种子生活力、健康、重量测定及种子检验的计算机管理

2023/2/11第八节种子生活力测定方法一、种子生活力测定的意义二、四唑染色法测定三、其他测定方法2023/2/121、种子生活力（seedviability）的概念

种子生活力是指种子发芽的潜在能力和种胚所具有的生命力。通常是指一批种子中具有生命力的种子数占种子总数的百分率。

一、种子生活力的概念和测定意义能发芽的种子暂时不能发芽而具有生命力的休眠种子2023/2/13（1）休眠的种子必须进行生活力测定（2）快速预测种子发芽能力2、测定种子生活力的意义一、种子生活力的概念和测定意义因为新收的或在低温贮藏处于休眠状态的种子，采用标准发芽试验，即使供给适宜的发芽条件仍不能良好发芽或发芽力很低。在这种情况下，仅用发芽试验测定其发芽率，就不可能测出种子的最高发芽率，必须进一步测定其生活力，了解种子潜在发芽能力，以便合理利用种子。（1）休眠的种子必须进行生活力测定休眠种子可借助于各种预处理打破休眠，进行发芽试验，但时间也较长，而种子贸易中，常因时问紧迫，不可能采用正规的发芽试验来测定发芽力，这是因为发芽试验所需时间更长，如麦类需7-8天，水稻需14天，某些蔬菜和牧草种子需2-3周，尤其在收获和播种间隔时间短的情况下，发芽试验会耽搁农时，则可用生物化学速测法测定种子生活力作为参考，而林木种子可用生活力来代替发芽力。（2）快速预测种子发芽能力2023/2/16二、四唑染色法测定（TTCtestorTZtest）发展历程1942年由德国H.Lakon发明1950年ISTA成立四唑测定技术委员会

1953年ISTA世界大会第一次将四唑测定列入国际种子检验规程《四唑测定手册》（HandbookonTetrazoliumTest），Moore，1984年，650多个属和种1995年我国将四唑测定列入农作物种子检验规程2023/2/17

无色的的三苯基四氮唑被种子吸收后，在胚部活细胞中脱氢酶的作用下，还原成为红色的、稳定、不扩散的三苯基甲，这样，就可根据染色的部位和深浅来区分种子红色的有生活力部分和无色的死亡部分。原理2023/2/18除完全染色的有生活力种子和完全不染色的无生活力种子外，还可能出动一些部分染色的异常颜色或不染色的坏死组织。

当然，种子有无生活力主要取决于胚和(或)胚乳(或配子体)坏死组织的部位和面积的大小，而不一定在于颜色的深浅。通过颜色的差异主要将健全的，衰弱的和死亡的组织判别出来，并确定其染色部位。原理2023/2/19特点原理可靠结果准确(与标准发芽率误差一般不超过3-5%)不受休眠限制简便快速成本低廉2023/2/110测定休眠种子的发芽潜力测定收获后马上要播种的种子的发芽潜力测定发芽缓慢的种子的发芽潜力测定发芽末期未发芽种子的生活力测定种子收获或加工期间损伤种子的生活力解决发芽期间遇到的问题查明种子贮藏期间劣变衰老程度时间紧迫，调种时快速测定种子生活力适应范围2023/2/111测定程序（一）预措（预处理）

预措：预措是指在种子预湿前除去种子外部的附属物，其方法包括剥去果壳和在种子非要害部位弄破种皮，但需注意，不能损伤种子内部胚的主要构造。预湿:

为加快种子充分吸湿，软化种皮，便于样品准备，以提高染色的均匀度，通常种子在染色前要进行预湿。2023/2/1121.预湿快速水浸预湿：

将种子完全浸入水中，让其充分吸胀，主要适用于种子直接浸入水中不会造成组织破裂的损伤，并不会影响鉴定正确性的种子种类。有时为了加快种子吸水，温季作物种子可用40-45摄氏度水。应特别注意，如果浸种温度过高或浸种时间过长会引起种子变质，造成人为的水浸损伤，影响鉴定结果，所以应控制浸种时间。2023/2/1131.预湿缓慢纸床预湿：按种子发芽试验所用方法，将种子放在纸床上或纸巾间，让其缓慢吸湿，主要适用于有些直接浸在水中容易破裂和损伤的种子，以及衰弱的种子或过分干燥的种子。经实际应用表明缓慢吸湿能比较好地解决吸湿和供氧的矛盾。2023/2/114（二）样品准备目的：使四唑溶液快速和充分渗入种子全部活组织，加快染色反应，采用适当方法使胚的主要构造和活的营养组织暴露出来。样品准备方法取决于种子大小、形状，种皮结构，胚的位置、

形状及大小，营养组织的活与死，应用仪器的性能，技术的先进性，测定时间的紧迫性，结果的正确性等要求，以及检验人员的工作经验等因素。2023/2/115不需预湿和附加准备：如苜蓿种子采用缓慢预湿后不需样品准备：如大豆种子等穿刺或切开胚乳：小粒牧草等种子沿胚纵切：水稻、玉米、和麦类等近胚纵切：松柏和伞形科等植物种子上半粒纵切：莴苣和其他菊科等植物种子（二）样品准备2023/2/116g)

切去种子基端：茜草科等植物种子h)

斜切种子：菊科、十字花科和蔷薇科等横切胚乳：黑麦草、羊茅等植物种子剥去种皮：矮牵牛、茶籽和棉花等植物种子剥开胚乳取出胚：杜仲等林木种子横切胚轴和盾片：大麦和小麦等从果实内取出胚：桃等横切种子两端：山茱萸和胡颓子等平切果种皮和胚乳，露出胚的构造：洋葱和菠菜等植物种子（二）样品准备2023/2/1171.禾谷类:通过胚和约在胚乳四分之三个纵切2.燕麦属:靠近胚部横切3.牧草:通过胚乳末端部分横切和纵切4.牧草:种子刺穿胚乳5.莴苣属:通过子叶末端一半纵切6.第5种方式进行纵切时的解剖刀部位7.伞形科:沿胚的旁边纵切8.针叶树:种子沿胚旁边纵切9.两端横切,打开胚腔,并切去小部分胚乳.2023/2/118（三）染色通过染色反应，能将胚和活的营养组织里的健壮、衰弱和死亡部分的差异正确地显现出来，以便进行确切的鉴别，可靠地判断种子生活力和活力。2023/2/1191、染色程序按要求，将经过样品准备或不需准备的规定数量种子分别放人四唑溶液里染色。小粒种子可用6cm培养皿，大、中粒种子可用9cm培养皿或更大的容器，特别细小的子可包在滤纸内，分别放入容器里。然后加入适宜浓度的四唑溶液，以淹没种子为度，移置一定温度的黑暗恒温箱内或弱光下进行染色反应。因为光线可能使四唑盐类坯原而降低其浓度，影响染色效果。2023/2/1202.染色温度和时间染色时间因种子种类、样品准备方法、本身生活力的强弱，四唑溶液浓度、pH和温度等因素的不同而有差异，其中温度影响最大。染色时间可按需要在20~45℃温度范围内加以适当选择。在这种温度范围内，温度每增加5摄氏度，其染色时间可减少一半。例如，要求在30摄氏度以下适宜染色时间为6h的种子样品，移到35℃下则只需染色反应3h，在40摄氏度下仅需1.5h。2023/2/1212.染色温度和时间另一方面，种子的健壮、衰弱和死亡不同等级的组织，其染色的快慢也是不同的。一般来说，衰弱组织四唑溶液渗入较快，染色也较快；健壮组织酶的活性强，染色明显。为了使这些不同等级的组织均能达到良好的染色程度，以便于鉴别，有时可根据样品的实际情况，适当调整染色时间。2023/2/1223.暂停染色若未能按时进行鉴定，那么可在能接受的时间范围内，将正在进行染色的样品移到低温或冰冻条件下，以中止或延缓染色反应进程。但应注意，仍需将种子样品保持在原来的染色溶液里，而对已达到染色时间的样品应保持在清水中或湿润条件下，对于在1h内要鉴定的染色样品，最好先倒去染色溶液并冲洗，保持在低湿清水中或湿润状态，以及弱光或黑暗条件下，以待鉴定。2023/2/1234.染色失调当在适合的染色时间内，染色溶液变为混浊，并出现泡沫或粉红色的沉淀，这可能是由于以下一种或几种原因引起的。（1）在测定样品中含有死亡、衰弱、热伤、冻害或机械损伤的种子。（2）测定样品的胚和营养组织在预湿前已在水中或四唑溶液里浸过。（3）染色溶液温度过高而引起种子组织（特别是衰弱组织）的严重劣变，导致外溢物增加和微生物的活动。2023/2/124（四）鉴定前处理直接观察，不需处理轻压出胚，观察鉴定扯开营养组织，暴露出胚切去一层营养组织，暴露出胚和活的营养组织沿胚中轴纵切沿种子中线纵切剥去半透明的种皮或种子组织剥去种皮和残余营养组织切去切面碎片或掰开子叶乳酸苯酚透明液的应用(便于小粒种子观察)2023/2/1251、目标：（五）观察鉴定确切计算种子在适宜条件下（包括在杀菌剂处理有效的情况下）能产生正常幼苗的能力，即种子生活力。按种子样品染色程度和组织特征，判断其强壮程度，将种子分为强或弱2~3个等级以以便统计种子活力。按局部解剖学染色图样，观察染色部位，查明种子劣变和生活力丧失的原因，为种子生理、种子加工，种子贮藏和种子处理提供指导情报。2023/2/126染成的颜色、组织状态，有无肿胀、破裂、虫伤胚的主要构造机能与其他部分之间的关系，即与营养组织的损伤面积（指不染色的面积）、位置和程度的关系种子的健壮水平据此，可将种子分为健壮、活的衰弱组织、死的衰弱组织和死亡4级水平。2、鉴定因素2023/2/127

凡是胚的主要构造及有关活营养组织染成有光泽的鲜红色，且组织状态正常的，为有活力种子凡是胚的主要构造局部不染色或染色成异常的颜色和光泽，并且活营养组织不染成部分已超过二分之一，或超过允许范围且组织软化的，为不正常种子凡完全不染色或染色成无光泽的淡红色或灰白色，且组织已腐化、虫蛀、损伤、腐烂的，为死种子各种植物的种子活力判别标准参照种子检验规程。一般的鉴定原则：3、观察鉴定2023/2/128水稻：凡是胚的主要构造染成正常鲜红色，或胚根尖端2/3不染色而其他部分正常染色的种子为有生活力种子。大豆：凡是整个种子染成明亮红色，或仅胚根尖端1/3不染色，或子叶表面有小范围坏死，或子叶顶端1/3不染色，为有生活力种子。鉴定实例2023/2/130（六）结果报告计算各重复有生活力种子百分率，重复间误差不得超过最大允许误差结果计算到近似整数2023/2/131生活力测定重复间的最大容许差距平均生活力百分率%重复间容许的最大差距124次重复3次重复2次重复9925--98365-97476696587695698793-947-8109891-929-101110990111211989121211108813131210871413121184-8615-1714131181-8318-2015141278-8021-2316151376-7724-2517161373-7526-2817161471-7229-3018161469-7031-3218171467-6833-3418171564-6635-3719171556-6338-45191815554620181551-5447-50201816种子检验结果报告单2023/2/133甲烯兰法溴麝香草酚兰法（BTB法）红墨水染色法软Ｘ射线造影技术三、种子生活力的其他测定方法2023/2/134第九节种子健康测定一、种子健康测定的重要性二、测定程序2023/2/135种子健康测定主要是测定种子是否携带有病原菌(如真菌、细菌及病毒)、有害的动物(如线虫及害虫)等健康状况。一、种子健康测定的重要性2023/2/1361.种子携带的接种体可引起田间病害并逐步蔓延，以致降低作物产量和商品价值；2.进口种子批可将病害带入新区；3.了解幼苗的价值，以及查明室内发芽不良或田间出苗差的原因，从而弥补发芽试验的不足。目的和重要性是：2023/2/137（一）未经培养的检验（不能说明病原菌的生活力）（二）培养后的检验二、测定程序2023/2/138优点：快速、直接、简便；缺点：仅适用于少部分真菌，需要一定经验，不能区分病原菌活力。（一）未经培养的检验混杂在种子间的较大病原体（线虫瘿、菌核）污染大量病菌孢子的种子（小麦腥黑穗病）种子带明显病症的病粒（小麦黑胚病）小麦黑胚病粒腥黑穗病341.直接检查为使子实体、病症或害虫更容易被观察到或促进孢子释放，把试验样品浸人水中或其他液体中，种子吸胀后检查其表面或内部，最好用双目显微镜。342.吸胀种子检查1、适用范围：种子表面带菌而肉眼看不见的种子病害。（附着在种子表面的病菌孢子）如：黑粉菌的冬孢子、霜霉菌的卵孢子等。小麦矮腥黑穗病菌

383.洗涤检查洗涤法检测玉米种子中的真菌Sporisoriumholci-sorghi

和

Ustilagomaydis

40取试样5~10

g（小麦等中粒种子5g，玉米、豌豆大粒种子10g），用刀剖开或切开种子的被害或可疑部分，检查害虫。344.剖粒检查高锰酸钾染色法：适用于检查隐蔽的米象、谷象。取试样15g，除去杂质，倒人铜丝网中，于30℃水中浸泡1min，再移入1%高锰高锰溶液中染色1min。然后用清水洗涤，倒在白色吸水纸上用放大镜检查，挑出粒面上带有直径0.5mm的斑点即为害虫籽粒，计算害虫含量。345.染色检查米象：米象，俗称蛘子，归属鞘翅目象虫科，是贮藏谷物的主要害虫。成虫啮食谷粒，幼虫蛀食谷粒内部。危害米、稻、麦、玉米、高粱等。29碘或碘化钾染色法：适用于检验豌豆象。取试样50g，除去杂质，放入铜丝网中或用纱布包好，浸入1%碘化钾或2%碘酒溶液或1~1.5min。取出放人0.5%的氢氧他钠溶液中，浸30s，取出用清水洗涤15-20s，立即检验，如豆粒表面有直径1-2mm的圆斑点，即为豆象感染，计算害虫含量。345.染色检查豌豆象：昆虫名，为鞘翅目，豆象科。分布在中国大部分省区，尤以江苏、安徽、山东、陕西等省为重。危害豌豆、扁豆等；幼虫蛀害豆英，取食豆粒，影响产量，并且受害豆英气味难闻，不能食用。29谷蠹：也叫“米长蠹”，危害各种储藏的粮食。在热带和亚热带地区，由谷蠹所造成的储藏谷物的损失要比玉米象或谷象大得多。29赤拟谷盗：为害谷类、豆类和油料种子，尤喜食种子的胚、破碎粒和碎屑粉末；成虫有臭腺分泌臭液，使粮食发生霉腥味，其分泌物还含有致癌物苯醌。31取试样100g，除去杂质，倒入食盐饱和溶液中(35.9g盐溶于1000mL水中)，搅拌10-15min，静止1~2min，将悬浮在上层的种子取出，结合剖粒检验，计算害虫含量。346.比重检查用于检查种子内隐匿的虫害(如蚕豆象、玉米象.、麦蛾等)，通过照片或直接从荧光屏上观察。347.软X射线检查玉米象：我国头号贮粮害虫，为害各种谷类、薯类以及干果、药材等。食性广，分布普遍，危害极其严重。成虫有假死性，善攀缘，能飞翔，既能在室内繁殖，又能在田间繁殖成虫食性较广，更喜食种子的胚。幼虫喜欢胚乳，终生蛀蚀于种子内。成虫幼虫为害状28麦蛾：幼虫危害各种储藏的粮食，尤以小麦受害最严重，故有麦蛾之名。在温暖地区，每年可发生4～6代，以幼虫在粮粒内越冬。302023/2/154

试验样品经过一定时间培养后，检查种子内外部和幼苗上是否存在病原菌或其症状。根据培养基不同，可分以下3类。（一）培养后的检验吸水纸法适用于许多类型种子的种传真菌病害的检验，尤其是对于许多半知菌，有利于分生孢子的形成和致病真菌在幼苗上症状的发展。341、吸水纸法稻瘟病检测，取试样种子400粒，将培养皿内的吸水纸用水湿润，每个培养皿播25粒种子，在22摄氏度下用12h黑暗和12h近紫外光照的交替周期培养7天。在12~50倍放大镜下检查每粒种子上的稻瘟病分生孢子。一般这种真菌会在颖片上产生小而不明显、灰色至绿色的分生孢子，这种分生孢子成束地着生在短而纤细的分生孢子梗的顶端。菌似很少覆盖整粒种子。如有怀疑，可在200倍显微镜下检查分生孢子来核实。典型的分生孢子是倒梨形，透明，基部钝圆具有短齿，分两隔，通常具有尖锐的顶端，大小为（20-25）μm×（9-12）μm。341、吸水纸法砂床法适宜于某些病原体的检验.用砂时应通过1mm孔径的筛子去掉砂中杂质，并将砂粒清洗，高温烘干消毒后，放入培养皿内加水湿润，种子排列在砂床内，然后密闭保持高温，培养温度与纸床相同，待幼苗顶到培养皿盖时进行检查(经7-10天)。342、砂床法琼脂皿法主要用于发育较慢的潜伏在种子内部的致病真菌，也可用于检验种子外表的病原菌。343、琼脂皿法小麦颖枯病检测：先数取试样400粒，经1%(m/m)的次氯酸钠消毒10min后，用无菌水洗涤。在含0.01%硫酸链霉素的麦芽或马铃薯左旋糖琼脂的培养基上，每个培养皿播10粒种子于琼脂表面，在20℃黑暗条件下培养7天。用肉眼检查每粒种子上缓慢长成圆形菌落的情况，该病菌菌丝体为白色或乳白色，通常稠密地覆盖着感染的种子，菌落的背面呈黄色或褐色，并随其生长颜色变深。343、琼脂皿法豌豆褐斑病检测：先数取试样400粒，经1%(m/m)的次氯酸钠消毒10min后，用无菌水洗涤.在麦芽或马铃薯葡萄糖琼脂的培养基上，每个培养皿播10粒种子于琼脂表面，在20℃黑暗条件下培养7天。用肉眼检养每粒种子外部盖满的大量白色菌丝体。对有怀疑的菌落可放在25倍放大镜下观察，根据菌落边缘的波状菌丝来确定。343、琼脂皿法2023/2/161第十节种子重量测定一、种子重量测定的重要性二、测定方法三、结果报告四、规定水分千粒重的换算2023/2/162种子重量通常用千粒重(weightper1000seds)表示，通常是指自然干燥状态的1000粒种子的重量；我国1995年《农作物种子检验规程》中，种子千粒重是指国家标准规定水分的1000粒种子的重量，以克(g)为单位。千粒重的测定具有重要的意义。一、种子重量测定的重要性2023/2/163(一)千粒重是种子活力的重要指标之一，种子千粒重大，其内部的贮藏营养物质多，发芽迅速整齐，出苗率高，幼苗健壮，并能保证田间的成苗密度，从而增加作物产量。(二)千粒重是多项品质的综合指标，测定方便。种子千粒重与种子饱满、充实、均匀、粒大成正相关。如要分别测定这四项品质指标就较为麻烦。饱满度需用量筒测量其体积，充实度则需用比重计测量比重；均匀度需用一套筛子来测得；种子大小则需用长、宽测量器测量其长、宽、厚；而测定千粒重则简单得多。(三)千粒重是正确计算种子播种量的必要依据。计算播种量的另两个因素是种子用价和田间栽培密度。同一作物不同品种的千粒重不同，其播种量也应有所差异。一、种子重量测定的重要性2023/2/164

将净度分析后的全部净种子均匀混合，分出一部分作为试验样品。我国1955年国家规程中，种子重量测定有百粒法、千粒法和全量法3种方法。可任选其中一种方法进行测定。二、测定方法2023/2/165用手或数种器从试验样品中随机数取8个重复，每个重复100粒，分别称重（g），小数位数与GB/T3543.3的规定相同。计算8个重复的平均重量、标准差及变异系数：（一）百粒法2023/2/166用手或数粒仪从试验样品中随机数取两个重复，大粒种子数500粒，中小粒种子数1000粒，各重复称重（g），小数位数与GB/T3543.3的规定相同。两份重复的差数与平均数之比不应超过5%，若超过应再分析第三份重复，直至达到要求，取差距小的两份计算测定结果。（二）千粒法2023/2/167

将整个试验样品通过数粒仪，记下计数器上所示的种子数。计数后把试验样品称重(g)，小数位数与GB/T3543.3的规定相同。3、全量法2023/2/168最后，计算结果，撰写报告。如果是用全量法测定的，则将整个试验样品重量换算成1000粒种子的重量。如果是用百粒法测定的，则从