标准解读

《GB/T 19915.7-2005 猪链球菌2型荧光PCR检测方法》是中国关于猪链球菌2型检测的一项国家标准，旨在为相关领域提供一种快速、灵敏且特异的检测手段。该标准详细规定了利用荧光聚合酶链反应（Fluorescent Polymerase Chain Reaction, F-PCR）技术来鉴定和定量检测猪链球菌2型的方法步骤、所需材料、操作条件及质量控制要求，以确保检测结果的准确性和可重复性。下面是该标准的主要内容概述：

标准适用范围

本标准适用于生猪临床样本（如血液、组织、分泌物等）中猪链球菌2型的定性及定量检测，对于猪链球菌病的诊断、疫情监测及防控具有重要意义。

检测原理

荧光PCR技术基于传统PCR扩增原理，通过在反应体系中加入特异性的荧光探针或荧光染料，实现在DNA复制过程中荧光信号的累积，进而通过对荧光信号的实时监测来定量分析目标DNA序列的存在及其初始浓度。

关键要素

  1. 引物设计：标准中详细说明了设计针对猪链球菌2型特异性基因序列的引物原则和要求，确保检测的特异性和敏感性。
  2. 样本处理：规范了样本采集、保存、前处理及核酸提取的具体步骤，以减少污染风险并保证样本质量。
  3. 反应体系与条件：列出了荧光PCR反应所需的各种试剂成分比例、反应体积及最佳循环参数（包括退火温度、延伸时间等），以优化检测效率。
  4. 荧光检测与数据分析：阐述了荧光信号的实时监测方法，以及如何根据荧光曲线分析判断阳性或阴性结果，并提供了Ct值（循环阈值）的计算方法用于定量分析。
  5. 质量控制：强调了实验过程中的内外对照使用、仪器校准及实验人员培训的重要性，以确保检测结果的可靠性。

结果判定与报告

标准明确了阳性和阴性结果的判定标准，要求报告中应包含样本信息、检测方法、实验日期、检测结果及必要的质量控制信息。

注意事项

虽然未直接要求总结，但理解上需注意，执行该标准时需严格遵守实验室生物安全规程，确保人员及环境安全；同时，定期进行方法验证和性能确认，以维持检测系统的稳定性和准确性。

该标准通过上述内容，为猪链球菌2型的荧光PCR检测提供了科学、统一的技术指导，有助于提升我国动物疫病防控水平和食品安全管理能力。


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  • 现行
  • 正在执行有效
  • 2005-09-27 颁布
  • 2005-11-01 实施
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GB/T 19915.7-2005猪链球菌2型荧光PCR检测方法_第1页
GB/T 19915.7-2005猪链球菌2型荧光PCR检测方法_第2页
GB/T 19915.7-2005猪链球菌2型荧光PCR检测方法_第3页
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文档简介

ICS07.100.30C53中华人民共和国国家标准GB/T19915.7—2005猪链球菌2型荧光PCR检测方法Methodofthereal-timePCRforthedetectionofStreptococcussuistype22005-09-27发布2005-11-01实施中华人民共和国国家质量监督检验检疫总局发布中国国家标准化管理委员会

GB/T19915.7—2005前本标准的附录A是规范性附录，附录B是资料性附录本标准由国家标准化管理委员会提出。本标准由全国动物防疫标准化技术委员会归口本标准起草单位：中华人民共和国北京出入境检验检疫局、中国兽医药品监察所。本标准主要起草人：张鹤晓、宋立、高志强、宁宜宝、乔彩霞、王甲正、杨承槐、吴丹、谷强本标准系首次发布的国家标准

GB/T19915.7—2005猪链球菌2型荧光PCR检测方法范围本标准规定了猪链球菌2型荧光PCR检测方法本标准适用于增菌培养物、疑似病料及生猪斌子、猪组织样品中猪链球菌2型的检测规范性引用文件下列文件中的条款通过本标准的引用而成为本标准的条款。凡是注日期的引用文件,其随后所有的修改单(不包括勒误的内容)或修订版均不适用于本标准.然而.鼓励根据本标准达成协议的各方研究是否可使用这些文件的最新版本。凡是不注日期的引用文件，其最新版本适用于本标准。GB/T19438.1—2004禽流感病毒通用荧光RT-PCR检测方法缩略语本标准采用下列缩略语：荧光PCR荧光聚合酶链反应C值每个反应管内的荧光信号量达到设定的闽值时所经历的循环圈数DNA脱氧核糖核酸TA酶TagDNA聚合酶PBS磷酸盐缓冲生理盐水原理采用TaqMan方法,在比对猪链球菌2型英膜抗原2」基因（cDs2J)序列的基础上.设计针对该基因的特异性引物和特异性的荧光双标记探针进行配对。探针5端标记FAM荧光素为报告荧光基团(用R表示）.3'端标记TAMRA荧光素为泽灭荧光基团(用Q表示）,它在近距离内能吸收5°端荧光基团发出的荧光信号。PCR反应进入退火阶段时,引物和探针同时与目的基因片段结合.此时探针上R基团发出的荧光信号被Q基团所吸收,仪器检测不到荧光信号；而反应进行到延伸阶段时.Taq酶的5"→3的外切核酸酶功能将探针降解。这样探针上的R基团游离出来,所发出的荧光不再为Q所吸收而被检测仪所接收。随着PCR反应的循环进行,PCR产物与荧光信号的增长呈现对应关系5猪链球菌2型荧光PCR检测实验室的标准化设置与管理猪链球苗2型荧光PCR检测实验室的标准化设置与管理见GB/T19438.1—2004中附录C。试剂和材料6.1试剂除另有说明，所用试剂均为分析纯。6.1.1无水乙醇：-20℃预冷。6.1.275%乙醇:用新开启的无水乙醇和无DNA酶的灭菌纯化

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