04-01实施
中华人民共和国国家质量监督检验检疫总局发布
中国国家标准化管理委员会
GB/T34265—2017
目次
前言
…………………………Ⅰ
引言
…………………………Ⅱ
范围
1………………………1
规范性引用文件
2…………………………1
术语和定义
3………………1
缩略语
4……………………2
原理
5………………………2
主要仪器设备
6、……………2
法基因测序指标
7Sanger…………………3
法基因测序方法
8Sanger…………………4
法基因测序的应用
9Sanger………………5
附录资料性附录法测序原理示意图
A()Sanger………6
附录资料性附录试剂及溶液配制
B()…………………7
附录资料性附录测序反应体系的配制
C()……………8
附录资料性附录扩增程序
D()…………9
附录资料性附录待测序产物纯化
E()…………………10
参考文献
……………………11
GB/T34265—2017
前言
本标准按照给出的规则起草
GB/T1.1—2009。
本标准由全国生化检测标准化技术委员会提出并归口
(SAC/TC387)。
本标准起草单位深圳华因康基因科技有限公司深圳市华因康高通量生物技术研究院广州康昕
:、、
瑞基因健康科技有限公司武汉康昕瑞基因健康科技有限公司中国测试技术研究院上海交通大学医
、、、
学院附属瑞金医院国家人类基因组南方研究中心中国计量科学研究院中山大学肿瘤防治中心
、、、。
本标准主要起草人盛司潼谭辉彪李花曾涛杨杰斌周李华张俊王升跃全灿陈功
:、、、、、、、、、。
Ⅰ
GB/T34265—2017
引言
基因测序方法是基因科技产业链的核心技术其发展状况直接关系到生物产业的发展状况对生物
,,
学癌症攻克遗传学医药研制药效分析农业新能源国家民族战略安全和人类生命健康安全具有
、、、、、、、
至关重要的支撑作用
。
基因测序技术在全球的发展非常迅速目前实际应用最广泛的是测序方法它是超高精度
,Sanger,
测序的黄金标准是迄今为止唯一既能用于人类基因组提供从头测序又能用于从头组装的技术将
,,。
测序方法标准化并加以推广应用生物企业乃至整个国内行业就会获得一个绝好的技术规范和
Sanger,
保护自我发展的壁垒推动整个行业产业链的发展提升整个行业的技术实力早日实现测序
,,。Sanger
方法的标准化将对我国基因生物检测产业这一战略性新兴产业的发展起到至关重要的促进作用为
,。
了使测序方法更加规范有效发挥其重要的科技支撑作用有必要对其制定标准
Sanger,,。
由于测序方法并非单一技术涉及到不同技术领域的结合包括生物化学机械数据处理
Sanger,,、、、
等因此本标准仅对法基因测序的术语技术指标以及所涉及的仪器设备试剂方法进行说明
,Sanger、,、、
和规定
。
Ⅱ
GB/T34265—2017
Sanger法测序技术指南
1范围
本标准规定了测序方法的术语和定义缩略语原理主要仪器设备法基因测序
Sanger、、、、、Sanger
指标法基因测序方法法基因测序的应用
、Sanger、Sanger。
本标准适用于对动物组织植物组织血液口腔黏膜毛发粪便土壤微生物等生物样品中的
、、、、、、、
通过测序方法进行测序
DNASanger。
2规范性引用文件
下列文件对于本文件的应用是必不可少的凡是注日期的引用文件仅注日期的版本适用于本文
。,
件凡是不注日期的引用文件其最新版本包括所有的修改单适用于本文件
。,()。
分析实验室用水规格和试验方法
GB/T6682
3术语和定义
下列术语和定义适用于本文件
。
31
.
基因测序genesequencing
对核酸分子的核苷酸排列顺序的测定即测定组成核酸分子的腺嘌呤鸟嘌呤胞嘧啶
,(A)、(G)、(C)
和胸腺嘧啶或者是尿嘧啶的排列顺序
(T)(U)。
定义
[GB/T30989—2014,3.18]
32
.
Sanger测序方法methodofSangersequencing
用于基因测序的双脱氧链末端终止法在链延伸过程中利用荧光标记双脱氧碱基随机阻断产生以
,,
结束的四组不同长度的核苷酸链
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