第一章7节酶的纯化方法

2、酶的纯化方法现行的方法（根据酶和杂蛋白在性质上的差异而建立的）：（1）根据溶解度的不同；（2）根据分子大小的差别；（3）根据解离电学性质的特点；（4）利用稳定性的差异；（5基于酶和底物、辅助因子以及抑制剂间具有专一的亲和作用的特点。实际有许多方法中往往包含两种或两种以上的因素在同时起作用。（三）根据溶解度建立的纯化方法1.盐析法;2.有机溶剂沉淀法;3.共沉淀法;4.选择性沉淀法;5.等电点沉淀法1盐析法盐析法是古老的、也是目前仍广泛采用的方法。盐析法的原理：球蛋白类在低的盐浓度溶液中，它的溶解度随盐的离子强度升高而增大，表现“盐溶”特性。但是当盐浓度继续升高，超过某一上限值时，其溶解度又会先后以不同速度下降，分别“盐析”沉淀析出。盐析纯化法就是根据酶和杂蛋白在高的盐浓度溶液中溶解度的差别而建立的一种纯化方法。盐析应考虑下述因素：

(1)pH(2)盐

(3)温度

(4)蛋白质浓度

(5)其它(1)pH

控制pH可以提高纯化效果，一般pH可选择的范围不大，大多数情况下，盐析的适宜pH接近于待纯化酶的等电点。有些情况，酶和杂蛋白能形成某种结合，从而干扰盐析分离，此时如控制pH＜5或＞6，使它们带相同电荷以减少络合物形成，这样盐析效果常会有所改善，但应注意酶在这种条件下的稳定性与盐的溶解度。

(2)盐

在纯化的最初阶段，盐的性质产生的影响不一定很明显，仅是随着酶溶液纯度的提高，盐的特征效应就可能突出出来。实践表明，就阳离子来说，一价盐通常比二价盐有效；而阴离子则相反，二价盐比一价盐好。符合这种条件的盐有硫酸铵、硫酸钠等。硫酸铵最常用，它的最大优点是溶解度大，溶解的温度系数小(0℃，706克／升；25℃，767克／升)即使在低温下的溶解度范围内，几乎所有蛋白质都能盐析出来。(3)温度

从酶的稳定性和溶解度看，盐析温度一般以控制℃在30左右为宜。(4)蛋白质浓度这是一个很重要的因素，它一方面能影响盐析效果的重现性，因为蛋白浓度不同，分级分离纳范围也往往会发生变动；另一方面，蛋白浓度在100μg/ml以下，盐析一般很因难，有时甚至根本不能形成沉淀。在200μg—1mg／ml范围内，沉淀虽能生成，但时间校长，而且回收率往往不高。为了获得较好的盐析效果，蛋白浓度应在1mg／ml以上。(5)其它

盐析沉淀通常至少要近一小时才能完成，沉淀可通过离心或压滤和母液分离。盐浓度低时，离心比较容易，而过滤较难；盐浓度高时，需要高速离心，但过滤较易。

盐析法的优点：简便、安全(大多数酶在高浓度盐溶液中相当稳定)、重现性好。缺点：分辨率低，纯度提高不显著，同时为了下一步纯化有时还需脱盐。

2.有机溶剂沉淀法原理:不同的蛋白质需要加入不同量的有机溶剂才能使它们分别从溶液中沉淀析出。有机溶剂在这个过程的主要作用是降低溶液的介电常数，因为分子间的静电引力和溶剂的介电常数成反比，加入有机溶剂，蛋白质分子问的引力增加，溶解度降低。有机溶剂的另一作用是部分地引起蛋白质脱水而沉淀。但是有机溶剂的浓度和蛋白质溶解度之间目前还没有一个可用的关系式。有机溶剂沉淀法应考虑的因素是：

(1)温度

(2)pH(3)离子强度

(4)有机溶剂

(1)温度

这是非常重要的因素，因为大多数蛋白质遇到有机溶剂都很不稳定，特别是温度较高的情况(例如室温)下，极易变性失效，故操作过程通常应控制在0℃以下。而且有机溶剂必须预先冷却到-15—-20℃，然后在搅拌下缓慢地加入。沉淀析出后应尽快地在低温下离心分离，获得的沉淀也应立即用冷的缓冲液溶解，以降低有机溶剂浓度。个别情况下，酶对有机溶剂比较稳定，此时操作可在较高温度(例如室温)下进行，这样有利于除去较多的杂蛋白。(2)pH

蛋白质在等电点的溶解度最低，有机溶剂沉淀通常也多选在尽可能靠近待纯化酶的等电点pH条件下进行。如肌肉酶的分离在pH6.5效果一般较好，pH调整可用0.05M的缓冲液。(3)离子强度

中性盐大多能增大蛋白质的溶解度，并能减少变性影响。在进行有机溶剂分级沉淀时，如果添加适当浓度的中性盐，如5—10％的硫酸铵，往往有助于提高分离效果。但盐的浓度一般不宜超过0.05M，否则沉淀不好，甚至沉淀全无，同时有机溶剂耗费也大。(4)有机溶剂

丙酮的分离效果一般最好，引起失效的情况与程度也较少(小)。除了丙酮外，乙醇和甲醇等也常用。

3共沉淀法

原理:这是利用离子型表面活性剂如SDS(十二烷基磺酸钠)、非离子型聚合物如聚乙二醇、聚乙烯亚胺以及丹宁酸、硫酸链霉素等，在一定条件下能与蛋白质直接或间接形成络合物，使蛋白质沉淀析出．然后再用适当方法使需要的酶溶解出来，除去杂蛋白和沉淀剂，从而达到纯化目的的方法。4选择性沉淀法

原理:某些多聚电解质如聚丙烯酸、硫酸糊精以及磷、砷、硅的钨、钼、钒等的杂多酸常能在极低的浓度条件下，选择性地和某种或某类酶结合沉淀析出，其选择性的机制尚不清楚。以聚丙烯酸(PAA)为例，它的分子量近9000或近300,000的聚合物对某些蛋白酶、磷酸酯酶和溶菌酶等有选择性沉淀效果，故可用于这些酶的纯化.

5等电点沉淀法原理：蛋白质的溶解度随分子间引力增大而变小，当其它条件相同时，分子间的引力以蛋白质处于等电点状态最大，因而容易析出沉淀。不过由于蛋白质在等电点时仍有一定的溶解度，故沉淀往往不完全，一般很少单独使用，更多的是作为其它沉淀法中的一个组合条件。但是，这种方法有时可用于对付杂蛋白种类较多的样品，因为将这种样品的pH调整至某一值后，不仅会使处于等电点状态的蛋白质沉淀，也可使处于等电点两侧带相反电荷的杂质形成复合物而沉淀，从而可除去大量杂蛋白。（四）根据分子大小的建立纯化方法：１.胶过滤(层析)法；２.筛膜分离法；３.超离心法分离。１.胶过滤(层析)法原理：必须以层析的方式进行．柱中填充分子筛介质,用于生物大分子分离的分子筛介质是具有一定孔径的球状凝胶物质.层析柱中装入某种孔径的凝胶物质以后,再加入待纯化样品,然后用适当的溶剂或缓冲液使该样品自上而下地扩展.这样,样品中的各种分子就将按其分子大小表现不同的层析性态而分离.大于凝胶孔径的分子不能进入胶粒内,它们只能沿胶粒间隙扩展,因而“走”的是一条较“直”的“路”,表现出较快的移动速度;反之,小于凝胶孔径的分子,由于它们能自由进出胶粒内外,按照分子热运动的规律,其运动轨迹“迂回曲折”,因此,表现较慢的下移速度.所以只要待纯化样品通过一定长度的层析柱后,不同大小的分子就将按先后顾序依次流出,彼此分开.胶过滤(层析)法原理胶过滤(层析)法应考虑的因素:(1)胶的选择（葡聚糖凝胶，聚丙烯酰胺凝胶，琼脂糖凝胶）;(2)柱层析的过程与要求；

(3)胶过滤中胶的用量（与样品体积有关）;(4)其它有关问题(样品，洗脱液，胶的再生与保存）．

(1)胶的选择

作为分子筛的凝胶是由亲水的线状聚合物通过交联剂交联、或通过聚合物自身缔合组成具有网眼结构的胶粒物质。网眼孔径大小由交联程度或聚合物的浓度决定。最常用的凝胶有:(i)葡聚糖凝胶

(ii)聚丙烯酰胺凝胶

(iii)琼脂糖凝胶

葡聚糖凝胶：这是分子量从几万到几十万的葡聚糖通过环氧氯丙烷交联而成的网状结构物质。可用于分离分子量1000—500，000的分子。以商品SephdexG—为例，G—以后的数字为胶膨润时吸水量的10倍，如Ｇ—25就表示该胶物质每1g能吸水2.5m1，这个数字越大说明吸水量越高，孔径也越大，更适于分离较大的分子.此外,还有SephdexLH—，是兼具亲脂性和亲水性的凝胶，可用于脂类化合物的分离；SephacylS—可用于水溶液和有机溶剂系统，或高浓度氢键解离试剂存在的系统．各种葡聚糖凝胶G(2)柱层析的基本过程与要求

过程：层析介质的平衡；装柱；加样；扩展(包括洗涤和洗脱)以及与此同时进行流出液成分(蛋白质或酶活性)的检测和分部收集。

分离效果的标准：分辨率高，回收率高；稀释度小和速度快。其中分辨率可用Rs权衡：

Rs＝两峰带间距离／峰带宽当Rs＝1.2时，通常认为基本上达到了分离要求.胶过滤法的特点:

不受pH、盐和温度等的影响；操作条件温和、简便，勿需特殊的再生处理，适于各种分子的分离．

2.筛膜分离法

原理:筛膜分离法也即超过滤分离法，它是利用微孔超滤膜仅能选择性地透过一定大小的分子而达到分离目的一类方法。

特点:它操作比较简单，条件也温和，但是只能达到粗分的要求。

3超离心分离法

原理:这是利用样品中不同大小的分子在相对离心力场达80，000一250，000g的条件下分布不同而进行分离纯化的一种方法。

应用:此法主要用于病毒、细胞颗粒体等的制备，对分子量较小的酶或蛋白质分离效果一般不佳，分辨率不高而且费时.五.根据解离电学性质的特点建立的纯化方法:1.吸附交换(层析)法;2.电泳法;3.聚焦层析法。

1吸附交换(层析)分离法这是最常用的一类纯化方法。

原理:利用待纯化样品中不同的分子和吸附剂间的吸附与解吸性质的不同而达到分离。这类分离或以静态吸附方式进行，或以层析吸附方式进行。过程:有三个主要环节：加样吸附、洗涤和洗脱。实际上每一个环节都包含目的酶和杂蛋白的分离，因此是一种十分有效的纯化方法。吸附交换分离法原理示意

吸附剂:根据吸附机制的不同可分为三种类型：

1.“传统”的物理吸附剂;2.羟基磷灰石;3.离子交换吸附剂。

(1)物理吸附

传统的物理吸附剂常用的有白土、氧化铝和磷酸钙胶等。其中白土是以硅酸铝为主要成分的具有强吸附力的一类粘土，包括皂土、高岭土和活性白土等；氧化铝根据制备方法不同有多种成品，磷酸钙胶可从氧化钙和磷酸三钠直接制备。物理吸附的原理:

一般认为它是由于吸附剂界面分子和样品分子间相互作用的范德华力所引起；因而选择性不强预见性较小，往往需要通过实验加以确定。这类吸附剂应用很早，但没有得到更大的发展，原因可能也就在于此。(2)羟基磷灰石吸附：近年来应用羟基磷灰石作为吸附剂的日期增多，它是一种微晶型的磷酸钙制品。原理:

一般认为是，这种晶体表面的钙离子能和蛋白质的负电性基团相互作用，而磷酸基团则能和正电性基团结合。如果在系统中有对钙亲和力更强的离子(如柠檬酸盐)存在时，羟基磷灰石对蛋白质的吸附能力就会显著下降，但是其它盐如NaCl等，即使浓度很高，也不会影响蛋白质的负电性基团和钙之间的结合。反之，这些盐可以大大降低正电性基团的作用，也就是说在盐浓度很高的溶液，羟基磷灰石可用来吸附酸性或中性蛋白，而排除碱性蛋白，这样就可以省去吸附前的脱盐透析平衡。羟基磷灰石对蛋白质的吸附容量比较高，在一般吸附操作条件下约50克／升床体积。

(3)离子交换吸附原理:这类吸附是在蛋白质的解离基团与离子交换剂的解离基团之间的解离交换过程中进行的。由于各种蛋白质和离子交换剂在不同条件下有相应不同的解离状态，因此通过选择适当的交换剂、控制交换和洗脱条件，就可将酶和杂蛋白分离开来。

分类:离子交换剂包括两个部分：载体和离子交换基团。常用的吸附剂有：离子交换树脂、离子交换纤维素和离子交换凝胶。离子交换树脂是以交联的聚苯乙烯树脂等为载体，再导入相应的解离基团而成;离子交换纤维素是目前酶的纯化工作中用得最多的交换剂，它是以亲水的纤维素为载体，在引入相应的交换基团后制成的;离子交换凝胶以葡聚糖凝胶或琼脂糖凝胶为载体，导入相应的交换基团后制成。

按离子交换基团分类:

离子交换基团是交换剂表现功能的基础，它的性质决定交换剂的类型与强弱。带阳电荷解离基的交换剂在离子交换过程中能吸附荷阴电的离子，故称为阴离子交换剂；反之，带阴电荷解离基的交换剂可对付荷阳电离子，称为阳离子交换剂。

离子交换剂的选择依据：首先是待分离酶(或蛋白)的稳定性;

其次是强型和弱型交换剂的选择;

第三是交换容量,交换容量有两方面的含义,一为总的交换容量；一为实效交换容量。前者是指每克干离子交换剂上带有的总交换基数目，其中包括潜在的交换基；后者是指特定的实验条件下实际可用于交换的交换基数目;

第四是流速,纤维素柱的流速一般低于凝胶。

待分离酶(或蛋白)的稳定性的选择:(i)如果待分离的酶在低于其pI的pH条件下稳定，则可选用阳离子交换剂;(ii)如果待分离的酶在高于其pI的pH条件下稳定，则采用阴离子交换剂;(iii)如果待分离的酶在高于和低于其pI的pH条件下都稳定，则两种交换剂都可以考虑。

交换剂类型的选择:(i)如果待分离酶的pI偏向极端(小于6或大于9)一般应考虑强型交换剂，因强型交换基能在广泛的pH范围内保持解离状态，而弱型的交换基的解离和pH条件密切相关;弱型阳离子交换剂在pH6以下，阴离子交换刘在pH9以上开始不带电荷失去交换能力。

(ii)如果待分离的酶既可应用强型交换剂，也可用弱型交换剂，但是酶不稳定，此时应优先考虑选择弱型。

优点:

离子交换吸附法是目前仅次于盐析的一种常用的纯化方法。它的适用面广，几乎所有的蛋白都可用此法分离；其次是它具有很高的分辨率和回收率。

2电泳分离法原理:

这是根据各种蛋白质解离、电学性质上的差异，利用它们在电场中的迁移方向与迁移速度不同而进行纯化的一类方法。特点:这类方法可以达到很高的分辨效果，但在实验放大和样品回收方面有一定困难，因此目前主要用于蛋白质的分析和小规模制备。

常用的电泳方法可大致分为以下几种类型：

(1)自由界面电泳它需要复杂的设备，而且待分离物质往往不能完全分开，故现在仅用于纯酶均一性的检定。

(2)区带电泳

这是在惰性支持物上进行的一类电泳分离分析法。和前一类相比，它具有简便灵活，无对流扩散，可达到完全分离等优点。区带电泳分类:

第一种最简单的是膜电泳，它以滤纸、醋酸纤维素薄膜为支持物，简易快速，但分离量很低，只能用于蛋白质粗分析。第二种区带电泳是粉末电泳，常用的支持物为淀粉与醇化的纤维素。

第三种是凝胶电泳，这种电泳兼具分子筛效应，因而可达到很高的分辨率。早期用的支持物为淀粉胶，近年来主要应用聚丙烯酰胺凝胶，这种胶能更严格地控制胶孔径。SDS(3)等电聚焦电泳

这是利用两性电解质载体--一种多乙烯多胺与丙烯酸加合反应得到的同系多异构体混合物，它们具有相近的pK值与pI值—在电场作用下能形成连续平滑的pH梯度，待分离样品中各组份在电泳过程中，又能按照各自的等电点聚焦到相应的pH梯度位置上从而达到分离目的。等电聚焦图谱3聚焦层析

特点:聚焦层析是根据蛋白质的等电点差别进行层析分离的纯化方法。它不需要特别的聚焦电泳装置，但兼具等电聚焦电泳的高分辨率和柱层析的简便性两种特点。

原理:当用特定的多缓冲液滴定和淋洗填装在层折柱中的特定多缓冲交换剂时，随着这种缓冲液的扩展，就会在层析柱中自上而下地建立起pH梯度；而该层析柱中的蛋白质也将随多缓冲液的扩展按各自的等电点聚焦于相应的pH区段，并随扩展过程pH梯度的逐渐下移而下移，最后分别从层析柱先后洗出，达到分离纯化的目的。

六．利用稳定性的差异建立的纯化方法:

选择性变性法就是根据酶和杂蛋白在某种条件下稳定性的差别，而采取的一类可一举除去大量杂蛋白的简便纯化方法。

1.选择性热变性法;2.选择性酸碱变性法;3.选择性表面变性法。

1选择性热变性如果待分离的酶相当耐热，那末就可在严格控制的条件下，将酶溶液迅速升温到它稳定的温度(如50-70℃)，并保温一定时间(如5-15分钟)，而后迅速冷却，这样大量不耐热的杂蛋白就将变性析出，离心除去后，酶的比活力就将大大提高，而总活力损失很少或者根本不损失，有时甚至还可能有所提高。

2酸碱变性法如果能严格地将酶溶液控制在酶稳定的pH范围内用酸碱处理一定时间，进行选择性变性，同样也可达到有效的纯化目的。

和选择性热变性相比，酸碱变性应用得不多，主要原因可能在于操作较为复杂，而且纯化效果较差。

3表面变性法利用酶溶液和惰性液体(如氯仿)混合振荡，造成选择性表面变性来制备过氧化氢酶、醇脱氢酶和α-淀粉酶等。振荡处理后通常分成三层：上层为未变性蛋白；第二层为乳浊状变性蛋白；下层为氯仿。这种处理时间不宜长，否则将导致所有蛋白质变性。七根据专一的亲和作用建立的纯化方法

1.亲和层析法;2.亲和电泳法1亲和层析法亲和层析法是据生物分子间某种特有的亲和力而建立的一种新型纯化方法。

原理:酶和它的底物(包括辅助因子)、底物类似物或竞争性抑制剂通常都具有较高的亲和力，能专一而可逆地形成酶—配基络合物。因此，如果将这类配基偶联固定于样品中，那么，它就能迅速而有选择性地将相应的酶分子从溶液中分离出来，达到和其它杂蛋白分离的目的，这就是亲和吸附。2.亲和电泳法:

亲和电泳法是将亲和层析和聚丙烯酰胺胶电泳结合在一起的高分子分离分析方法。

原理：当相应的亲和配基共价偶联于电泳胶(即载体，通常多用聚丙烯酰胺)上以后，由于具有亲和作用的待分离分析成份和配基具有结合力，在电泳过程中不会移动，而不具亲和性的成份将按各自的电泳速度而分离开来。

八结晶所谓结晶，是指分子通过氢键、离子键或分子间力，按规则且周期性排列的一种固体形式。

由于各种分子形成结晶的条件不同，也由于变性的蛋白质和酶不能形成结晶，因此，结晶既是一种酶是否纯净的标志，也是一种酶和杂蛋白分离纯化的手段。

为了获得纯净、粒大、收得率高的结晶应注意：

(1)酶溶液应该达到相当的纯度除了少数例外，不纯的溶液是不能得到结晶的。

(2)酶的浓度要恰到好处一般以1—5％为宜，不宜小于0.2％，浓度高虽然较易结晶，但如果过于饱和，只能获得大量微晶，难以形成大晶体。结晶方法：1.盐析结晶2.有机溶剂结晶3.透析平衡结晶4.等电点结晶九.浓缩与干燥1.浓缩真空浓缩2.干燥方法真空干燥冷冻干燥喷雾干燥气流干燥吸附干燥四酶的纯度和产量

（一）活力测定在酶的抽提和纯化过程中，为了了解所选择的方法和条件是否适宜，每一步骤前后都应进行酶的活力测定，作出总活力与比活力的比较。

如何进行酶的活力测定：

(1)如果待分离的酶已有报导，可参考它所采用的测定方法和条件；

(2)如果需要另建新的测定系统，那么就得先对该酶的作用、动力学性质等有所了解，据此来选择合适的底物和底物浓度、以及最适的反应pH和温度等，同时确定一种相应的测定方法。测酶活时的注意事项:

一是测定用的酶反应时间应选择在酶反应的初速度范围内；二是测定用的酶量必须和测得的活性有线性关系。

纯化过程中的酶活力测定还应考虑三个问题：

(1)由于测定工作量校大，而且有时“立等”结果，所以要求测定方法快速、简便，而准确度在一定程度上比较次要，甚至可容许5—10％的误差，故常用分光光度法、电学测定法等测定;(2)由于分离纯化过程可能丢失辅助因子，因此有时需要在反应系统中加入相应的物质，如煮沸过的抽提液、辅酶、盐或半脱氨酸等；

(3)由于纯化过程中引入的某些物质可能对酶的反应和测定有影响或干扰，故有时还应在测定前进行透析或加入螯合剂等。

测定酶活力的表示方法:

酶的活力通常采用国际酶学委员会规定的单位表示，但是在纯化工作中，为了方便，也可采用自行规定的单位，如直接以光密度值表示.从酶的活力测定得到的直接结果是样品中酶的浓度，即单位数／毫升。由此进一步算出样品中总的单位数，即总活力;以及单位重量的蛋白质中酶的单位数，即比活力，如单位数／毫克蛋白，或单位数／毫克蛋白氮。

测蛋白含量常用的方法有：

(1)紫外吸收法，此法简便快速，不损耗样品，但干扰因素很多；

(2)双缩脲法,较简单；

(3)酚试剂法,较复杂，但灵敏度、准确度都比较高。

(4)蛋白质通常采用凯氏定氮法。一般比活力愈高，酶的纯度也较好，但是它不能说明实际的纯净程度是多少。

（二）纯化方法与条件的比较标准在酶的分离工作中，总活力用于计算某一抽提或纯化步骤后酶的得率或回收率(y)；比活力则用于计算某一纯化步骤的纯化效果，即纯度的提高(e)。y(收率)=——————————某步骤前的总活力某步骤后的总活力e(纯度提高)=——————————某步骤前的比活力某步骤后的比活力

抽提或纯化某步中，如果有多种方法或条件可供选择时，一般采用下式进行权衡：

loge＝logE·logy／logYe和y分别表示用某种方法或条件进行一次纯化后纯度的提高与回收率；G和Y分别表示用上述方法或条件重复多次后总的纯度提高与总的回收率，这两项是推算出来的。

例如，有A、B二种方法或条件可供选择，用A法重复n次以后可得到Ea和Ya；以Ea为标准，用B法要得到同样的Ea，需要重复n次，由此就可算出相应的Yb．比较Ya和Yb就能作出判断。

三纯度的标准纯度提高和回收率的鉴定能帮助我们选择纯化方法与纯化条件。但是经过一定的纯化步骤后，为了了解所获得的样品是否均一纯净还要进行纯度鉴定。酶均一纯净性的鉴定有以下几种方法:1．溶解度法这是老方法，由于所需样品量较大，已很少采用．2.电泳法常用的有醋酸纤维素薄膜电泳、聚丙烯酰胺不连续胶电泳和聚焦胶电泳，特别是后二者有极高的分辨力。3.超离心法

在高达65，000rpm的离心力场情况下观测离心谱带，根据沉降峰带是否分裂、是否有“肩”、是否对称等可以作出均一与否的判断。4．免疫学法纯化的酶样品在琼脂胶上与相应的抗体进行免疫反应，根据得到的沉降线可以判断样品的纯度。如果此法以免疫电泳的方式进行，则更为灵敏。第四节酶的剂型与保存为适应各种需要，并考虑到经济和应用效果，酶制剂常以四种剂型供应：

1.液体酶制剂

2.固体粗酶制剂

3.纯酶制剂

4.固定化酶制剂

一.液体酶制剂制备与应用:

这包括稀酶液和浓缩酶液。一般在除去菌体等杂质后，不再纯化而直接制成或加以浓缩。只适于就近的某些工业部门如纺织工业等直接应用．特点:

比较经济，但不稳定，而且成份繁杂.

二.固体粗酶制剂

制备与应用:

这类制剂有的是发酵液经过杀菌后直接浓缩干燥制成；有的是发酵液滤去菌体后喷雾干燥制成;有的则加材淀粉等填充料。这些制剂多用于皮革软化脱毛、水解纤维素等方面。这类制剂中也有的是在发酵液或抽提液除去杂质，并经初步纯化后制成，如用于洗涤剂、药物等生产的酶制剂。

特点:

固体粗酶制剂便于运输和短期保存，成本也不高。

三.纯酶制剂

用途:包括结晶酶在内，通常用作分析试剂或用作医疗药物，要求有较高的纯度。用作分析工具酶时，除了要求没有干扰作用的杂酶存在外，还要求单位重量的酶制剂中酶活性达到一定单位数。用作基因工程的工具酶则要求不含非专一性的核酸酶，或完全不含核酸酶。作为蛋白质结构分析对象的酶必须“绝对”纯净，而注射用的医用酶则应设法除去热源类物质。

热源类物质：定义:是染菌后细菌分泌出来的一类类毒素，带有这类物质的制剂注射到动物体后，能引起体温升高。热源物质属于糖蛋白，分子量在十万以上，因细菌来源不同有小的差异。

特点:热源物质对热相当稳定，往往要通过长时间高温作用，例如180-220℃，二小时以上的处理才会分解；同时很耐酸，不过在碱中，例如pH＞10，四十八小时的作用下会逐渐破坏；热源物质对氧化剂十分敏感，在新鲜配制