DB1308T 316-2022 香菇固体转液体菌种生产技术规程

DB130865.020.20DB1308B05承 德 市 地 方 标 准DB1308/T316—2022香菇固体转液体菌种生产技术规程2022-10-31发布 2022-11-01实施承德市市场监督管理局 发布DB1308/T316DB1308/T316—2022前 言本文件按照GB/T1.1-2020《标准化工作导则第1部分：标准化文件的结构和起草规则》的规定起草。本文件由承德市农业农村局归口。本文件起草单位：平泉市希才应用菌科技发展有限公司。I香菇固体转液体菌种生产技术规程范围本文件规定了香菇固体转液体菌种生产的前期准备、操作流程以及各步骤的操作方法指示。本文件适用于香菇固体转液体菌种生产过程管理。规范性引用文件下列文件中的内容通过文中的规范性引用而构成本文件必不可少的条款。其中，注日期的引用文件，仅该日期对应的版本适用于本文件；不注日期的引用文件，其最新版本（包括所有的修改单）适用于本文件。本文件没有规范性引用文件。术语和定义本文件没有需要界定的术语和定义。前期准备培养基小米谷粒、0.5%食品级甘油、葡萄糖粉、食品级酵母粉、100目豆粕粉、100目玉米粉等。仪器设备高压灭菌锅、超净工作台、液体发酵罐、生化培养箱、摇床、pH酸度计、比重计、打浆机、液体0.950750mlPDA操作流程谷粒选择→谷粒浸泡→滤水→添加石膏→装瓶→灭菌→接菌→菌丝培养→摇瓶→后续养菌→低温处理→谷粒菌种悬浮液制备→悬浮液过滤→转罐扩大培养→检验→备用。操作方法谷粒选择选择带皮小米谷粒，籽粒饱满、无杂质、直径为0.1cm～0.15cm，破碎率控制在2%以内。谷粒浸泡使用塑料桶或箱作为容器，将谷粒倒入容器中，加水浸泡，水与谷粒的体积比为2:1。环境温度20℃１415101024h滤水浸泡完成后滤水，将谷粒置于50目筛子上进行滤水；以筛底没有水滴滴下，且手抓谷粒不粘手为宜。添加石膏按照谷粒干重的1%比例添加石膏，搅拌均匀。装瓶750ml1.3kg～1.4kg。使用无棉盖体扣盖封口，作为培养基。灭菌装瓶后的培养基在4h121℃时保持4h，确保灭菌彻底。接菌2520mm×200mm的斜面试管PDA培养基母种转接4瓶培养基。菌丝培养接菌完成后，在培养温度为22℃，空气相对湿度为60%，二氧化碳浓度不超过0.2%的条件下进行培养。摇瓶当菌丝长到培养基1/4后续养菌待培养基中长满菌丝后，继续培养10d～12d，令菌丝长入培养基内部，充分分解谷粒培养基，使谷粒充分软化，培养成为谷粒原种。该阶段的管理要加强通风换气，二氧化碳浓度不要高于0.15%。低温处理将长好菌丝的谷粒菌种在4℃环境下放置6h。谷粒菌种悬浮液制备在无菌的条件下，使用打浆机对低温处理的谷粒菌种进行充分破碎，在破碎过程中加入温度为4℃的0.5%的无菌甘油溶液，使破碎后的谷粒菌种变成悬浮浆液，其中谷粒菌种与甘油溶液的体积比为1:1。打浆机对谷粒菌种进行破碎时采用间歇模式，每旋转30s停顿10s，以旋转10次为限，防止打浆过程中温度升高。２悬浮液过滤三角瓶消毒，安装消毒后的50目筛片，打浆结束后倒入三角瓶中过滤。转罐扩大培养在无菌条件下，将过滤后的谷粒菌种悬浮液转入到盛装培养液的液体发酵罐中进行液体发酵培养，悬浮浆液与培养液的体积比为1:1200。发酵罐培养液成分按质量配比为：玉米粉2%、豆粕粉2%、葡萄糖1.5%、酵母粉0.5%和94%的无菌水。发酵罐内培养条件为温度25℃，罐内压力0.01兆帕，培养6d。检验取样在扩大培养即将结束时检验一次即可，即在培养6d取样检验。感官检查看旋5min不沉淀，表明菌种生长力强；反之，如果菌丝极易沉淀，说明菌丝已老化或死亡。嗅理化试验菌丝干重量取液体菌种10ml，用水分测试仪烘干至含水量18%，然后称量，菌丝干重≥2g为合格。液体粘稠度将液体菌种置于量筒中，使用比重计进行粘稠度测量，比重超过1.2为合格。pH将液体菌种取出后，使用pH值酸度计进行精准