人成纤维细胞诱导iPSC的实验研究

河南省科技攻关打算工程申请书工程名称：人成纤维细胞诱导多能干细胞的临床应用争辩工程领域：√社会进展申请单位〔签章河南省人民医院协作单位：推举部门〔签章填报日期：2023年河南省卫生厅8 月 28 日“工程申请书”经省直主管部门、省辖市〔扩权县、市〕科技主管部门、国家级或省级高技术开发区管委会签署意见并盖章后一式五份报送。“工程申请书”的内容必需真实、所附材料齐全，要求工程争辩、开发目标明确，内经费预算合理。议〔合同。“工程申请书”中引用的名称、数据等内容均应标明出处，外文缩写应注明全称。“工程申请书”中未列但需说明的内容可加附页，相关技术文献、证明文件等材料A44号宋体字。工程名称工程名称人成纤维细胞诱导多能干细胞的临床应用争辩项目概况预期主要成果形式12□1、论文论著2、争辩报告3、产品或农业品种4、设备5、材料6、工艺或方法7、软件9、其他20150050姓名性别诞生年月学历从事专业魏晓霞女1965.10本科生化检验副主任技师梁玉女1971.11本科输血主管技师陈凤英女1957.08大专临床检验主管技师单位名称单位性质单位名称单位性质河南省人民医院9 1、企业2、科研院所3、高等学校9、其他1 、国有企业2345、申请单位概况址67、私营企业897号地所在省级产业集聚区联系人职工总数23006558005965674278技术人员1850中高级技术人员4500031650主要参与人员

附合作协议〔合同〕1、企业2、科研院所3、高等学校9、其他 1、国有企业2345、67、私营企业89协地 址作单位联系人 概职工总数技术人员中高级技术人员况主要参与人员姓名

学历

、Sox2Nanog、Sox2NanoginducedPluripotentStemCell,iPS用于组织损伤修复及疾病治疗，避开异源移植排斥。申请工程的依据和意义〔说明国家产业技术政策，国内外相关领域技术进展水平和趋势〕申请工程的依据：2023ShinyaYamanaka将四种基因Oct3/4Sox2c-Myc后称之为iPS〔Cell2023,126:663-76，将iPSC移植到小鼠皮下组织，可发育为畸胎瘤〔teratoma〔胚胎干细胞的一个重要性质。2023性基因的Nanog，得到了其次代iPSC，能和成鼠形成嵌合体并产生后代〔Nature2023,448:313-7RudolfJaenisch试验室也利用这四种一样的转录因子成果的诱iPS〔NatBiotechnol,2023,25:1177-81ShinyaYamanaka又成果的将人类皮肤iPS〔NatProtoc,2023,2:3081-9Cell,2023,131:861-7JamesThomson试验室也可以将人类体细胞重设定变回干细胞Science,2023,318:1917-2。这两个试验NatureScience2023iPS的争辩中，以期能早日把这项技术应用到人身上。2023GeorgeiPS了干细胞争辩和应用的感动人心的进展前景。鉴于干细胞的重大应用前景，国家制订了《国家中长期科学和技术进展规划纲要〔2023-2023143.5其中三个工程〔中科院动物所周琪，上交大医学院曾凡一〕已经制备了37iPSiPS这是世界上第一次获得完全由iPSiPSC具有真正的全iPSC226工程争辩开发内容及目标〔实施方案、技术关键、技术路线和技术经济指标等〕工程实施方案：通过慢病毒介导将源自人脐血干细胞的Oct4、Sox2和Nanog基因导入源自人皮肤组织的成纤维母细胞，筛选出稳定表达上述基因的细胞株，通过指纹图谱〔fingerprintin、染色体组型分析〔karyotypeanalysi、畸胎瘤形成及向各胚层分化力量鉴定，诱导出多能干细胞〔iPSC工程技术关键：1GFP报道基因便于检测转导效率；2率。该载体只含有HIV-193个，即gag、pol、revHIV-1基因组%内的工具。利用逆转录机制构建自我失活(SIV)HIV-1来源的载体，一旦转移到靶细HIV-1为根底的第3代慢病毒载体系统的安全性甚至超过了目及动物试验以确保病毒失活，使用安全。工程技术路线：采集脐血分别单个核细胞PCRNanog,Oct4,Sox2cDNA装入LV载体

免疫磁珠分选CD34+hEC流式细胞仪鉴定纯度LV载体HSF细胞HEF对照组

HSF-＋＋S＋

HSF-－S－SouthernBlotNanog,Oct4Sox2基因成功NANOG,OCT4和SOX2外表标志，体外分化力量鉴定，畸胎瘤PCR测定分化前后Nanog,Oct4Sox2基因的表达水平实施本工程已具备的条件〔说明已具备的试验手段、技术力气、治理水平、前期科研根底、中试后接产单位及专利获得等状况〕本争辩是不断跟踪近几年干细胞领域的大量争辩成果，特别是诱导干iPSC的探究。脐血来源充分，免疫磁珠分选操作简便。我们已经成功CD133EGFRvIII体，摸索出一套适合本试验室的技术方法，为本课题的顺当进展积存了丰富的阅历和坚实的工作根底。2，所用试验技术成熟：本试验实行的试验方法〔如免疫组织〔细胞〕化学、流式细胞术、应用多年的经典方法或近几年兴的较先进方法，慢病毒载体的构建现已商品化，比较成熟；本工程组由把握以上方法的成员组成，都有多年科研工作阅历。3，我院成立的中心试验室设施一流，拥有三个细胞培育室，一个GMP试验室，三个动物试验室，有SPF24小时开放使用，科研仪器PCR、测序仪、-80-160化学发光凝胶成像系统，以及CO

〔倒置〕显微镜、低温超速离心机、2要的保证作用。4，标准化科学治理：要的促进作用。根底和技术保障。工程实施的经济、社会和环境预期效益本工程社会效益重大：iPSC为诱导性多能干细胞，是当今生命科学的前沿热点，在生物和医学领域具有宽阔的应用前景，有望成为实施再生医学和细胞治疗的重要细胞来源。它不仅对人类生殖发育、细胞分化、器官生成而且对人类疾病的发生、损伤修复、组织器官的再的争辩及开发领域包括表皮干细胞抗老化，利用干细胞重建乳房，靶向肿瘤干细胞，研发抗癌药，利用干细胞培育出神经细胞及肝组织等，对很多重大疾病的治疗均可发挥巨大作用。干细胞的潜在市场浩大，2023年全球干细胞应用市场约有3.3亿美元，202334%的成长率增长。面对如此重973、863打算，国家自然科学基金，国家发改委产业化打算等，大大促进了我国在干细胞领域的进展，缩短了与国际先进水平的差距，有些方面还领先于国外，为我国在生物世纪抢占市场份额，充分挖掘经济效益供给有利条件。预期目的明确：建立几株源自人的iPS细胞，为进一步开发其临床应用价值供给物质条件；同时开发一套转录因子导入培育诱导多能干细胞的技术平台，为最终应用于疾病治疗奠定根底。2023.01-2023.07 2023.01-2023.07 养过程中，鉴定表型，优化增殖条件；2023.08-2023.06 设计引物，从脐血干细胞中扩增Nanog，Oct4Sox2cDNA，并装配到慢病毒载体中；2023.07-2023.07 转染HSF，诱导iPS细胞，筛选出稳定表达上述基因的细胞株，进展干细胞特性鉴定；2023.