标准解读

《GB/T 22915-2008 口蹄疫病毒荧光RT-PCR检测方法》是一项国家标准，旨在规范口蹄疫病毒（FMDV）的快速、准确检测。该标准详细描述了使用荧光定量逆转录聚合酶链反应技术（Fluorescent Quantitative Reverse Transcription Polymerase Chain Reaction, FQ-RT-PCR）对疑似感染样品中口蹄疫病毒核酸进行定性和定量分析的方法流程。

标准首先明确了适用范围，指出其适用于动物组织、血液、唾液等多种类型样本中口蹄疫病毒RNA的检测。接着，在术语和定义部分，对实验过程中涉及到的专业词汇给出了清晰定义，确保使用者能够准确理解相关概念。

对于试剂与材料的选择，《GB/T 22915-2008》列出了所需的具体项目，并对其质量要求做出了规定。这包括但不限于引物序列、探针设计以及阳性对照品等关键组分，以保证实验结果的有效性和可靠性。

在仪器设备方面，除了基本的实验室设施外，还特别强调了需要配备具有特定功能的实时荧光定量PCR仪，以便于数据收集与分析。

操作步骤被细分为几个阶段：样本采集与处理、RNA提取、逆转录反应设置、PCR扩增条件设定及结果判读。每个环节都有详尽的操作指南和技术参数建议，比如推荐使用的裂解液配方、最佳退火温度范围等，旨在指导实验人员顺利完成整个检测过程。

此外，《GB/T 22915-2008》也考虑到了可能出现的问题，提供了相应的解决策略或预防措施。例如，如何避免交叉污染、提高灵敏度的方法等，有助于提升检测效率和准确性。


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  • 现行
  • 正在执行有效
  • 2008-12-31 颁布
  • 2009-05-01 实施
©正版授权
GB/T 22915-2008口蹄疫病毒荧光RT-PCR检测方法_第1页
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文档简介

犐犆犛１１．２２０

犅４１

中华人民共和国国家标准

犌犅／犜２２９１５—２００８

口蹄疫病毒荧光犚犜犘犆犚检测方法

犘狉狅狋狅犮狅犾狅犳狌狀犻狏犲狉狊犪犾犳犾狌狅狉狅犵犲狀犻犮犚犜犘犆犚犳狅狉犳狅狅狋犪狀犱犿狅狌狋犺犱犻狊犲犪狊犲狏犻狉狌狊

２００８１２３１发布２００９０５０１实施

中华人民共和国国家质量监督检验检疫总局

发布

中国国家标准化管理委员会

书

中华人民共和国

国家标准

口蹄疫病毒荧光犚犜犘犆犚检测方法

ＧＢ／Ｔ２２９１５—２００８

中国标准出版社出版发行

北京复兴门外三里河北街１６号

邮政编码：１０００４５

网址ｗｗｗ．ｓｐｃ．ｎｅｔ．ｃｎ

电话：６８５２３９４６６８５１７５４８

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开本８８０×１２３０１／１６印张０．７５字数１６千字

２００９年４月第一版２００９年４月第一次印刷

书号：１５５０６６·１３６４４７

如有印装差错由本社发行中心调换

版权专有侵权必究

举报电话：（０１０）６８５３３５３３

书

犌犅／犜２２９１５—２００８

前言

本标准参考了世界动物卫生组织（ＯＩＥ）《陆生动物诊断试验和疫苗手册（哺乳动物、禽鸟与蜜蜂）》

（第５版）。

本标准的附录Ａ、附录Ｃ为规范性附录，附录Ｂ为资料性附录。

本标准由中华人民共和国农业部提出。

本标准由全国动物防疫标准化技术委员会归口。

本标准起草单位：中华人民共和国深圳出入境检验检疫局、中华人民共和国云南出入境检验检疫

局、中国检验检疫科学研究院。

本标准主要起草人：花群义、杨云庆、秦智锋、周晓黎、卢体康、董俊、陶虹、阮周曦、叶弈优、林祥梅、

吴绍强。

Ⅰ

书

犌犅／犜２２９１５—２００８

口蹄疫病毒荧光犚犜犘犆犚检测方法

１范围

本标准规定了口蹄疫病毒荧光ＲＴＰＣＲ检测的操作方法。

本标准适用于动物及其动物产品中口蹄疫病毒的检测。

２缩略语

下列缩略语适用于本标准。

２．１荧光犚犜犘犆犚

荧光反转录聚合酶链反应。

２．２犆狋值

每个反应管内的荧光信号达到设定的阈值时所经历的循环数。

２．３犚犖犃

核糖核酸。

２．４犇犈犘犆

焦碳酸磷酯。

２．５犘犅犛

磷酸盐缓冲盐水，配方见附录Ａ。

２．６犜犪狇酶

犜犪狇ＤＮＡ聚合酶。

２．７犉犕犇犞

口蹄疫病毒。

３原理

根据口蹄疫病毒各型共有的基因特定序列的保守片段，合成一对通用的特异性引物和一条通用的

特异性探针。荧光探针的５′端标记ＦＡＭ荧光素，３′端标记ＴＡＭＲＡ荧光素，３′端的淬灭基团在近距离

内能吸收５′端报告荧光基团发出的荧光信号。但在扩增时，由于犜犪狇酶的５′→３′的外切活性，在延伸

到荧光探针时，将其切断，两基团分离，淬灭作用消失，荧光信号产生。因此，可以通过检测荧光信号对

核酸模板进行检测。

４材料与试剂

４．１仪器与器材

４．１．１荧光ＲＴＰＣＲ检测仪。

４．１．２高速台式冷冻离

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