讲义说明分析

-可见分光光度法(UV-概电磁辐紫外-原仪Lambert-Beer定原仪10.6紫外-可见分光光1、溶液对光的吸光互补

黄580-橙600-

绿500-

青490-青480-黄蓝，就是

650-

紫400-

450-概黄580-橙600-

绿500-

青490-青480-光的互补：黄

650-

紫400-

450-亚甲蓝蓝色：吸收白光中黄色的Cr2O72-黄色：吸收白光中蓝2、紫外可见吸收黄580-橙600-

500-

青490-青480-Cr2O72-溶液的

650-

紫400-

450-UV-Vis吸收光谱描述不同波长下物质对光的ε或A波长—：紫外区200-可见光区400-A：物质对光的吸收程吸光系数ε：物质在特A：物质对光的吸收程吸光系数ε：物质在特定波长的吸光能77

2-溶液吸收光3紫外可见分光光特点灵灵敏度检测限为10-4-10-误差较大，一般0.5%-Cr2O72-、MnO4-的吸收电磁辐射与物质的相互作用1、电磁辐射和电2、电磁辐射与物质的相互作1、电磁辐射和电（1）电磁辐射的性质——波动性和电电磁辐射是一种不需媒介 的高速的光子

波长()nm频率(波数(cm-?=1/= （c=3.0X108?200nm光的波数？频率=1/=107/200=cT=c/（c=3.0X＝c/＝3.0X1010/2X10-5=2、微粒微粒性的表征参数：光子的能量

6.63X10-34?200nm光的?200nm光子能量E=h=6.6262X10-34J·s×1.5×1015s=9.9393X10-E=hc/=6.6262X10-34J·s×3.0X1010÷2X10-光谱远紫（真空紫外

近红

中红

可可

760 ~~2.5 ~

2.5~

25~1000E=h=hc/，一定波长的光具波长越长(频率降低)，光子的能量降2磁物质分子选择性吸收光物质分子内部能级

光谱记录电磁辐射强度I～I发 热 △Eeh=hC光跃能跃能分子外层电子分分子振转UV-VIS,IR属于什么分子光吸收光谱的相关A、T或lg末端吸

肩峰吸收谷

紫外-可见吸收紫外-可见吸收光谱的1、有机化合物的2、电子能级——电子3、UV-VIS吸收光谱的4、紫外吸收1、有机化合物的外层电子σ电子、π电子、n:O- CH3C-πσ n电判断下列化合物结构中的外层电子类OH2子能级——

分子外层电子多个原 分nπσee电子跃迁→*n→*n→*→*n*所需能量较大，吸收峰在200nm左右，远紫外*孤立的→*跃迁吸收峰在200nm共轭的*n*所需能量最小，吸收峰在200-400nm范围。33uv-vis分子外层电n、

吸收外来△Ee=hC/n→→

A、T或lg峰位max－－电子跃迁能级间的能量峰强A－－电子

紫外-可见吸收光

n→*R带OHK带

和基团的特征吸收带。－C=O-,-K特征：max>210nm，max越大。

特征：max出现在260nm附近特征：E1带的 180nm，max为E2带的 200nm，max为苯环→*E2带：20OnmB带苯环→*E2B带共轭→*K带B带

→*K带n→*ROB带吸收带与分子结构的关系跃迁类型max吸收带分子结构特征47000~8000芳香环的双键吸收芳香环的共轭双键吸收>10,K共轭多烯、-C=C-C=O-等的吸收B芳香环、芳香杂环化合物的芳香环骨架吸收。有的具有精细结构RC＝ONO2n电子基团的吸收OR、-NH２-NHR、-X 分子外层电子 吸收△Ee=hC/4种电子n*跃迁落在紫外

R、KB、E2相关术语（生色团、助色团、红移、蓝移、增色、减吸收带与分子结构的关系跃迁类型吸收带分子结构特征47000芳香环的双键吸收芳香环的共轭双键吸收K共轭多烯、-C=C-C=O-等的吸收B芳香环、芳香杂环化合物的芳香环骨架吸收。有的具有精细结构RC＝O，NO2n电子基团的吸收BA不同共轭结构物质吸收光谱的BA形状以及max——定性分析判断是否有共轭 同一物质，吸收光谱的形状相 浓度不同时，Amax不 ——定量分析的基 由A对物质进行定

1、2、3、紫外-可见分光光度法的基本原Lambert-BeerLambert-Beer定k吸光Lambert-Beer定律相偏离Lambert－Beer定律的因透光率T和吸光度单色光

IT=IlTlA=lg(1/T)=-lgT=lgA表征物质对光的吸收程度，是一个没有单位的数A布格

吸光度与液层厚度lAkl吸光光光l吸光 样 光

样 样比耳(Beer吸光度与浓度的Akl光吸光光光l光l吸吸光l光Lambert-Beer布格(Lambert)：A∝比耳(Beer)：A∝单色光

AA＝klA：吸光度A＝-lg l：吸光液层厚度(光程长度：吸光溶液的浓 吸光k定义：在某一波长下，溶液浓度为（1g/100mL）液层厚度为1cm计算式：k cc单位mol·L-1时，k用表示，单位：L·mol-1·cm-c单位g·100mL-1时，k用 表示，单位100mL·g-1cm吸光系1cm①摩尔吸光系数

②百分吸光系E1%LLol1cm1cm

llεεME1%吸光kC增大C增大ε②(max,εmax)是吸光物质定性的重要参 ③εmax反映了光度法定量测定该物质可能达到的灵敏

灵敏度高;104>ε>102 Lambert-Beer定律相吸光k的计例：某化合物的浓度为4.2×10-4g/100mL，用2.0cm EE

c

εME250623 Al lgT

＝3.49103(Lmol1l lC 1.0

EE 10

E1cm

物质 的吸收池测量时A为0.600,若同一物质的样 AlC＝ 2CA2C0.3002.01032

mol1)1 1吸光3.0cm和4.0cm吸收池测定时，A各是多少小A＝klA＝kl吸收光谱法的基本定律，A与c成正比，T与c是指数关系-k吸光系k是吸光物质的特征，表明该物质1cm吸光系数1cm①摩尔吸光系数

②百分吸光系E1%LLol1cm100mLg1cm

llεεME1%lambert-Beer定律的吸光系数k的计物质的百物质的浓 4Beer定律的因BeerA＝klc化学光学因化学重铬酸盐水溶液严格地稀释2倍（表观浓度7Cr2Ｏ72-＋H2Ｏ≒CrＯ42-＋2H平衡右移，Cr22-少于17强酸溶液中测Cr27强碱溶液中测（1）化学A＝klc光学因L-B定律对入射光的要求——非单③散射和反非平l非单l 10(k1k2Ak1cllg I01I02若k1=k2，A若k1≠k2，A与c不成正比，即偏离Beerk1与k2定义：不在谱带范围内的与所需波长相 在UV的边缘波段（末端吸收）处较对策：注意养检测时避免在边缘波段测定（220~400nm测量可避免参比溶液补③散射和反参比溶液补散反 光A

AlA

样 消除吸收池、溶剂、试剂对光散射反射或0

非平部分光倾斜通过吸收池，厚度l增大,影响测量平行的单色光垂直入选用max处或肩峰处测定（ε大，测量灵敏度高吸光质点之间无相互作 分光光度计的测量透光率的测量误差△T来自仪器的噪

C Tlg

A值控制在0.2-0.7之(或T值在20%- -比尔定律的分析溶液浓度的测定 A＝bc＝k

定量 单组分样品定量方法1、吸光系2、标准3、对照1、吸光系数法利用手册或文献查到的

EE

值，根据下cε

或c

% 硫酸长春碱的含量测5.40水5.0,1L，再加入无水乙醇稀释至50.，摇匀后样品浓度0.0021g/10。置cm9乙醇为空白，在263nm08Enm=180,cc

0.3780.00210g/100mL1801样品0.00212、标准例：药物中微量Fe含量的Fe本身在UV－vis

pH2~9显色时温度：常标准 定量测定量的方法：标准

Ⅱ测做显色产物邻菲罗啉铁的吸收光谱，选择最大测定波测定波λmax=508nm邻菲罗啉铁的吸收光测量5个标准溶液和样品溶液508nm下的吸光CAFe标准溶

标

标

标

标

标

标

样显色A

2.50mL 显 2.50mL邻菲罗啉（Fe2+→橙红色配合物 0.130 0.682 定3作标准曲

A1～A5确定标准工作从曲线上找到Ax对应

0

4 502、标准绘制A-cA＝bc＝k

0

4 50

0

4 50的吸光度值控制在0.2～O.7之间。3目的：测 提取液中绿原酸的浓03n0.5802×1L，用1.0cm的吸收池33nm为0.60此样品溶液的浓度： 2CA2C0.5402.01032

molL-1)1 13、对照c样c样A标A标c标

两式的和l = 定性分析结 光谱的形2maxshmin3比较吸收光谱的一致性峰数、峰位、峰 光谱的整比较吸收光谱特征maxshmin•化合max(lg)甲去甲结论：两样品的吸光系数不同，一定不是同一化合分子结构不同，相同的max值,吸光系数结论：两样品的吸光系数不同，一定不是同一化合3比较吸光度比值的例：维生素B12的鉴max分别为278nm、361nm及550nm，吸光度的比值A361nm/A278nmE361nm/E278nm1.70~A361nm/A550nmE361nm/E550nm3.15~结论：若样品的比值在此范围内，样品可能为维生素10.7.1定性分析2maxshmin单组份1、标准2、对照

有标准品时对组分3、吸光系数 没有标准品时采用，误差较10.6紫外-紫外-可见分光光度计组光 氢灯,氘灯:165~340nm;卤钨灯,340~基