实验室生物化学常规玻璃仪器使用

第四节生物化学检验实验室常规玻璃仪器的使用学习目的说出生物化学检验实验室各种常规仪器的使用方法学会血液、尿液标本的正确收集、处理与保存说出微量加样器校正的目的及方法离心机转速(rpm)相对离心力(RCF)原理:利用离心机在高速旋转时产生的强大离心力,使悬浮于溶液中密度不同的微粒依不同的速度沉降从耳达到分离.纯化.制备的目的.用途:分离血清,沉淀蛋白质,收集细胞.细胞器等

RCF=1.118*10*(rpm)*r普通离心机<6000rpm高速离心机(6000~25000rpm)超高速离心机>30000rpm-52普通离心机普通离心机的使用1.使用前应先检查调速旋钮（手柄）是否子啊起点位置“0”处，外套筒有无破损，有无离心后的破碎残留物，如有应清理干净，其底部应放有橡皮软垫。2.将待离心溶液倒入容积大小适宜的离心管内，盛液量不宜超过离心管的2/3，以免溢出。然后放入离心外套筒。3.将一对装有离心管的外套筒置天平上，于离心管与外套筒间用自来水加减法平衡至等重，然后对称放入离心机，并将不用的离心外套筒取出，盖好离心机盖。4.接通电源，然后慢慢调节转速旋转，使转速逐渐增加至所需的离心转速数。停机时，应先将调速旋钮拨回到几点“0”处，断电，待其停止离心后再打开机盖，轻轻取出离心管。用完后，倒立外套同使其干燥存放。注意事项：放置离心机的位置应平稳，坚固，外接电源应为三眼插座且地线接地良好。高速离心机高速离心机的使用高速离心机技术方法主要适用于分离、纯化、制备、分析高分子化合物及亚细胞组分。依其原理不同，其方法分差速离心法、速率区带离心法和等密度离心法三种。1.差速离心法；含有数种大小或密度不同颗粒的溶液，对密度差速离心法将其分离成比较单一的组分。该种方法操作简便，适用于分离大小和密度相差较大的颗粒，对密度相差较小的颗粒，分离效果不甚理想。2.速率区带离心法；该法与差速离心法的区别在于，后者整个离心过程都是在均一介质中进行，而速率区带离心法，则必须选择合适的梯度介质，使样品在梯度介质中依其颗粒大小的不同进行分离3.等密度区带离心法；先在离心管内装入密度梯度介质，其密度沿离心方向逐渐增加。在离心过程中，样品中不同密度的颗粒在离心力作用下，分别迁移至与其密度相等的介质中而停止沉降，由此使不同密度的颗粒停止在各自的等密度区带而得以分离。其沉降平衡主要依赖于颗粒的密度，与颗粒大小及形状无关。该法分离纯化效果好，但操作复杂。高速离心技术用的转头

高速和超高速离心技术用的转头结构简单，但技术要求极高，因转头在高速旋转时受到很大内应力和拉力，长期使用会造成累积性塑性变形。内部结构细微缺陷，选择和使用不当会导致转头撕裂或爆炸事故。使用转头时，必须根据分离要求，正确选用转头。高速离心机使用中注意事项

（1）两管重量必须平衡等重至1.0g（2）更换、取、放转头时，应小心轻放，不能与硬物碰撞，必须反复检查转头的卡口是否对准。严格控制转速在转头转速限制的90%内，不能满速，甚至超速。（3）高速运转前，离心室内一定要抽成真空，并降至规定温度。（4）离心过程中增减速度不能过快。电热恒温水浴箱二、电热恒温水浴箱简称水浴箱主要用于恒温水温，保持化学反应所需恒温条件。加热装置浸入式电热管，温度控制为螺旋管式温控器，灵敏度一般为±0.5℃1.关闭水浴箱底部放水开关，注入水至适当深度，水位不能低于电热管。2.接通电源，打开开关，此时若红灯亮，表示电热管开始加热。调节温控旋钮至适当位置。3.观察温度计，当温度升志距所需约2℃时，逆时针方向旋转调温旋钮至红灯刚好熄灭。此后红灯不断熄灭，表示恒温控制器发挥作用，在继续观察一段时间温度升降变化情况，若与所需温度不符，只需略微调节温控旋钮直至达到所需恒定温度。4.调温旋钮刻度盘上的温度标本值与箱内水的实际温度不符，但可记录水箱内温度计所指示的温度与调温旋钮在刻度盘上的指示位置，并做好相应记号，在多次使用的基础上，就可比较迅速，准确地得到需要恒定的水温。5.若较长时间不使用，应将温控旋钮退回零位，打开放水开关，放尽水浴箱内水，保持箱内干燥，以免生锈。电热恒温干燥箱三、电热恒温干燥箱电热恒温干燥箱又称烤箱，其主要用途是加热烘干洗净的物品和干热灭菌。恒温范围一般为50~300℃，温控灵敏度为±1℃.1.将温度计插入箱顶放气调节器中部的插孔内。2.将电源插头插入接地良好的三眼插座。3.开启电热丝分组开关，并视所需加热温度的高低，开启一组或多组电热丝，此时红灯亮，表示电热丝开始加热，开启箱内鼓风机，可帮助箱内热空气对流。4.观察箱顶温度计温度指示，待温度上升至所需温度差2~3℃时，调节自动恒温器旋钮，使绿色指示灯刚好亮，此时表示电热丝停止加热。继续观察温度计和红绿指示灯，了解温度变化及恒定情况，略微细调温控器，直至温度自动控制在所需温度±1℃为止。5.加热干燥或干热灭菌完毕后，不能立即开烤箱取物品，须关闭电源待温度降温至50℃以下，在开门去物，否则玻璃器皿会因骤冷而爆裂。6.烤箱内不能烘烤易爆、易燃、易挥发的物品以免发生事故。电热搅拌仪四、电热搅拌仪原理：

电热搅拌仪是一种即可用于溶液加热，又可搅拌溶液的仪器

仪器托盘下夹在云母片中的电热丝起加热的作用，托盘下面

还有一微型电机带动一块磁铁旋转，以带动容器中搅拌子转

动，达到搅拌溶液的目的。搅拌子是用一小段铁丝密封在玻

璃管或塑料管中而制成（避免铁丝与溶液起化学反应），搅

拌子随磁铁的旋转而转动。使用方法：1.将转速调节旋钮调至最小，接上电源，打开电源开关，指示灯亮2.将需搅拌的容器置托盘中央，选择合适的搅拌子放入溶液，并置容器的中央3.调节转速旋钮至搅拌子旋转速度适度4.需加热时，打开加热开关，并调节调温旋钮至合适的温度注意事项：使用时，保持容器外壁干燥，转速不能太快，以免溶液外溅，腐蚀托盘，用完切断电源第五节：生物化学检验标本的采集与处理一、血液标本生化检验血液标本分静脉血、动脉血和毛细血管血静脉穿刺采血是临床最常用的采血方法静脉血标本最好在上午7~9时空腹采血较为适宜，门诊病人提倡静坐15min后再采血。（一）采集标本前准备要核对病人姓名，床号，检品联号，若用条形码，需将条码正联纵向贴在标本管上。（二）采血部位前臂肘正中静脉取血必要时可采手背静脉血幼儿可采颈外静脉采血方法采血部位：肘静脉；手背部手腕部等体表静脉；幼儿可采用颈外静脉采血采血器材：一次性注射器，真空定量采血装置注意事项：

（

1

）防止溶血：造成溶血的因素有注射器和容器不干燥、不清洁；淤血时间过长；

穿刺不顺利，组织损伤过多；抽血速度太快；血液注入容器时未取下针头或注入

速度过快产生大量泡沫；震荡过于剧烈等。若用普通注射器采血后，未取针头直

接将血注入真空管内也易造成溶血体内溶血属合格标本，但应在报告单上注明。

如ACP、LDH、AST、K+等物质在红细胞内的浓度较血清高22~160倍，故轻微溶血

都会导致结果偏高，此外溶血释放出的血红蛋白可干扰胆固醇酶法测定，抑制胆

红素的重氮反应等。（2）避免充血和血液浓缩：采血时应动作迅速，尽可能缩短止血带使用时间。用止

血带压迫时间最好不超过半分钟，否则将使生化结果升高或下降。（3）若病人正在进行静脉输液，不宜在输液同侧手臂采血；若女性病人做了乳腺切

除术，应在手术对侧手臂采血。（4）采血的体位：体位改变可引起一系列的生理变化，使血液中的许多指标发生改

变。一般采取直立位采血，其二标本的测定值比卧位高5％～15％。因此，

采血时要注意保持正确的体位（坐位或卧位），以及体位的一致性。（5）采血时只能向外抽，决不能向静脉内推，以免注入空气，形成气栓而造成严重

后果。（6）很多生化成分受膳食影响，因此，采血前要确认病人是否空腹。（7）采血过程中晕厥：拔出针头，嘱其平卧，必要时可给患者嗅芳香氨酊，针刺（

或拇指压掐）人中、合谷，静点葡萄糖或口服糖水名称色标添加剂实验用途红色

未加常规生化、血库和血清学相关项目检测橘黄色

促凝剂急诊血清生化项目检测金黄色惰性分离胶促凝剂急诊血清生化项目检测标准真空采血管采用国际通用头盖和标签颜色普通血清管快速血清管惰性分离胶促凝管名称色标添加剂实验用途

绿色

肝素红细胞脆性实验，红细胞压积实验，普通生化检测

灰色草酸钾、氯化钠血糖测定

浅绿色惰性分离胶和肝素电解质，常规血浆生化ICU急诊血浆生化检测标准真空采血管采用国际通用头盖和标签颜色肝素抗凝管草酸钾/氯化钠管血浆分离管名称色标添加剂实验用途

紫色EDTA-Na2一般血液学检验浅蓝色枸橼酸钠凝血实验黑色枸橼酸钠血沉实验标准真空采血管采用国际通用头盖和标签颜色EDTA抗凝管枸橼酸钠凝血管枸橼酸钠血沉管抗凝剂1.

草酸钾草酸钾与血液中钙离子结合成草酸钙而阻止凝血。因草酸钾的加入，改变了血液PH，故草酸钾抗凝的血浆不能用于酸碱平衡实验的测定，不能用于钾，钙测定；因草酸钾对乳酸脱氢酶，酸性磷酸酶，碱性磷酸酶，淀粉酶有抑制作用，故不能用于此类酶活性的测定。2.

氟化钠-草酸钾因氟离子抑制糖酵解途径中的烯醇化酶，阻止糖酵解，故特适合血糖测定。但氟离子亦抑制转氨酶，淀粉酶碱性磷酸酶等酶的活性，故不适于酶活性的测定。3.

肝素因肝素能拮抗凝血活酶和凝血酶的合成，阻止血小板凝聚而阻止凝血。肝素抗凝的血浆，适合血气和绝大多数生化检测项目的测定，仅对酸性磷酸酶活性测定有干扰。二．尿液标本

尿液标本分随机性一次新鲜尿，定时尿及24h尿。定时分析多用24h尿。（一）24h尿标本收集

第一天嘱病人将尿排尽弃去，并记录排尿时间，以后每次排出

的尿均收集于洁净干燥带盖得容器中，直至收集至第二天同一

时间最后一次排尿为止。混匀，量其总量。此记为24小时尿。（二）尿液标本的保存

尿液易生长细菌，而细菌的生长会致尿液中化学成分发生改变

故24小时尿的收集均应在收集第一次尿时即加入防腐剂。收集

的尿液应及时送检，若不能，应将收集的尿液充分混匀，准确

量其总量，记录体积，留取一部分分置冰箱4~6℃保存。脑脊液标本采集部位有腰椎，小脑延髓池等临床多以腰椎穿刺法采集脑脊液第一管作细菌学检查第二管作生化，血清学检查第三管作细胞计数久置会至细胞破坏影响细胞计数；因葡萄糖分解使其结果降低；病原菌破坏或溶解。细胞计数管应避免标本凝固，遇高蛋白标本时，可用EDTA盐抗凝。标本采集中影响检验结果的因素常见的影响因素有标本采集的时间、体位、年龄、性别、运动、情绪、食物和药物等。（一）运动的影响

运动对体液化学成分影响程度受到运动时间、强度及平时有无体育训练习惯有关。运

动会致机体新陈代谢快。细胞内ATP减少。细胞膜透性增加。致机体许多胞内酶如丙

氨酸氨基转移酶、天冬氨酸氨基转移酶、碱性磷酸酶等在血清中的活性增高、乳酸明

显增高、尿酸和血PH上升。（二）饮食的影响

饮食对体液化学成分的影响与饮食量和食品性质有关。

一般饮食或可使血糖、钾、铁、三酯酰甘油浓度升高高蛋白饮食可是血清中尿素、尿

酸、及

氨略升高，但对肌酐的影响不大。饮茶、咖啡可使体内儿茶酚胺释放增多。葡

萄糖浓度略升高，饮咖啡可是血中游离脂肪酸明显升高饮酒可使血中乳酸、尿酸、丙

氨酸氨基转移酶、γ-谷氨酰转肽酶升高，长期饮酒者，往往伴高三酯酰甘油血症及

γ-谷氨酰转肽酶不正常(三)药物的影响

药物对体液化学成分测定结果的影响主要有两种原因：

一种是由药物引起的生理变化导致血中某些化学成分浓度的改变。

如服用