动物繁殖学实验指导

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动物繁殖学学实验实实习指导导

莱阳农学院院动物科科技学院院

2004年年1月

动物繁殖学学实验实实习指导导

实验一

动动物生殖殖器官的的观察实验二

动动物睾丸丸、卵巢巢及附性性器官的的组织学学观察实验三

PPMSGG或FSSH的生生物测定定法实验四

精精液品质质常规检检查及理理化因素素的影响响实验五

精精子数量量计算和和畸形率率的测定定实验六

精精子顶体体完整率率的测定定实验七

人人工授精精器械的的认识及及假阴道道的准备备实验八

动动物精液液的冷冻冻操作实验九

动动物的发发情鉴定定实验十

母母牛的直直肠检查查实验十一

动物物的采精精与输精精实验十二

动物物的胚胎胎观察与与鉴定实验十三

牛、羊羊的胚胎胎移植实验十四

卵母母细胞体体外培养养与体外外受精

实验一

动物生生殖器官官的观察察

一、实验目目的认识各种动动物生殖殖器官的的形态、大大小，及及其特点点，为生生殖器官官的直肠肠检查、阴阴道检查查、妊娠娠诊断及及人工授授精等操操作奠定定基础。二、实验材材料1、各种雄雄性动物物生殖器器官标本本、模型型及挂图图2、各种雌雌性动物物活体及及生殖器器官标本本、模型型及挂图图。3、解剖刀刀、剪刀刀、镊子子、卷尺尺、搪瓷瓷盘。4、腹腔镜镜：主件件（观察察镜、变变压器、光光源、光光缆），附附件（套套管针、探探针、照照相设备备、监视视系统、手手术器械械、送气气设备、抽抽吸装置置）。三、实验内内容（一）雄性性动物生生殖器官官1、观察各各种动物物睾丸和和附睾的的形状、相相对位置置和大体体构造。睾丸均为长长卵圆形形，牛、羊羊、猪的的睾丸相相对较大大，尤其其是羊的的最大。马马睾丸的的纵轴方方向与地地面平行行；附睾睾位于睾睾丸的背背外缘，头头端在前前、尾端端在后。牛牛、羊睾睾丸的方方向与地地面垂直直；其附附睾位于于后缘，头头端在上上，尾端端在下。猪猪睾丸的的方向呈呈前低后后高倾斜斜，位于于股部之之后；附附睾位于于睾丸的的前上缘缘，头端端在下，尾尾端在上上。2、副性腺腺：比较较各种动动物副性性腺的大大小、形形状、位位置及内内部构造造。①精囊腺：：成对位位于膀胱胱颈背面面的两旁旁，输卵卵管的末末端两侧侧。马的精囊腺腺为长圆圆形囊状状，牛、羊羊和猪的的精囊腺腺都是由由紧密的的腺体组组织所构构成，猪猪的特别别发达。②前列腺：：位于膀膀胱颈尿尿道开始始处精囊囊腺之后后。马的前列腺腺，由两两个侧叶叶和一个个峡所构构成，形形似蝴蝶蝶。牛和和猪的前前列腺分分为体部部和弥散散部两部部分，羊羊的前列列腺最不不发达，只只有弥散散部。③尿道球腺腺：位于于骨盆出出口附近近的尿道道两旁，各各有一个个排出管管开口于于尿道内内。猪的尿道球球腺最为为发达，呈呈圆柱状状，上面面覆盖的的尿道肌肌很薄。其其它家畜畜的呈球球状，上上面覆盖盖的尿道道肌较厚厚。在尿尿生殖道道骨盆部部的腹面面中线上上作纵切切口，观观察尿道道上壁的的精阜，上上有射精精孔。前前列腺的的开口在在两侧，尿尿道球腺腺的开口口在其后后方。3、阴茎和和龟头：：阴茎由由白膜内内的两个个阴茎海海绵体和和其腹面面的尿道道海绵体体组成，为为阴茎的的勃起组组织。马马的阴茎茎长而粗粗大，龟龟头窝内内有尿道道突，牛牛的阴茎茎在阴囊囊之后形形成一“S”状弯曲曲。羊的的阴茎比比牛的细细小，尿尿道突细细而长，绵绵羊的较较长，山山羊的较较短。猪猪的阴茎茎“S”状弯曲曲在阴囊囊之前，龟龟头呈螺螺旋状。（二）雌性性动物生生殖器官官雌性动物可可以观察察生殖器器官的标标本、模模型及挂挂图，也也可以采采用腹腔腔镜法进进行活体体观察。1、生殖器器官的组组成及位位置雌性动物的的生物器器官包括括：卵巢巢、输卵卵管、子子宫、阴阴道、尿尿生殖前前庭、阴阴唇和阴阴蒂。前前四部分分称为内内生殖器器官，后后三部分分称为外外生殖器器官，也也称外阴阴部。雌性动物的的整个生生殖器官官都位于于骨盆腔腔和骨盆盆腔前方方的腹腔腔内，上上面为直直肠和小小结肠，下下面是膀膀胱。2、卵巢①观察未孕孕动物性性周期各各时期卵卵巢的外外形并测测量其体体积。②作卵巢的的水平切切面，观观察其内内部构造造。马的卵巢：：为豆形形，体积积如鸽蛋蛋大，成成熟后卵卵巢的一一边（自自由边）内内陷形成成排卵窝窝，朝向向内侧的的输卵管管伞。发发情周期期的不同同时期马马卵巢的的直径大大小不等等。牛的卵巢：：为椭圆圆形，没没有排卵卵窝，如如青枣大大，排卵卵以后多多不形成成红体，黄黄体往往往凸出于于卵巢表表面。其其位置在在两侧子子宫角尖尖端的外外侧下方方。羊的卵巢：：比牛的的圆，体体积也小小，其他他特点同同牛。猪的卵巢：：有很发发达的卵卵巢囊，卵卵巢和输输卵管伞伞有时被被包在卵卵巢囊内内，其形形状随机机体成熟熟的程度度而有不不同。幼幼小母猪猪卵巢的的形状极极似肾脏脏，接近近性成熟熟时为桑桑椹形，达达到性成成熟时似似串状葡葡萄。3、输卵管管观察输卵管管的形状状及其与与卵巢、子子宫角的的关系。马的输卵管管有很多多弯曲，伞伞较发达达。牛、羊的输输卵管弯弯曲较少少，伞不不发达。猪的输卵管管有许多多小弯曲曲，输卵卵管伞最最发达。其其伞的开开口接近近卵巢囊囊的底部部。各种动物输输卵管的的子宫端端均与子子宫角尖尖端相连连，马及及猪的输输卵管与与子宫角角之间具具有明显显界限，牛牛、羊的的则不明明显。4、子宫①观察子宫宫角和子子宫体的的形状、粗粗细、长长度及粘粘膜上的的特点（沿沿子宫大大弯切开开）；②观察子宫宫颈的粗粗细、长长度及其其构造特特点；③沿阴道上上面纵切切，观察察阴道和和子宫颈颈及前庭庭的关系系。马：其整个个子宫呈呈“丫”形，子子宫角为为扁带状状。小弯弯在上，大大弯在下下，子宫宫颈外口口突入阴阴道，子子宫颈的的肌肉层层比较薄薄，管道道比较粗粗。牛、羊：其其子宫角角的形状状如同弯弯曲的绵绵羊角，大大弯向上上，小弯弯向下，子子宫粘膜膜上有子子宫阜，且且羊子宫宫阜的中中央有一一个小的的凹陷。牛牛、羊子子宫颈的的肌肉层层发达，坚坚硬，管管道细且且有大而而厚的皱皱襞，子子宫颈外外口突出出于阴道道，但较较马的短短，似菜菜花样。猪：其子宫宫角长而而有许多多弯曲，子子宫颈与与子宫体体、阴道道都没有有明显的的界限，子子宫颈管管的粘膜膜上有两两排交错错的突起起。5、阴道是是由阴道道穹窿至至处女膜膜（阴道道外口）的的管道部部分。6、外生殖殖器官：：包括尿尿生殖前前庭、阴阴唇及阴阴蒂。①尿生殖前前庭：由由处女膜膜至阴门门的部分分。②阴唇及阴阴蒂是雌雌性动物物生殖道道的最后后一部分分。实验二

动物睾睾丸、卵卵巢及其其他性器器官的组组织学观观察

一、目的要要求：通过对雄性性动物睾睾丸和雌雌性动物物卵巢、子子宫、输输卵管组组织切片片的观察察，了解解睾丸、卵卵巢、子子宫、输输卵管的的组织结结构及其其形态。了了解精子子的发生生过程，卵卵子的发发生、卵卵泡的发发育过程程及其形形态。二、实验材材料：1、显微镜镜。2、动物睾睾丸、卵卵巢、子子宫、输输卵管的的标本及及组织切切片。3、动物睾睾丸、卵卵巢、子子宫、输输卵管的的组织图图片（幻幻灯片）。三、实验内内容：（一）雄性性动物睾睾丸的组组织学观观察：1、低倍镜镜观察：：（1）被膜膜：由浆浆膜和白白膜构成成。外层层膜为一一层较薄薄的固有有鞘膜，内内层白膜膜为较厚厚的致密密结缔组组织构成成。（2）纵隔隔和中隔隔：纵隔隔为由睾睾丸的一一端伸向向睾丸实实质的结结缔组织织索，并并向四周周发出许许多放射射状的结结缔组织织小梁直直达白膜膜，形成成中隔。（3）小叶叶：由中中隔将睾睾丸实质质分成许许多基部部向外，顶顶端向内内的锥形形小叶，每每个小叶叶由2--3条盘盘曲的精精细管组组成。精精细管之之间有疏疏松的结结缔组织织，内含含有血管管和间质质细胞。（4）附睾睾：由精精细管汇汇合成的的直精细细管，穿穿入睾丸丸纵隔的的结缔组组织，形形成弯曲曲的睾丸丸网，睾睾丸网又又分出110-220条睾睾丸输出出管形成成附睾，附附睾头也也由结缔缔组织分分成若干干附睾小小叶，各各附睾小小叶的管管子汇成成附睾管管，经附附睾体，附附睾尾最最后过渡渡为输精精管。2、高倍镜镜观察：：从睾丸丸小叶中中仔细观观察精细细管及间间质细胞胞的结构构和形态态。精细细管的管管壁的外外向由结结缔组织织、基膜膜和复层层的生殖殖上皮构构成。生生殖上皮皮又由生生精细胞胞和支持持细胞组组成。仔仔细观察察精子发发生周期期中主要要阶段和和支持细细胞形态态：（1）支持持细胞：：又称足足细胞和和塞托利利氏细胞胞。为高高柱状或或锥状细细胞。从从基膜一一直伸达达精细管管的管腔腔，该细细胞高低低不等，界界限不清清，细胞胞核较大大位于细细胞基部部，着色色浅，核核仁明显显。支持持细胞的的游离端端常嵌含含有许多多精子，其其侧面嵌嵌含各个个发育阶阶段的生生精细胞胞，并对对生精细细胞起支支持、营营养、保保护、促促使其发发育的作作用。（2）精原原细胞：：是精子子形成过过程的干干细胞，位位于基膜膜，细胞胞为多边边形或圆圆形，核核大而圆圆，染色色较深。仔仔细观察察A、BB、中间间型三类类。（3）初级级精母细细胞：由由精原细细胞分裂裂而成，位位于精原原细胞内内侧，排排列成几几层，细细胞呈圆圆形，体体积较大大，着色色深，经经第一次次成熟分分裂形成成二个次次级精母母细胞。（4）次级级精母细细胞：由由初级精精母细胞胞分裂而而成，位位于初级级精母细细胞内侧侧，细胞胞体积较较小，呈呈圆形，细细胞核为为球形，染染色质呈呈细粒状状，不见见核仁，由由于其存存在时间间很短，很很快经过过第二次次成熟分分裂成为为二个精精子细胞胞，因而而在切片片上很难难找到。（5）精子子细胞：：由次级级精母细细胞分裂裂而成，位位于精母母细胞内内侧，靠靠近细管管的管腔腔，排成成数层，细细胞呈圆圆形，体体积更小小，核小小呈球状状，染色色深，核核仁清晰晰。精子子细胞不不再分裂裂，在支支持细胞胞顶部经经过变态态过程成成为精子子。（6）精子子：由精精子细胞胞变态形形成，位位于精细细管的管管腔内，刚刚形成的的精子头头部常深深入支持持细胞游游离端，尾尾部朝管管腔，随随着精子子发育成成熟，便便脱离支支持细胞胞，游离离在管腔腔内，精精子分头头、颈、尾尾三部分分，形似似蝌蚪，头头部多呈呈扁卵圆圆形，染染色深。（7）附睾睾管：管管壁由环环形平滑滑肌纤维维和假复复层柱状状纤毛细细胞和基基底细胞胞组成，柱柱状细胞胞有分泌泌作用，基基底细胞胞紧贴基基膜，外外形为圆圆形或卵卵圆形，染染色较浅浅，核呈呈球形，精精子在附附睾管内内借助分分泌液，纤纤毛运动动和管壁壁蠕动来来运行。（二）雌性性动物卵卵巢的组组织学观观察：卵巢的组织织由被膜膜、皮质质和髓质质组成。1、低倍镜镜观察：：（1）被膜膜：卵巢巢表面由由特殊的的生殖上上皮被覆覆，生殖殖上皮多多为单层层立方形形细胞组组成。生生殖上皮皮下面有有一层致致密结缔缔组织形形成的白白膜。（2）皮质质：位于于卵巢的的外周，占占大部分分，与髓髓质无明明显界限限，由许许多不同同发育期期的卵泡泡和少量量黄体等等组成。（3）髓质质：位于于卵巢的的中央（马马属动物物例外），由由富有弹弹性纤维维的疏松松结缔组组织构成成。内有有大量的的血管、淋淋巴管和和少量平平滑肌纤纤维。2、高倍镜镜观察：：主要观观察卵巢巢皮质部部不同发发育阶段段的卵泡泡，每个个卵泡都都由位于于中央的的卵母细细胞和围围绕在卵卵母细胞胞周围的的卵泡细细胞组成成。（1）原始始卵泡：：位于生生殖上皮皮层内，中中间为一一卵原细细胞，周周围由一一层扁平平卵泡细细胞所围围绕。（2）初级级卵泡：：卵泡呈呈球形，卵卵原细胞胞位于卵卵泡中央央，周围围包有一一层立方方或柱状状的卵泡泡细胞。卵卵原细胞胞的体积积较大，中中央有个个圆形的的泡状核核，核内内染色质质较少，着着色较浅浅，核仁仁明显。（3）次级级卵泡：：其主要要变化是是卵原细细胞体积积增大，卵卵母细胞胞和颗粒粒细胞共共同分泌泌出粘多多糖，聚聚集在颗颗粒细胞胞与卵黄黄膜之间间形成透透明带。（4）三级级卵泡：：出现小小的卵泡泡腔，随随着卵泡泡的生长长，许多多小腔合合并为一一个大的的卵泡腔腔；卵母母细胞被被挤向一一边，并并包裹在在一团颗颗粒细胞胞中，形形成半岛岛突出在在卵泡腔腔内，称称卵丘；；在颗粒粒层外周周形成两两层卵泡泡膜；卵卵的透明明带周围围的柱状状上皮细细胞呈放放射状排排列，称称为放射射冠，放放射冠细细胞有微微绒毛，并并伸入透透明带内内。（5）成熟熟卵泡：：三级卵卵泡继续续生长，卵卵泡液增增多，卵卵泡腔增增大，卵卵泡扩展展到整个个皮质部部而突出出卵巢表表面。（6）黄体体：是排排卵后的的卵泡转转变成的的富于血血管的内内分泌器器官，牛牛、羊、猪猪的黄体体位于卵卵巢皮质质，突出出于卵巢巢表面，马马的黄体体则完全全埋藏在在卵巢基基质内。黄黄体由颗颗粒黄体体细胞和和泡膜黄黄体细胞胞组成，颗颗粒黄体体细胞占占多数，大大部分位位于黄体体中间，细细胞呈多多面体，着着色浅，排排列紧密密，含有有球形细细胞核；；泡膜黄黄体细胞胞则小，大大部分位位于黄体体外周，包包在颗粒粒黄体细细胞外周周或位于于其之间间，核占占胞体的的大部分分，核与与胞质染染色较深深。（7）闭锁锁卵泡：：卵巢内内在各个个发育阶阶段逐渐渐退化的的卵泡叫叫闭锁卵卵泡，即即退化的的卵母细细胞存在在于未破破裂的卵卵泡中，可可观察到到萎缩的的卵母细细胞和膨膨胀塌陷陷的透明明带。（三）雌性性动物子子宫、输输卵管的的组织学学观察：：1．子宫子宫的组织织构造从从外向里里为浆膜膜、肌层层和粘膜膜。肌肉肉层的外外层薄，为为纵行的的肌纤维维；内层层厚，为为螺旋形形的环状状肌纤维维。子宫宫颈肌可可看作子子宫肌的的附着点点，同时时也是子子宫的括括约肌，其其内层特特别厚，且且有致密密的胶原原纤维和和弹性纤纤维，是是子宫颈颈皱襞的的主要构构成部分分，内外外两层交交界处有有交错的的肌束和和血管网网，固有有层含有有子宫腺腺，子宫宫腺以子子宫角最最发达，子子宫体较较少，子子宫颈则则在皱襞襞之间的的深处有有腺状结结构，其其余部分分为柱状状细胞，能能分泌粘粘液。2．输卵管管输卵管的管管壁组织织结构从从外向内内由浆膜膜、肌层层和粘膜膜组成，肌肌层可分分为内层层环状或或螺旋状状肌束和和外层纵纵行肌束束，其中中混有斜斜行纤维维，使整整个管壁壁能协调调的收缩缩。肌层层从卵巢巢端到子子宫端逐逐渐增厚厚，输卵卵管粘膜膜形成若若干初级级纵襞，在在壶腹部部又分出出许多次次级纵襞襞。输卵卵管上皮皮细胞有有柱状纤纤毛细胞胞和无纤纤毛细胞胞，柱状状纤毛细细胞在输输卵管的的卵巢端端，特别别在伞，越越向子宫宫端越少少，这种种细胞伸伸入管腔腔。

实验三

PMSSG或FFSH的的生物测测定法

一、实验目目的测定PMSSG（或或FSHH）的活活性，掌掌握该激激素的简简易效价价测定方方法。二、实验原原理FSH为垂垂体促性性腺激素素，作用用于即将将达到性性成熟年年龄的雌雌性小白白鼠，可可促进卵卵巢上的的卵泡发发育，分分泌雌激激素。在在雌激素素的作用用下，又又可促进进子宫、卵卵巢及整整个生殖殖器官的的发育、增增大。PPMSGG因为也也含有FFSH，因因此具有有与FSSH相同同的生物物学作用用，也能能促进性性成熟前前的小白白鼠子宫宫发育增增大。PMSG在在机体内内的作用用期比FFSH长长，因此此在测试试效价过过程中，PPMSGG可作一一次注射射，而FFSH需需经多次次注射。三、实验材材料1、实验动动物

健康康无伤残残的188-233日龄（即即将达到到性成熟熟日龄）、体体重9--13gg的同源源雌性小小白鼠。各各测试组组实验鼠鼠出生日日龄相差差不得越越过三天天，体重重相差不不得超过过2g。2、测定样样品

PMMSG（或或FSHH）、生生理盐水水。3、测定器器具

1mml注射射器、44号针头头、0..1mll微量注注射器、11ml和和2mll吸管、吸吸耳球、酒酒精棉球球、剪刀刀、镊子子、搪瓷瓷盘、解解剖板、鼠鼠罐和青青霉素瓶瓶（稀释释瓶）。四、测试方方法1、测试组组的确定定为了测得精精确效价价，应先先将各测测试样品品浓度组组距加大大进行粗粗测，从从而确定定样品的的大致效效价范围围，再将将测试样样品浓度度组距减减少，以以测得样样品较为为精确的的效价，可可按下表表选择确确定测试试组。①PMSGG测试组组的确定定每0.1mmlPMMSG，按按下表加加入不同同量的生生理盐水水，稀释释成不同同浓度作作为各测测试组。PMSG稀稀释浓度度换算小小白鼠单单位每mlPMMSG中中加入生生理盐水水量稀释液中PPMSGG浓度PMSG小小白鼠单单位（MMu/mml）111/1260151/1680191/20100231/24120271/28140311/32160351/36180391/40200431/44220471/48240②FSH测测试组的的确定FSH是瓶瓶装粉剂剂，故在在配制不不同浓度度的测试试组之前前，需用用一定量量的生理理盐水稀稀释成溶溶液，测测出每mml溶液液中的效效价值后后，即可可换算出出该瓶装装内FSSH的效效价值。每每只鼠注注入总剂剂量需分分作五次次注射，每每天注射射两次。在在常温条条件下，稀稀释后的的FSHH容易失失活，效效价降低低。因此此在注射射期间的的FSHH溶液应应在低温温下保存存。在测测试中，每每瓶FSSH准确确取5mml生理理盐水稀稀释作为为母液，于于0-55℃下存放放。用FFSH母母液为小小白鼠作作五次注注射，故故每次注注射剂量量应是总总剂量的的五分之之一。因因此取配配制好的的母液00.2mml加生生理盐水水0.88ml，经经一次稀稀释成工工作液，再再取0..1mll工作液液，按下下表所示示加入不不同量的的生理盐盐水，即即可配制制成不同同浓度的的测试组组。加生理盐水水（mll）溶液量（mml）溶液浓度注射鼠数（只只）母液/只鼠鼠（mll）Mu/mll2.04.81/121/161/201/241/281/361/361/401/441/4855555555551/601/801/10001/12001/14001/16001/18001/20001/22001/24006080100120140160180200200240一瓶装的FFSH经经1mll生理盐盐水稀释释成母液液，可配配制成110个测测试组，为为50只只小白鼠鼠注射。2、小白鼠鼠称重分分组各测试组小小白鼠组组内体重重的差异异不得超超过2gg，将小小白鼠分分为5组组，每组组5只，分分别编号号，其中中一组为为对照组组，注射射同样剂剂量的生生理盐水水。其余余四组为为测试不不同浓度度样品的的测试组组。3、注射将稀释好的的药剂分分别给各各组的小小白鼠腹腹部皮下下注射00.2mml，对对照组注注射生理理盐水，注注意注射射量力求求准确，不不得使药药液注射射胸腔或或腹腔或或逸出体体外。4、剖检于注射药液液后722～766小时，先先用颈椎椎脱臼法法或撞击击头部法法处死小小白鼠，用用图钉将将小白鼠鼠固定于于解剖板板上，用用剪刀剪剪开腹腔腔，将子子宫卵巢巢剥离取取出，观观察子宫宫增大情情况。5、效价确确定将各组子宫宫与对照照组比较较，每组组5只小小白鼠中中有3只只或3只只以上子子宫增大大一倍以以上，则则定为阳阳性反应应。根据据各测试试组中呈呈阳性反反应的最最低浓度度组效价价值，换换算出被被测样品品中PMMSG（或或FSHH）的小小白鼠单单位。假设稀释液液中PMMSG浓浓度为11/x，若若稀释后后浓度在在1/xx以上各各组均呈呈阳性反反应，则则1/xx浓度的的测试组组为呈阳阳性反应应的最低低浓度。实实际注入入鼠体内内的供试试品药液液量为11/x··1/55ml==1/55xmml，则则1mll供试品品药液中中含有的的生物效效价为55x小白白鼠单位位（Muu）。实验四

精液品品质常规规检查及及理化因因素的影影响

一、实验目目的掌握检查精精子密度度、活率率的方法法，熟悉悉肉眼检检查精液液品质的的方法，验验证实验验观察理理化因素素对精子子运动及及生存能能力的影影响。二、实验材材料1、动物：：种公羊羊、母羊羊、种公公牛、母母牛。2、药械用用品：牛牛、羊假假阴道全全套、33%和00.9%%氯化钠钠溶液、浸浸润剂（111份石石蜡油++2份凡凡士林）、温温度计、镊镊子、漏漏斗、玻玻璃棒、大大搪瓷盘盘、热水水、显微微镜、载载玻片、盖盖玻片、乙乙醚、纱纱布、试试管、22%煤酚酚皂液、11/10000新新洁尔灭灭、保温温箱、冰冰、酒精精、美兰兰。3、冻精颗颗粒三、实验内内容（一）精液液的肉眼眼检查

1、射精量量：将采采得的精精液倒入入有刻度度的试管管或杯中中，测其其容量。各各种家畜畜的平均均射精量量为：马马70（330-1100）毫毫升；驴驴50（220-880）毫毫升；牛牛（2--10）毫毫升；羊羊1（00.7--2）毫毫升；猪猪2500（1550-5500）毫毫升。2、观察精精液的色色泽并嗅嗅闻气味味。3、云雾状状的观察察：观察察精液的的云雾状状翻腾滚滚动。按按以下符符号记入入表内，云云雾状显显著者，以以“++++”表示，有有云雾状状以“++”表示；；云雾状状不明显显者以“+”表示。（二）精子子密度检检查及活活率评定定1、检查精精子的密密度：取取一小滴滴精液于于清洁的的载玻片片上，加加上盖玻玻片，使使精液分分散成均均匀一薄薄层，但但不得有有气泡，也也不能使使精液外外流或溢溢于盖玻玻片上，置置显微镜镜下放大大4000-6000倍观观察，按按下列等等级评定定其密度度。密——在整整个视野野中精子子密度很很大，彼彼此间空空隙很小小，看不不清各个个精子运运动的活活动情况况，这一一级属于于“密”，每毫毫升含精精子数约约在100亿以上上。中——精子子之间的的空隙明明显，精精子彼此此之间距距离约有有一个精精子的长长度。有有些精子子的活动动情况可可以清楚楚地看到到。这种种精液的的密度评评为“中”，每毫毫升所含含精子数数约在22-100亿之间间。稀——精子子分散存存在，精精子间的的空隙超超过一个个精子长长度，这这种精液液每毫升升所含精精子在22亿以下下。2、评定精精子的活活率：必必须于采采精后立立刻在118-225℃实验室室中进行行，最好好在377℃保温箱箱内进行行，同时时也可以以测定精精子的密密度。用玻棒蘸取取一滴原原精液或或稀释的的精液（马马、猪精精液密度度低不须须稀释，牛牛、羊密密度大，需需用0..9%氯氯化钠溶溶液稀释释，其温温度相近近），滴滴在载玻玻片上，也也可滴在在载玻片片上翻放放于凹玻玻片的凹凹窝上，最最后置于于显微镜镜下，放放大2550-4400倍倍检查，显显微镜载载物台须须放平。并并最好在在暗视野野中进行行。精子的活动动有三种种类型：：前进运运动、旋旋转运动动和振摆摆运动，评评价精子子活率是是根据前前进运动动精子数数多少而而定。

目前评定精精子活率率等级的的方法有有两种：：十级制———在显微微镜下估估计直线线前进运运动精子子所占百百分数，直直线前进进运动精精子为1100%%者评为为1.00级；990%者者评为00.9级级，依此此类推。五级制———全部精精子呈前前进运动动者属于于“5”级，绝绝大多数数精子（约约80%%）呈前前进运动动者为“4”级，前前进运动动的精子子略多于于半数者者（约660%）为为“3”级；不不及半数数者为“2”级，呈呈前进运运动的精精子数目目极少者者属“1”级。牛及羊的精精液中由由于副性性腺分泌泌物少，要要求“密5”即密度度为“密”，活率率为“5”级及“密4”或“中5”及“中4”一级才才能作为为输精之之用。马马与猪的的精液中中副性腺腺分泌多多，就是是“稀5”甚至“稀3”的亦可可用于输输精。（三）理化化因素对对精子的的影响1、温度的的影响①取采得的的原精液液一滴滴滴在载玻玻片上，放放在显微微镜下观观察其活活率，再再放在445-550℃下2分分钟观察察精子活活率有何何变化。②将新采得得精液立立即检查查其活率率后，随随后即移移入0--5℃温度下下2-33分钟，温温度回升升到377-388℃后再检检查精子子活率，注注意降温温前后精精子活率率变化情情况。2、渗透压压的影响响：观察察原精液液的活率率后，分分别在三三滴原精精液内各各加入11%氯化化钠溶液液、3%%氯化钠钠溶液和和蒸馏水水，观察察其活率率及形态态有何变变化。3、取1--2毫升升经稀释释过的精精液放入入小试管管中，经经检查活活率后，用用手上下下剧烈振振动2--3分钟钟，再观观察精子子活率有有何变化化。4、取1--2毫升升稀释过过的精液液放入小小试管中中，经检检查活率率后，在在太阳光光下照射射10分分钟，观观察精子子活率有有何变化化。5、化学药药品的影影响：取取一滴精精液于载载玻片上上，用滴滴管分别别滴入以以下药液液混合后后复以盖盖玻片。①2%煤酚酚皂液。②1/30000新新洁尔灭灭液。③75%酒酒精。分别观察其其精子活活率及形形态有何何变化。四、作业将本次实验验所测结结果分别别填入下下列表内内。理化因素对对精子活活率影响响记载表表处理前活率评分处理后活率评分37～388℃

40～455℃

降温处理前前

降温处理后后

加入不同浓浓度溶液液前

加入1%NNacll溶液后后加入3%NNacll溶液后后加入蒸馏水水后

振荡前

经剧烈振动动

阳光照射前前

阳光照射后后

加入药液前前

加入2%棉棉酚皂液液加入1/110000新洁尔尔灭溶液液加入75%%酒精后后

4—3

实验五

精子数数量计算算和畸形形率的测测定

一、实验目目的掌握用血球球计数板板检查单单位容积积（毫升升）中所所含精子子数的方方法，以以及测定定精子畸畸形率的的操作要要点。二、实验材材料1、材料：：公牛、公公羊、公公马、公公猪精液液。2、器械及及用品：：显微镜镜、载玻玻片、玻玻棒、00.9%%Naccl溶液液、955%和775%的的酒精、染染色缸、33%盐水水、兰墨墨水、00.5%%龙胆紫紫酒精溶溶液、红红、白血血球稀释释管、血血球计数数板、55ml试试管、血血吸管和和1mll吸管。3、畸形精精子形态态图。三、实验内内容血球计算盘盘构造模模式图。（一）精子子数量计计算1、精液稀稀释：①用1mll吸管吸吸3%NNaCll0..2mll或2mml，放放入小试试管中，（根根据稀释释倍数确确定）用用血吸管管吸出110或220mllNaCCl抛掉掉。②用血吸管管将精液液吸至刻刻度100或200ml处处。③用纱布擦擦去吸管管尖端所所附的精精液。④用拇指按按住试管管口，振振荡2--3分钟钟使其均均匀混合合。2、精子的的计数：：①将擦洗干干净的计计数板放放于显微微镜的载载物台上上，盖上上盖玻片片。②将试管中中稀释好好的精液液滴一滴滴于计数数板盖玻玻片的边边缘使精精液自动动渗进计计数室，注注意不要要使精液液溢出于于盖玻片片处，并并不可使使精液不不够而致致计数室室内有气气泡或干干燥之处处，如有有这些现现象应重重做。③静置3分分钟便可可在4000-6600倍倍的显微微镜下检检查。④数出计数数室的四四角及中中央共五五个大方方格即880个小小方格内内的精子子数。⑤计数每小小格内的的精子，只只数格内内及压在在左线和和上线者者。⑥由五个大大方格（880个小小方格）所所数到的的精子数数代入下下式，即即得出每每毫升的的精子数数：1ml原精精液内的的精子数数=x（55个大方方格内的的精子数数）×5（等等于255个大方方格内的的精子数数）×10（等等于1mmm3内内的精子子数）××10000（等等于1mml被检检稀释精精液样品品内精子子数）××被检精精液稀释释倍数为了减少误误差，必必须进行行两次计计数，如如果前后后两次误误差大于于10%%，应作作第三次次检查。最最后在三三次检查查中取两两次误差差不超过过10%%的，求求出平均均数，即即为所确确定的精精子数。5—2

（二）直线线运动精精子数的的计算（精精子活率率的计算算）方法基本和和精子数数量计算算法相同同，有以以下几点点不同。1、用0..9%生生理盐水水作为稀稀释剂，以以保持正正常活精精子运动动。2、显微镜镜置于保保温箱中中，保持持37--38℃℃。3、计数四四角及中中央五个个方格中中的非直直线运动动精子数数（包括括死精子子，摆动动旋转运运动的精精子），求求出每毫毫升精液液中非直直线运动动的精子子数。5、计算直直线运动动精子的的百分数数（三）测定定精子畸畸形率1、以细玻玻璃棒蘸蘸精液一一滴，滴滴于载玻玻片上一一端，如如果是牛牛羊精液液应再加加1-22滴0..9%氯氯化钠溶溶液。2、以另一一载玻片片的顶端端呈355°角抵于于精液滴滴上，并并向另一一端推去去，将精精液均匀匀涂抹于于载玻片片上。3、将抹片片放于空空气中干干燥。4、用下列列方法中中的任一一方法固固定染色色。①用0.55%的龙龙胆紫酒酒精染色色三分钟钟，水洗洗，待干干后即可可镜检（也也可用由由普通红红蓝墨水水代替）②置95%%酒精中中（或55%福尔尔马林溶溶液）固固定5--6分钟钟，取出出以水冲冲洗后，凉凉干或烘烘干，用用蓝、红红墨水等等染色33-5分分钟，再再用水冲冲洗，干干燥后置置于显微微镜下检检查。5、镜检：：将制好好的抹片片置于显显微镜下下，查数数不同视视野的5500个个精子，计计算出其其中所含含畸形精精子数，求求出畸形形百分率率。四、作业1、列表记记载本次次实习所所得数值值。2、分析所所得数值值和一般般常数的的差异。

实验六

精子顶顶体完整整率的测测定

一、实验目目的1、学习精精液抹片片染色方方法。2、观察正正常精子子顶体和和异常精精子顶体体状态，计计算精子子顶体完完整率。二、实验材材料（一）精液液样品：：液态精液或或解冻精精液。（二）福尔尔马林磷磷酸盐固固定液配配制1、取2..25ggNaHH2POO4·12HH2O和和55ggNaHH2POO4·2H22O于1100mml容量量并加入入0.889%NNaCll溶液约约30mml，在在30℃℃温度下下静置33-4hh使之溶溶解。2、加入经经MgCCO3饱饱和的甲甲醛溶液液8毫升升，其配配制方法法是在5500mml甲醛醛中加入入8gMMgCOO3，须须在一周周前配制制好，使使PH值值由原来来3.884提高高到5..0左右右。3、加0..89%%NaCCl液至至1000ml，静静置244h，PPH值为为7.00-7..2。（三）磷酸酸盐缓冲冲液配制制取2.2ggNa22HPOO4·12HH2O和和0.555gNNaH22PO44·2H22O置于于1000ml容容量瓶中中，加入入约300ml蒸蒸馏水溶溶解后用用蒸馏水水定容至至1000ml，PPH值为为7.00-7..2。（四）姬姆姆萨原液液配制称取姬姆萨萨染料11g，甘甘油666ml，甲甲醇666ml，将将研细的的姬姆萨萨染料加加入少量量温热（660℃）的甘甘油，在在研钵内内研磨直直至完全全无颗粒粒呈匀浆浆而止，再再将剩余余全部甘甘油倒入入置566℃恒温箱箱中2hh，分次次用甲醇醇清洗容容器于棕棕色瓶保保存，二二周后使使用，此此原液放放置时间间越长越越好，使使用前过过滤。（五）姬姆姆萨染液液的配制制根据每个抹抹片需染染液2mml来确确定所需需染液量量，配置置好的染染液需立立即使用用染色，放放置时间间过长会会使染色色效果减减退。姬姆萨染液液的配制制方法为为原染液液、缓冲冲液、蒸蒸馏水的的比例为为2：33：5。（六）苏木木精———伊红染染液的配配制1.苏木精精染液2.伊红染染液：00.5%%伊红溶溶液（七）生物物显微镜镜（10000××油镜）（八）血球球计数板板（九）载玻玻片、盖盖玻片、滴滴管、红红布、染染色缸、染染色架、玻玻片镊

三、实验内内容（一）抹片片将需测定精精液样品品摇匀，在在精液的的中层用用吸管吸吸取一小小滴精液液，平滴滴在载玻玻片的右右端，取取另一边边缘光滑滑平直的的载玻片片呈355°角自精精液滴的的左面向向右接触触样品，样样品精液液即呈条条状分布布在两个个载玻片片接触边边缘之间间，将上上面的载载玻片贴贴着平置置的载玻玻片表面面自右向向左移动动，带着着精液滴滴均匀地地涂抹在在载玻片片上，切切忌将精精液滴“推”过去，否否则易造造成精子子的人为为损伤，制制作另一一抹片时时，须重重新换取取载玻片片，在抹抹片的右右端背面面用特种种铅笔注注明标号号，每份份精液样样品须同同时制作作两个抹抹片。（二）风干干自然干燥55-200分钟后后即固定定染色，不不可久置置。（三）固定定将风干抹片片平置于于染色架架上，用用滴管吸吸取1--2mll福尔马马林磷酸酸盐缓冲冲固定液液，滴在在抹片上上，轻轻轻摇动，使使固定液液布满在在整个抹抹片表面面，静置置固定115分钟钟。（四）水洗洗用玻片镊夹夹住抹片片一端，将将固定液液弃至染染色缸内内，在蒸蒸馏水缸缸中涮洗洗，取出出立于瓷瓷盘边待待干。（五）染色色将经固定风风干后的的抹片平平置于染染色架上上，选用用下列任任意一种种染色液液进行染染色。1、用滴管管吸取新新配制的的姬姆萨萨染色液液2mll，自左左向右滴滴在涂片片上，使使染液均均匀布满满抹片上上，静置置染色990分钟钟。2、取苏木木精染液液，滴于于风干后后的抹片片上，静静置155分钟，用用蒸馏水水洗去染染色液体体，待其其自然风风干后，再再用0..5%伊伊红复染染液滴于于经苏木木精初染染的抹片片上复染染2-33分钟。（六）水洗洗用（四）的的方法水水洗除去去抹片上上的染色色体液，每每张抹片片经数次次涮洗，直直至水洗洗液无色色为止，风风干待镜镜检观察察。（七）精子子顶体的的观察将精液样品品抹片置置于10000倍倍生物显显微镜下下用油镜镜头观察察或者用用相差显显微镜（110×40×1.225倍）观观察。用用姬姆萨萨液染色色时，精精子的顶顶体呈紫紫色，而而用苏木木精———伊红液液染色时时，精子子的细胞胞膜呈黑黑色，顶顶体和核核染成紫紫红色。按照精子形形态，细细胞膜及及顶体的的完整与与否，将将精子顶顶体状态态分为四四种类型型。1、顶体完完整型：：精子头头部外形形正常，细细胞膜和和顶体完完整、着着色均匀匀、顶脊脊、赤道道段清晰晰。2、顶体膨膨变型：：顶体着着色均匀匀，但头头部边缘缘不整齐齐呈畸形形，核前前细胞膜膜不明显显或部分分缺损。3、顶体破破损型：：顶体着着色不均均匀，顶顶体脱离离细胞核核，形成成缺口或或陷凹。4、顶体全全脱型：：赤道段段以前的的细胞膜膜缺损，顶顶体已全全部脱离离细胞核核。

（八）计算算在每张抹片片上观察察3000个精子子，并统统计出顶顶体完整整型精子子数。精子顶体完完整率（%%）=要求每张抹抹片精子子顶体完完整率差差异不超超过155%，求求出二张张抹片平平均顶体体完整率率，即为为样品精精液的顶顶体完整整率。四、作业将试验结果果填入下下表畜种（号）：：

精液类类型：

精精液活率率：

抹片号顶体完整型型（个）异常顶体类类型（个个）顶体完整率率（%）平均顶体完整率（%%）顶体膨变型型顶体破损型型顶体全脱型型1

2

实验七

人工授授精器械械的认识识及假阴阴道的准准备

一、实验目目的认识各种家家畜人工工授精所所用的器器械，了了解其构构造、用用途和使使用方法法，初步步掌握假假阴道的的安装方方法。二、实验材材料1、各种家家畜的采采精器械械。2、各种家家畜的输输精器械械。三、实验内内容（一）各种种家畜采采精器械械的认识识各种家畜的的采精器器械主要要是假阴阴道，由由外壳、内内胎、集集精杯33部分组组成。各各种家畜畜的假阴阴道分别别介绍如如下：马：其假阴阴道外壳壳是由镀镀锌铁皮皮制成的的圆筒，外外形似大大暖瓶，筒筒体中部部有把手手，便于于采精时时把握，侧侧面有注注水孔，可可塞进带带气嘴的的橡皮塞塞子，由由此灌水水和充气气。内胎胎是由优优质橡胶胶制成长长筒，装装于外壳壳内，两两端翻卷卷固定在在外壳内内，集精精杯为短短圆状的的黑色橡橡皮杯，套套在外壳壳的小端端。牛：其假阴阴道有美美式、苏苏式两种种，外壳壳是由硬硬橡胶或或塑料制制成的圆圆筒，中中部有注注水孔，塞塞有带气气嘴的橡橡皮塞，灌灌水和充充气用，内内胎同马马；集精精杯有二二种：一一种是棕棕色的双双层集精精杯，夹夹层可盛盛37℃℃以下温温水以保保护精液液；另一一种是在在橡皮漏漏斗上接接上一个个玻璃管管或离心心管。羊：其假阴阴道构造造基本与与牛相同同，只是是较小，集集精杯是是棕色的的双层杯杯。猪：其假阴阴道构造造基本与与牛、羊羊相同，只只是较牛牛的短，比比羊的粗粗，集精精杯为有有色的广广口玻璃璃瓶，容容量为3350--5000ml。在在生产实实践中，猪猪采精通通常用手手握法，须须医用乳乳胶手套套和一个个保温杯杯即可。（二）各种种家畜输输精器械械的认识识各种家畜的的输精器器械为开开张器，输输精器和和照明灯灯。开张器有二二种：一一种是金金属的鸭鸭嘴式开开张型的的，一种种是玻璃璃或塑料料的圆筒筒式的，各各种家畜畜的开张张器只是是大小有有别。输精器有玻玻璃、金金属、塑塑料、橡橡皮制成成的。马马、猪的的输精器器，为一一端尖细细的优质质橡皮管管，其大大小不一一，它的的一端接接注射器器。牛、羊羊的输精精器有玻玻璃和金金属两种种，其中中大小不不一，牛牛采用直直肠把握握法输精精多用金金属输精精器。细细管冷冻冻精液，有有专用的的金属细细管输精精枪———卡苏枪枪。照明灯：可可用手电电筒、头头灯，最最实用的的为固定定在开张张器或输输精器上上的照明明灯。（三）假阴阴道的安安装安装前的准准备首先检查：：（1）外壳壳有无裂裂缝或小小孔。（2）内胎胎是否漏漏气，边边缘是否否裂口。（3）气门门活塞是是否有裂裂口漏气气，开关关是否灵灵活。2、安装方方法（1）内胎胎光滑面面朝内腔腔装入外外壳，两两端翻卷卷于外壳壳两端，不不得扭转转，中轴轴与外壳壳重合呈呈同心圆圆位置，并并用橡皮皮圈固定定两端。（2）由外外壳的注注水孔注注入455～555℃的温水水，使采采精时的的温度为为38～～42℃℃，水量量为外壳壳内胎之之间容积积的1//3～11/2。（3）装上上气门活活塞，于于一端装装上集精精杯和保保护套。（4）用玻玻璃棒涂涂布润滑滑剂凡士士林或石石蜡油。由由内向外外均匀涂涂布，深深度不超超过1//2。（5）打开开开关充充气，使使内胎呈呈“Y”形。（6）用温温度计插插入假阴阴道，测测量温度度为388～422℃，准备备采精。四、作业试述牛假阴阴道的组组成及安安装方法法。

实验八

动物精精液的冷冷冻技术术操作

一、实验目目的了解精液冷冷冻保存存技术的的操作过过程，基基本掌握握冷冻精精液的制制作技术术。二、实验材材料1、牛、猪猪精液。2、药品：：葡萄糖糖、蔗糖糖、柠檬檬酸钠、氨氨基乙酸酸、三羟羟基甲基基氨基甲甲烷、甘甘油、鸡鸡蛋、青青霉素、链链霉素。3、器具：：液氮罐罐、保温温瓶、温温度计、镊镊子、铝铝饭盒、氟氟板、铜铜纱网、滴滴管、细细管、封封口粉、烧烧杯、量量筒、三三角烧瓶瓶、瓷盘盘、纱布布、棉花花、显微微镜、显显微镜保保温箱、载载玻片、盖盖玻片、天天平、滤滤纸、玻玻璃球、磁磁力搅拌拌器。三、实验内内容（一）公牛牛精液的的冷冻：：1、稀释液液的配制制稀释液配方方：122%蔗糖糖溶液775mll，卵黄黄20mml，甘甘油5mml，青青霉素5500--10000单位位/mll，链霉霉素5000-110000μg/mml。首先配制112%蔗蔗糖溶液液，过滤滤后在水水浴中煮煮沸消毒毒15分分钟，待待凉后按按比例加加卵黄、甘甘油和青青链霉素素，用磁磁力搅拌拌器或玻玻璃棒充充分搅匀匀。2、解冻液液的配制制解冻液配方方：柠檬檬酸钠22.9((g)，蒸蒸馏水1100mml，配配好后过过滤，煮煮沸消毒毒。3、颗粒法法与细管管法（见见流程图图）（二）公猪猪精液的的冷冻1、稀释液液配制稀释液配方方：122%蔗糖糖溶液

755ml

氨氨基乙酸酸

0..5g

柠檬檬酸钠

0..5g

Trris

0.22g

卵黄黄

20mml双双重蒸馏馏水加至至

1000mll

甘油油最终浓浓度

1%%

青链链霉素

5000-10000μμg/mml甘油配制112%蔗蔗糖溶液液，并加加入氨基基乙酸，柠柠檬酸钠钠和Trris后后过滤煮煮沸155分钟消消毒，待待凉后按按比例加加入卵黄黄、甘油油、青链链霉素，充充分搅拌拌均匀。2、解冻稀稀释液的的配制解冻稀释液液配方：：葡萄糖糖

5gg

双蒸水水

1000mll

柠檬檬酸钠

0..5g

10%%安钠加加

5mml配好后过滤滤煮沸消消毒

颗

粒

法

细

管

法

3、冷冻工工艺流程程：镜检：精液采得后在38-40℃下显微镜检查，活力不低于0.7

释释：用稀稀释液11：1等等温稀释释

四、作业：：1、评定冷冷冻精液液解冻后后的活力力。2、试述如如何提高高冷冻精精液的质质量。

实验九

动物的的发情鉴鉴定

一、实验目目的观察识别母母牛、母母羊和母母猪发情情时外部部表现（性性兴奋），阴阴道的变变化和性性欲表现现，利用用腹腔镜镜观察卵卵巢的发发育情况况，确定定母畜是是否发情情。二、实验材材料阴道开张器器、载玻玻片、消消毒棉签签、腹腔腔镜、温温水、11%煤酚酚皂溶液液、755%酒精精棉球、生生理盐水水。三、实验内内容（一）外部部观察法法发情动物常常表现为为精神不不安，鸣鸣叫，食食欲减退退，外阴阴部充血血肿胀，湿湿润，有有粘液流流出，对对周围的的环境和和雄性动动物的反反应敏感感。母牛发情表表现不安安，哞叫叫，食欲欲和奶量量都减少少，尾巴巴常不停停地摇摆摆和高举举。放牧牧时通常常不安静静吃草而而乱走。明明显的特特征是接接受其它它母牛的的爬跨，拱拱腰站立立不动，发发情母牛牛也追逐逐其它牛牛。其它它牛常嗅嗅闻发情情母牛的的阴门，但但发情母母牛从不不去嗅闻闻其它母母牛的阴阴门。阴阴道排出出蛋清样样的粘液液，打开开阴道从从开张器器中间滴滴溜垂落落地下。母羊发情亦亦表现不不安，高高声鸣叫叫，不停停地摇尾尾巴，用用手按压压其臀部部摇尾更更甚，食食欲减退退，反刍刍停止，放放牧时常常有离群群现象，上上述表现现，山羊羊比绵羊羊表现强强烈。母猪的发情情表现在在各种母母畜中表表现最为为强烈，食食欲剧减减甚至废废绝，在在圈内不不停走动动，碰撞撞骚扰，拱拱地，啃啃嚼门闩闩企图外外出，不不停爬跨跨其它母母猪，而而且也接接受其它它母猪的的爬跨。（二）阴道道检查1、开张器器法（1）检查查前的准准备工作作保定：根据据现场条条件和习习惯，利利用绳索索，三角角绊或六六柱栏保保定母马马；将尾尾毛理齐齐，由一一侧拉向向前方。外阴部的洗洗涤和清清毒：先先用温水水（或肥肥皂、22-3%%的苏打打水等）洗洗净外阴阴部，然然后用11%煤酚酚皂溶液液进行消消毒，最最后用消消毒纱布布或酒精精棉球擦擦干。在洗净或消消毒时，应应先由阴阴门裂开开始，逐逐渐向外外扩大。如如果准备备用手臂臂检查，洗洗涤及消消毒范围围应该上上至尾根根，两侧侧达到臀臀端外侧侧。开张器的准准备：先先用755%的酒酒精棉球球清毒开开张器的的内外面面，然后后用无烟烟火焰烧烧灼消毒毒亦可用用消毒液液浸泡消消毒，然然后，用用开水冲冲去药液液并在其其湿润时时使用之之。（2）方法法步骤①用左手拇拇指和食食指（或或中指）开开张阴门门，以右右手转开开张器把把柄向右右或向左左。把柄柄向右或或向左，尖尖端斜向向前上方方插入阴阴门。②当开张器器的前11/3进进入阴门门后，即即改成水水平方向向插入阴阴道，同同时以顺顺时针或或反时针针方向放放置开张张器，使使其柄部部向下。③轻轻撑开开阴道，用用手电筒筒或反光光镜照明明阴道，迅迅速进行行观察。④观察阴道道应特别别注意阴阴道粘膜膜的色泽泽及湿润润程度，子子宫颈口口是否开开张及其其开张程程度。⑤雌性动物物未发情情时，阴阴门紧缩缩，并有有皱纹，开开张器插插入有干干涩的感感觉，阴阴道粘膜膜苍白，粘粘液呈浆浆糊状或或很少，子子宫颈口口紧缩。2、粘液抹抹片法（1）用经经消毒的的开张器器扩张阴阴道。（2）将用用生理盐盐水浸湿湿的消毒毒棉签插插入阴道道，在子子宫颈外外口沾取取阴道粘粘液。（3）将沾沾取的粘粘液均匀匀地涂抹抹于载玻玻片上。待待自然干干燥后在在显微镜镜下观察察结晶花花纹。也也可用110%AgNNO3溶溶液滴于于玻片上上，待其其自然干干燥后在在显微镜镜下镜检检。牛的的粘液抹抹片可放放大1000倍。羊羊的放大大2000倍观察察。（4）粘液液抹片无无花纹时时，以“-”记录；；有少量量树枝状状花纹时时以“+”记录；；有较多多花纹时时以“++”记录；；整个视视野全部部为结晶晶花纹，以以“++++”记录，表表示母畜畜正处发发情盛期期。（三）性欲欲表现1、母牛的的性欲表表现（1）将母母牛拴在在牛舍或或交配架架内（树树上亦可可），牵牵公牛接接近母牛牛，如果果母牛发发情，则则当试情情公牛接接近时，母母牛安静静不动，并并弯背拱拱腰，作作交配姿姿势。（2）为了了在大群群牛中发发现发情情母牛，亦亦可于母母牛逍遥遥在运动动场中时时，将试试情公牛牛放入牛牛群内。由由试情公公牛在牛牛群中寻寻找发情情母牛。若若某头母母牛发情情，则当当公牛爬爬跨时即即安静不不动。2、母羊的的性欲表表现发情母羊随随着发情情时间的的发展，表表现有强强烈的交交配欲，如如主动接接近公羊羊，接受受爬跨。母母羊的发发情外部部表现常常常在接接近公羊羊时表现现的最为为明显，同同时，公公羊对发发情母羊羊具有特特殊灵敏敏的识别别能力，因因此在生生产实践践中，常常常采用用公羊试试情。3、母猪的的性欲表表现发情母猪当当听到公公猪叫声声，则四四处张望望，当公公猪接近近时，顿顿时变得得温顺安安静，接接受公猪猪交配。发发情鉴定定时常采采用一种种“止动反反射”视察，即即用手按按压发情情母猪背背部时，母母猪站立立不动尾尾翘起凹凹腰拱背背，向前前推动，不不仅不逃逃脱反而而有抵抗抗的反作作用力，将将这种现现象也可可以作为为一种性性欲表现现。（四）腹腔腔镜法通过腹腔镜镜观察到到，排卵卵前卵巢巢体积达达到最大大，系膜膜内的血血管很粗粗。卵泡泡呈球状状突出于于卵巢表表面。卵卵泡壁很很薄，卵卵泡内充充满半透透亮的暗暗红色的的卵泡液液。排卵卵前约112小时时，卵泡泡壁开始始变薄，卵卵泡颜色色变淡稍稍白。排排卵前约约5～77小时，卵卵泡壁进进一步变变薄，出出现较细细的血管管网。排排卵前22～3小小时，卵卵泡壁中中央部血血管变粗粗呈树枝枝状，卵卵泡进一一步增大大。排卵卵前约11.5小小时，卵卵泡中央央部的血血管崩解解，血液液外溢，血血管形态态模糊，卵卵泡壁染染红。约约1小时时后可见见卵泡壁壁顶端变变薄，随随后外膜膜崩解，出出现小孔孔，卵泡泡内膜和和卵泡液液从小孔孔中突出出，形成成一透明明的小乳乳突，数数分钟后后乳突破破裂，外外膜孔扩扩大，卵卵泡液随随之流出出，排卵卵结束。四、作业

试述述就观察察到的母母牛、母母羊和母母猪有哪哪些发情情表现。实验十

母牛的的直肠检检查一、实验目目的熟悉母牛卵卵巢、子子宫、子子宫颈的的自然位位置、大大小、形形状、质质地和相相互关系系，掌握握直肠检检查的基基本操作作方法，为为在生产产实践中中鉴定母母牛发情情状态、妊妊娠诊断断和检查查卵巢子子宫疾病病奠定基基础。二、实验材材料空怀和妊娠娠母牛、搪搪瓷盆、肥肥皂、毛毛巾等。三、实验内内容（一）直肠肠检查前前的准备备工作1、将母牛牛保定于于六柱栏栏中，尾尾巴拉向向一侧，清清洗阴户户。2、检查人人剪去指指甲并挫挫圆，以以防损伤伤肠壁，手手臂清洗洗涂抹肥肥皂以滑滑润。（二）直肠肠检查的的方法1、检查者者站于母母牛身后后，手成成锥形，轻轻轻插入入直肠，缓缓缓向里里推进。2、手伸入入直肠后后，如有有宿粪可可用手指指扩张肛肛门，使使空气进进入，促促进宿粪粪排出，如如未排出出，可用用手轻轻轻地少量量而多次次地掏出出，以排排尽宿粪粪。3、手伸入入直肠达达骨盆腔腔中部，将将手掌展展平向下下压肠壁壁，可触触摸到一一个质地地坚实较较硬的子子宫颈，用用拇指、中中指和无无名指握握住子宫宫颈。4、沿子宫宫颈向前前触摸，在在子宫体体的前下下方有一一纵行的的凹沟，即即子宫间间沟。5、再向前前触摸，可可摸到分分叉的圆圆柱状即即为一对对子宫角角，沿子子宫角大大弯向外外侧下行行，即可可摸到呈呈扁圆形形，柔软软而有弹弹性的卵卵巢。（三）触摸摸卵巢上上卵泡的的发育状状况1、卵泡出出现期：：卵巢稍稍增大，卵卵泡直径径0.55-0..75ccm，触触摸时为为软化点点，波动动不明显显，这时时牛已开开始发情情。2、卵泡发发育期：：卵泡增增大到11—1.55cm波动明明显，此此期后期期发情已已不大明明显。3、卵泡成成熟期：：卵泡壁壁变薄，紧紧张性增增强，有有一触即即破之感感。4、排卵期期：卵泡泡破裂排排卵，卵卵泡液流流失成一一小凹陷陷，排卵卵后5——8h黄黄体开始始生成。母牛发情时时间持续续为100-244h，排排卵前66－244h内输输精受胎胎率最高高。（四）母牛牛妊娠诊诊断主要要触摸以以下项目目1、子宫角角的位置置、质地地、形状状、大小小和对称称程度。2、卵巢的的大小、形形状、质质地和有有无黄体体。3、可否摸摸到子宫宫体、子子宫、胎胎盘以及及胎盘的的大小。4、有无漂漂浮的胎胎儿及胎胎儿活动动状况。5、子宫内内液体的的性状。6、子宫动动脉的粗粗细及有有无妊娠娠脉博。

实验十一

动物物的采精精与输精精

一、实验目目的了解采精、输输精的程程序和操操作要领领，掌握握动物的的采精、输输精方法法。二、实验材材料公畜、台畜畜、采精精架、假假阴道、乳乳胶手套套、长柄柄钳子、瓷瓷盘、集集精瓶、贮贮精瓶、电电刺激采采精器；；母畜、阴道道开张器器、输精精器、卡卡苏枪、输输精胶管管、注射射器、内内窥镜、光光源灯、氧氧气瓶、热热水桶、水水浴锅、干干燥箱、消消毒桶、固固定架；；酒精棉球、凡凡士林、灭灭菌纱布布、温度度计。三、采精方方法（一）公牛牛的假阴阴道采精精1、将台畜畜保定于于交配架架内，尾尾部用绳绳子向前前系于左左侧。2、用温水水将母牛牛外阴道道用周围围洗涤干干净，并并用清洁洁纱布抹抹干。3、采精员员右手持持假阴道道，立于于公牛右右侧准备备采精。4、采精前前，须对对公牛进进行适当当的控制制，必要要时可作作数次空空爬，以以增强性性欲和增增加采精精量，直直到公牛牛阴茎充充分勃起起，排出出少量分分泌液时时才令其其爬跨。5、当公牛牛爬跨时时，采精精员将假假阴道口口对准公公牛阴茎茎伸出方方向。假假阴道的的方向与与阴茎自自然方向向一致，约约与水平平线呈335°角，当当公牛阴阴茎进入入假阴道道后，后后躯向前前强烈地地耸跳即即为射精精6、射精完完毕，将将假阴道道的集精精杯端向向下倾斜斜，同时时随公牛牛向下，慢慢慢让其其阴茎自自然脱出出。7、打开活活塞，放放出空气气和部分分温水，使使精液完完全流入入集精杯杯，回到到室内取取下集精精杯。进进行精液液品质检检查，并并进行稀稀释保存存。8、假阴道道、集精精杯等用用过后应应清洗消消毒，以以备下次次使用。（二）公猪猪的手握握法采精精公猪一般使使用采精精台采精精，要注注意采精精台的高高低，检检查牢固固与否，有有无尖利利物，以以防公猪猪爬跨时时跌伤或或刺伤，公公猪采精精对温度度，压力力润滑度度要求不不高，目目前普遍遍采用手手握法采采精。1、采精员员一只手手带乳胶胶手套，一一只手拿拿集精杯杯（冬天天最好是是保温杯杯）并在在集精杯杯口扎上上双层消消毒纱布布，以过过滤精液液，除去去胶质。2、待公猪猪爬跨时时，采精精员蹲于于采精台台右侧，当当公猪阴阴茎伸出出时，用用带手套套的手握握住螺旋旋状阴茎茎头不让让转动，同同时手指指继续有有节奏的的一松一一紧地加加压，即即可引起起公猪射射精。3、公猪俯俯伏在采采精台上上不动，表表示开始始射精，立立即用集集精杯收收集精液液。公猪猪射精时时手指停停止加压压，射精精稍停时时，手指指继续加加压，直直至采完完全部精精液。4、弃去胶胶质部分分，于室室内进行行精液品品质检查查，并进进行稀释释保存。

四、输精方方法（一）输精精前的准准备工作作1、输精器器械的清清洗消毒毒：金属属开张器器先以火火焰消毒毒，再以以75%%酒精棉棉球消毒毒，输精精器用蒸蒸煮消毒毒或755%酒精精消毒，再再以生理理盐水冲冲洗2--3次。2、做好母母畜发情情鉴定，检检查有无无生殖器器官疾病病。3、检查精精液品质质：鲜精精必须活活力在00.6——0.77以上，冻冻精活力力必须在在0.33以上才才能用于于输精。（二）各种种家畜的的输精方方法1、母牛的的输精将母牛保定定在配种种架或牛牛床颈枷枷上，把把尾拉向向一侧，用用温水洗洗涤外阴阴部并擦擦干。母母牛输精精有阴道道开张器器法和直直肠把握握法二种种，后法法须一定定技术，但但受胎率率高。阴道开张器器法：输输精时，阴阴道开张张器保持持25--30°°，涂抹抹少量润润滑剂。一一手持开开张器打打开阴道道，找到到子宫颈颈外口，另另一手将将事先吸吸有精液液的输精精器尖端端插入子子宫颈口口内1--2cmm深处，徐徐徐将精精液注入入，输精精量一般般为1--2mll。输精精完毕，小小心取出出输精器器和开张张器，压压其背部部以防母母牛拱背背使精液液倒流。直肠把握法法：左手手伸入直直肠排除除直肠中中粪便，握握住子宫宫颈，右右手将吸吸有精液液的输精精管从阴阴门斜上上方插入入阴道，而而后水平平插入直直抵子宫宫颈外口口，两手手协同作作用背将将输精器器插入子子宫颈内内，或至至子宫再再徐徐注注入精液液。2、母羊的的输精

基本与母牛牛的开张张器法相相同。首首先保定定母羊，保保定人员员将母羊羊尾向上上拉起，输输精员用用开张器器打开阴阴道，找找到子宫宫颈外口口，而后后把吸有有精液的的输精器器沿开张张器插入入子宫颈颈口0..5—1.00cm，缓缓缓注入入精液，母母羊输精精量一般般为0..05--0.11ml，不超过过0.22ml，输输精完毕毕，小心心取出输输精器和和开张器器在羊腰腰背部拍拍一下，以以防精液液倒流。母羊也可采采用腹腔腔镜法输输精。首首先在下下腹正中中线的左左侧用77毫米的的套管和和探针打打一孔，充充气后放放入窥镜镜管；在在下腹正正中线的的右侧插插进一个个5毫米米的套管管和探针针，用于于寻找子子宫角。找找到子宫宫角后由由5毫米米套管抽抽出探针针，插入入吸管（先先抽3毫毫升的气气体，然然后吸取取所需精精液）把把吸管尖尖插进一一侧子宫宫角，用用注射器器注进精精液。抽抽出吸管管，然后后在另一一侧子宫宫角重复复上述过过程，再再输一次次，这样样可大大大提高受受精率。注注意输完完精取套套管前先先放气。3、母猪的的输精发情母猪输输精可在在圈内站站立，将将猪用橡橡胶输精精管轻轻轻从阴门门插入阴阴道，左左右旋转转前后转转动直至至子宫颈颈深部，这这时将装装有精液液的注射射器接上上橡胶输输精管，将将精液徐徐徐注入入子宫内内，母猪猪输精量量一般为为25--40mml，输输精完毕毕，轻轻轻抽出输输精管，在在母猪背背上用力力一压，以以减少精精液倒流流。五、作业：：1、简述牛牛的采精精过程2、写出母母牛、母母猪输精精的特点点，怎样样输精才才能提高高受胎率率？

实验十二

动物物的胚胎胎观察与与鉴定

一、实验目目的通过实习，熟熟悉动物物卵子的的形态结结构，初初步区分分正常和和非正常常的胚胎胎，练习习掌握观观察胚胎胎技术，为为掌握胚胚胎移植植技术打打下基础础。二、实验材材料1、各种动动物的卵卵子及牛牛、羊、免免卵子标标本。2、正常胚胚胎和非非正常胚胚胎。3、器械：：（1）体视视变倍显显微镜、普普通显微微镜（2）表面面皿、吸吸卵滴管管、拨卵卵针、凹凹载玻片片10--20个个。（3）集卵卵杯、小小烧杯等等。三、实验步步骤将盛有卵子子保存液液的表面面皿置110倍镜镜下检查查，找到到卵子后后用吸管管（先将将吸管挤挤出少量量气体后后，对准准卵子吸吸入）吸吸取卵子子，放入入凹载玻玻片的凹凹窝内，用用钢笔在在载玻片片背面将将卵子划划一圆圈圈，置1100倍倍显微镜镜下，观观察卵子子的形态态，或在在变倍显显微镜下下直接观观察。1、观察正正常卵子子形态动物的卵子子多呈圆圆球形，内内含有一一个球形形核，核核内有11—2个核核仁，细细胞质含含量丰富富，其中中贮存有有卵物质质，和一一般生物物细胞一一样也含含有线粒粒体和内内网器，细细胞膜很很薄，通通常称为为卵黄膜膜。动物物的卵子子，卵黄黄含量较较少且分分布均匀匀，故属属少黄均均质卵黄黄，排出出卵子的的大小，直直径变动动在800-2000uum之间间，如马马为1220—1800um，牛牛为1220—1600um，绵绵羊为1140——1855um，猪猪为1220—1700um，实实验动物物海豚鼠鼠为877—1077um，兔兔为1110—1466um。因动物种类类不同，卵卵细胞质质内所含含卵黄素素颗粒和和脂滴的的量不同同，因此此卵的外外观也有有差异。如如山羊、绵绵羊、兔兔的卵子子卵黄颗颗粒细，分分布均匀匀，脂滴滴含量少少，因而而细胞较较明亮，而而马、牛牛和猪的的卵子所所含脂滴滴量多，其其折光性性强，因因而细胞胞质呈黑黑块状，但但也有人人认为牛牛的脂滴滴含量不不多，卵卵细胞质质不如马马和猪的的深。动物新排出出的卵子子，在卵卵黄膜外外，还具具有透明明带和放放射冠两两种结构构。透明带由卵卵泡上皮皮分泌而而来，包包在卵黄黄膜外，卵卵在进行行第一次次成熟分分裂之后后，排出出第一极极体，卵卵细胞质质收缩，于于是在卵卵黄膜和和透明带带之间出出现了一一个很小小的裂隙隙，称卵卵周隙或或围卵腔腔，如卵卵继续进进行第二二次成熟熟分裂，则则排出第第二极体体，两者者均存在在于卵周周隙中。细细胞质进进一步收收缩，卵卵黄周隙隙就进一一步扩大大。透明带是一一种透明明、均质质的半透透性膜。属属粘多糖糖蛋白，含含有透明明质酸，它它有弹性性，用针针很难刺刺入。卵卵子受精精后，在在卵裂、桑桑椹胎和和囊胚早早期，透透明带明明显，它它可作为为输送营营养的通通路，并并对卵子子和幼嫩嫩的早期期胚胎有有保护的的功能。故故胚胎移移植时要要求透明明带必须须是完整整无损的的。不同动物的的卵子透透明带的的的厚度度也不同同，牛为为12——15uum，兔兔卵在透透明带外外。鼠类类及猫、狗狗等动物物，可见见有发达达的放射射冠，而而马、牛牛、羊、猪猪等动物物在排卵卵后不久久，放射射冠即消消失，也也有报导导牛在排排卵后99—14小小时之内内放射冠冠即脱落落。猪在在诱发排排卵时，受受精之后后透明带带仍继续续存在。2、受精卵卵的鉴别别不同的动物物，从卵卵巢中排排出的卵卵子成熟熟程度不不同，马马、驴和和狗，在在第一次次成熟分分裂没有有完成时时排出。牛牛、绵羊羊、山羊羊和猪则则在第二二次成熟熟分裂的的中期排排出。第第一极体体大多消消失早，排排卵后即即已不见见，如果果受精卵卵最后完完成成熟熟，放出出第二极极体。在胚胎移殖殖技术中中鉴别卵卵子是否否受精是是决定着着移植成成功的第第一关键键，有两两个标准准可供参参考，一一是第二二极体的的出现（但但有人报报道冷刺刺激可使使非受精精卵排出出第二极极体）；；二是卵卵周隙的的扩大，从从实践中中来看，两两个标准准不甚明明显，特特别是第第二极体体不易见见到，并并难于与与第一极极体相区区别。另另外，如如果卵未未受精，则则卵子细细胞质碎碎裂为许许多（22—20）大大小不同同的碎块块，每一一块中含含有核的的碎块。有有时这种种碎裂的的卵子与与受精卵卵的正常常卵裂十十分相似似，这时时要和同同一批卵卵相比较较，否则则难于正正确判断断。3、畸型的的未受精精卵和受受精卵由于卵细胞胞成熟过过程不正正常或异异常环境境因素的的影响，而而发生畸畸型卵如如小卵、巨巨卵、椭椭圆卵、扁扁形卵、透透明带破破裂，带带有大极极体或细细胞质内内有大空空泡等。这这些卵均均不适宜宜作移植植用。四、作业将你观察到到的正常常受精卵卵及未受受精卵、畸畸形卵绘绘图说明明。

实验十三

牛、羊羊的胚胎胎移植

一、实验目目的通过应用激激素对牛牛、羊进进行超数数排卵及及同期发发情处理理，以及及胚胎移移植全过过程的观观察，了了解动物物胚胎移移植的程程序，主主要技术术环节操操作要领领。二、实验材材料1、选择健健康、营营养良好好、无繁繁殖疾病病、生殖殖功能正正常的母母牛，或或母羊，做做供体牛牛（羊）受受体牛（羊羊）。2、药品：：PMSSG、FFSH、LLH、PPGF22α、静松松灵注射射液、普普鲁卡因因注射液液、PBBS、抗抗菌素等等。3、器械：：子宫扩扩张棒、二二路冲卵卵器、注注射器、输输卵器、卡卡苏枪、解解剖镜、腹腹腔镜、集集卵瓶、检检卵杯、吸吸卵管、羊羊手术台台（2个个）、手手术刀、剪剪、镊子子、创布布、缝合合针等两两套。三、实验方方法（一）牛的的非手术术法胚胎胎移植与与超数排排卵处理理受体牛胚胎胎移植前前第6天天注射PPMSGG5000—8000IU，前前3—4天注注射PGGF2αα1-22mg（子子宫灌注注法）。供体牛性周周期的第第11天天，肌注注PMSSG30000--40000IUU，第113天肌肌肉注射射PGFF2α20--30mmg，促促使黄体体退化，第第15天天供体牛牛发情（此此天为00天）间间隔8--12小小时输精精2-33次，第第7天收收集胚胎胎。或用FSHH在供体体手性周周期的第第11--14天天每日上上午8时时下午55时各肌肌肉注射射FSHH50IIU，总总剂量4400IIU，第第13天天注射PPGF22α20--30mmg,

第155天供体体牛发情情。以后后处理同同第一种种方法，在在第一次次输精同同时注射射LH1600IU，共共输精33次。2、胚胎的的收集（采采卵）①供体牛在在直检架架内保定定，用绳绳缠尾拉拉向一侧侧，排出出直肠内内的宿粪粪，清洗洗阴户周周围。②肌肉注射射静松灵灵3-55ml作作镇静。③2%普鲁鲁卡因注注射液44ml作作尾椎硬硬膜外局局部麻醉醉，以松松驰子宫宫颈环肌肌。④组装冲卵卵集卵的的装置，准准备10000mml冲卵卵液加温温到388℃备用。⑤使用子宫宫扩张棒棒扩张子子宫颈口口。⑥将带有通通心钢丝丝的采卵卵软管插插入子宫宫角。⑦冲气200ml，使使冲卵管管固定于于子宫基基部。⑧用1000ml注注射器及及取388℃的冲卵卵液400-600ml，注注入子宫宫角，再再回收冲冲卵液，反反复冲洗洗，一侧侧子宫角角总计用用冲卵液液50mml,一一侧子宫宫角冲完完，以同同样方法法冲洗另另一侧子子宫角，二二侧冲完完，向子子宫的内内注入抗抗菌药物物。3、胚胎的的检查（检检卵）①将盛有冲冲卵回收收液的集集卵管静静置100-200minn,然后后从集卵卵管下端端放液于于检卵标标，置于于解剖镜镜下观察察，以110-440倍仔仔细将胚胚胎检出出，放入入盛有移移卵液的的凹面培培养皿内内，仔细细观察胚胚胎的形形态和发发育情况况。②收集外形形整齐，大大小一致致，卵裂裂球分裂裂均匀，外外膜完整整的清晰晰明亮的的桑椹胚胚或适宜宜胚期的的胚胎，吸吸入塑料料细管内内（用五五段法：：移卵液液—空气—含有移移卵液的的胚胎——空气—移放液液）再将将细管放放入输卵卵器中4、胚胎的的移植（授授卵）。①选择同期期发情处处理的与与供体牛牛相一致致的母牛牛做受体体。②按常规输输精法，将将输卵器器插入宫宫颈，并并深入黄黄体侧子子宫角，将将胚胎移移入。（二）羊的的手术法法胚胎移移植操作作1、同期发发情与超超数排卵卵处理受体羊于胚胚胎移植植前7天天注射PPGF22α2mgg，移植植前6天天注射FFSH550IIU每天天试情并并记载发发情开始始及结束束时间。供体羊在发发情周期期第166天开始始注射FFSH1000IU，每每天一次次，共三三次，并并在第117天注注射PGGF2αα2mgg，供体体羊发情情结束配配种，并并注射LLH1150IIU,配配种2--3次，每每天上午午、下午午试情配配种，配配种开始始后第四四天手术术胚胎移移植。2、胚胎收收集由于山羊无无法进行行直肠检检查，手手术前应应用腹腔腔镜技术术检查供供体和受受体的卵卵巢和子子宫，弃弃除那些些不适宜宜手术的的羊只，卵卵巢上有有正常黄黄体者，手手术时直直接将胚胚胎移植植于该侧侧子宫角角，不需需再检查查卵巢，这这样不仅仅可缩短短手术过过程，减减少手术术创口污污染的机机会，更更重要的的是可避避免牵拉拉及检查查卵巢时时可能造造成的卵卵巢及黄黄体的