《药物分析学》知识点

10药物分析学药物分析学是药学学科下设的二级学科药品质量标准及其制订和药品质量检验的根本学问和药的争论开发工作奠定根底。第一节药物分析的性质和任务的方法与技术争论、解决化学构造已经明确的合成药物或自然药物及其制剂的质量把握问与进展药品质量把握的“方法学科药物分析学科和药物分析工作者的任务方法应当更加准确、灵敏、专属和快速，并力求向自动化、最优化和智能化方向进展。其次节药物分析与药品质量标准一、我国药品质量标准体系〔一〕法定药品质量标准药品标准、省〔自治区、直辖市〕药品标准，人们习称为“三级标准”体系。量的技术标准。凡生产、销售和使用质量不符合药典标准规定的药品均为违法行为。国家食品药品监视治理局标准〔简称局颁标准公布实施的药品标准省〔自治区、直辖市〕药品标准，系由各省、自治区、直辖市的卫生行政部门〔卫生厅〔局〔简称地方标准地方性特色的药品标准。〔二〕临床争论用药品质量标准药品标准。〔三〕暂行或试行药品标准我国的一类至三类药经临床试验或试用后报试生产时所制订的药品标准准转为局标准，四类、五类药经临床试用后没有“暂行药品标准”这一阶段，其他要求同一至三类药。〔四〕企业标准是高于法定标准的要求，主要是增加了检验工程或提高了限度标准。二、中国药典与主要国外药典2023年版，记为中国药典〔2023年版。中国药典出版有英文版，其英文名称为ChinesePharmacopoeia，缩写为ChP，现行版本为中国药典〔2023年版〕的英文版。建国以来，我国已经先后出版了八版药典，即1953、1963、1977、1985、1990、1995、202320231995年版一九九七年增补本、一九九八年增补本。品的质量标准。二者共同表达了药品的安全性和有效性。正文内容〔二部〕包括：⑴品名〔包括中文名、汉语拼音名与英文名；⑵有机药物的构造式；⑶分子式与分子量；⑷来源或有机化合物的化学名称；⑸含量或效价规定；⑹处方；⑺制法；⑻性状；⑼鉴别；⑽检查；⑾含量或效价测定；⑿类别；⒀规格；⒁贮藏；⒂制剂等。中还有汉语拼音排序的中文索引和英文索引。目前，世界上已有数十个国家编订了国家药典。另外，尚有世界卫生组织〔WHO〕编订的国际药典，以及一些区域性药典。在药物分析工作中可供参考的国外药典主要有：美国药典TheUnitedStatesPharmacopoei，缩写为US，目前为第30版。美国国家处方集TheNationalFormular，缩写为N，目前为25USP30与NF25合并出版，缩写为USP30-NF25。BritishPharmacopoeiBP2023B〔2023日本药局方，目前为第十五改正本，缩写为J〔1。欧洲药典EuropeanPharmacopoei，缩写为EP，目前版本为EP5.4版。国际药典TheInternationalPharmacopoei，缩写为Ph.In，目前为第四版。第三节药物分析学的主要内容品质量标准的争论和制订，以及药物的生物体内分析方法学争论和体内过程监测。一、药品检验工作的根本内容药品检验工作的根本程序一般为：取样、性状检查、鉴别试验、纯度检查、含量测定、写出检验报告。对不同的检验对象，其工作内容有所不同。〔一〕原料药的检验取样性状鉴别鉴别是依据药物的化学构造和理化性质进展某些化学反响或测定某些光谱或色谱特征，来推断药品的真伪。检查检查项下包括药品的有效性、均一性、纯度要求与安全性等四方面。含量测定来测定，以确定药品的含量是否符合药品标准的规定要求。概括起来，鉴别是用来判定药品的真伪，而检查和含量测定则可用来判定药品的优劣。能综合地反映药品的内在质量，在评价药品质量的真伪和优劣方面具有双重意义。检验报告〔对外单位〕检验报告还需加盖检验单位公章。另外，检验报告中还应记载检品名称、批号、规格、数量、来源、检验目的、检验依据、取样〔送检〕日期、报告日期等内容。〔二〕药物制剂的检验性状鉴别检查含量测定原料药的不同。含量限度含量测定方法法。含量测定结果5-1。实测含量〔g/g或g/m单位制剂重量或体积〔g或m〕标示量% 100%

〔5-1〕标示量〔g〕〔三〕中药制剂的检验纯化方法将在自然药物化学课程中学习。鉴别试验显微鉴别化学鉴别色谱鉴别其他除以上方法外，还可以承受光谱法进展鉴别，如紫外分光光度法等。由于光谱法专属性不如色谱法强，供试品常需经提取、纯化处理，才能使用，所以应用较少。检查不溶性灰分、砷盐、重金属和农药残留量等。含量测定指纹图谱〔无论或未知的成分的图谱〔一般是HPLC图谱。中药制剂应具有相对稳定的指纹图谱，即中药制剂中含量在确定百分数以上的各类化学成分均应有相对稳定〔在确定范围内的色谱信号。单方制剂〔假设只含有一类化学成分绘制多张指纹图谱。绘制指纹图谱的首选方法为色谱法，尤以HPLC最常用，亦可承受其他方法，如GC、TLC、MS、原子吸取光谱法等。〔四〕生化药物的检验生化药物一般系指从动物、植物、微生物中提取的，亦可用生化-半合成或用现代生物技术制得的生命根本物质。生化药物质量检验的程序与化学药物制剂一样有特别性的分析方法。鉴别试验酶法电泳法生物法法。例如糜蛋白酶、糜胰蛋白酶、胰蛋白酶等。杂质检查安全性检查含量〔效价〕测定力单位表示。前者的目的是测定样品中某种酶的含量或活性的凹凸以外的其他物质的含量。〔五〕医院药房制剂的快速化学检验别和含量测定的工作，称为“药房制剂分析快，检品消耗量少，效率高〔一般鉴别试验只需1分钟，含量测定不超过5～10分钟〕等特点，故通常称之为“快速检验鉴别试验含量测定二、生物药物分析生物样品中的药物及其代谢物的检测，称为生物药物分析〔或称体内药物分析。生物药物分析与体外常规的药品质量检验的差异，主要表现在样品的特点及样品的预处理方法上。〔一〕常用样品的种类、采集和贮藏生物样品原则上包括各种生物体液和组织，但实际上最常用的是比较简洁得到的血液〔血浆、血清或全血、尿液和唾液。〔二〕生物样品的预处理等三方面因素。去除蛋白质去除蛋白法有以下几种：参与与水混溶的有机溶剂参与中性盐参与强酸参与含锌盐及铜盐的沉淀剂酶解法缀合物的水解溶剂萃取溶剂萃取法是应用最多的分别萃取法包括液-液萃取法和液-固萃取法。液-〔LLE〕液--液萃取法适〔ionpairextraction〕萃取分别。液固萃取法LS〕其萃取分别的原理同于一般的液相色谱法L。炭、聚苯乙烯或C18化学键合硅胶等，它们可选择性地从样品中吸附亲脂性药物，然后用有机溶剂洗脱药物，经浓集后测定。被测组分的浓集浓集的方法主要有主要承受挥去萃取溶剂后，再参与小体积溶剂〔如HPLC的流淌相〕从开头进样直到数据整理、报告都由微处理器把握。化学衍生化测的灵敏度；③增加药物的稳定性；④提高对光学异构体分别的力气等。2药物分子中含有活泼H者，如含有-COOH、-OH、-NH、=NH、-SH等官能团的药物2均可被化学衍生化。化学衍生化对GC和HPLC尤为重要。三、药品质量标准的制订动进出口贸易的进展。〔一〕制订药品质量标准的原则安全有效性先进性针对性〔二〕争论及制订药品质量标准的根底药的同时即公布其质量标准通常，争论及制订药质量标准的根底工作可从以下几方面着手。文献资料的查阅及整理对有关争论资料的了解〔三〕药品质量标准制订工作的长期性有相当重要的意义。〔四〕药品质量标准的主要内容与制订原则名称药名称的制定，原则上应按世界卫生组织〔WHO〕编订的国际非专利药品名称〔InternationalNamesforPharmaceutica1Substances，简称INN〕命名，命名确定后，再译成中文正式品名。外文名依据需要也可制定一个的词干。对于化学名称的命名，要有依据，下：药品名称应科学、明确、简短〔一般以24字为宜的词干命名，使之表达系统性。药品名称为法定药品名称〔通用名称。避开承受可能给患者以示意的有关药理学、治疗学或病理学的药品名称。外文名〔英文名或拉丁名〕应尽量承受INN名称。中文名应依据国家药典委员会编撰的《中国药品通用名称》推举的名称及其命名原则命名，并尽量与外文名相对应，即音对应、意对应或音意对应，一般以音对应为主。化学名应依据中国化学会编撰的《有机化学命名原则》命名，母体的选定应与美国〔ChemicalAbstract〕系统全都。无机化学药品，应承受化学名；如化学名不常用，可承受通俗名，如盐酸、硼砂；酸式盐以“氢”标示，如碳酸氢钠，不用“重”字；碱式盐避开用“次〔Sub〕字，如碱式硝酸铋，不用“次硝酸铋有机化学药品，可承受化学名，如苯甲酸；已习用的通俗名，如符合药用状况，可尽量承受，如糖精钠、甘油等；化学名较冗长者，一般以音译法为主。自然药物提取物，其外文名依据其植物来源命名者，中文名可结合其植物属种名命名，如：Artemisninum青蒿素；外文名不结合植物来源命名者，中文名可承受音译，如Morphinum吗啡。盐类药品，酸名列前，盐基列后。酯类药品，可直接命名为××酯，拉丁文词尾用-atum，英文词尾用-ate。季铵类药品，一般将氯、溴置于铵前。如，苯扎溴铵Benzalkonii除沿用已久者外，尽量不用氯化×××，溴化×××命名。放射性药品在药品名称中的核素后，加直角方括号注明核素符号及其质量数。如：碘12I化钠。渡，以免造成混乱。药品通用名。药名中的基团关系，尽可能承受通用的词干加以表达。化学构造式的书写化学构造式承受WHO推举的“药品化学构造式书写指南”书写。性状外观性状溶解度物理常数①熔点②比旋度③吸取系数④晶型⑤相对密度⑥馏程⑦凝点⑧折光率⑨其他黏度是指流体对流淌的阻抗力气，中国药典中黏度测定有三种方法。脂肪及其脂肪油测定法中，应测定碘值、皂化值及酸值。鉴别药物的鉴别试验通常是指用牢靠的理化方法来证明药物的真伪定性分析。各方法的特点如下：①化学法该法操作简便、快速，试验本钱低，应用广，但专属性比仪器分析法差。②光谱法常用的光谱法有紫外分光光度法U〕与红外光吸取光谱法IIR比UV的专属性、牢靠性都高，应用更广。③色谱法常用的色谱法有薄层色谱法TL、高效液相色谱法HPL、纸色谱法PC、气相色谱法G〕TLCGC、HPLC、PC相对于TLC而言应用较少。④离子反响法适用于盐类药物的鉴别，如钠盐、盐酸盐，应显钠离子、氯化物的鉴别反响。-NMR、MS、原子吸取光谱法AX射线衍射法、热分析法、氨基酸分析法等。⑥生物检定法主要用于生物制品的鉴别。中国药典收载有肝素生物检定法、胰岛素生物检定法、洋地黄生物检定法等。鉴别方法的选择原则可供参考的根本原则如下：①方法要有确定的专属性、灵敏性，且便于推广；②化学法与仪器法相结合。每种药品一般选用2～4种方法进展鉴别试验，相互取长补短；③尽可能承受药典中收载的方法。检查检查项下包括有效性、均一性、纯度要求与安全性等四个方面。杂质检查的内容与方法杂质依据其性质可分为有机杂质和无机杂质；依据其来源可分为一般杂质和特别杂质。杂质检查方法的根本要求要争论方法的根本原理、专属性、灵敏性、试验条件的最正确化。对于色谱法，还要争论其分别力气。确定杂质检查及其限度的根本原则根本原则是保证用药的安全和有效，在确定检查的杂质及其限度时要有针对性和合理性。个比较合理的标准。含量测定含量测定常用方法及其特点常用的含量测定方法包括化学分析法和仪器分析法如下：①容量分析法常用的容量分析法有非水滴定法〔含电位滴定法法、碘量法、亚硝酸钠法、络合滴定法、定氮法等。尽管这类方法的专属性不高，但由于其准确度高、周密度好、仪器设备简洁、试验本钱低及操作简便、快速等优点，故仍广泛用于原料药的含量测定。②重量分析法重量分析法是经典的分析方法。本法的优点是准确度高、周密度好。但缺点是操作较繁、需时较长、样品用量较多，目前使用较少。③紫外分光光度法本法具有准确度较高、周密度较好、操作简便、快速等优点。主要用于单方制剂的含量测定以及含量均匀度与溶出度的检查。④荧光分析法本法远不如紫外分光光度法应用广泛，但由于本法的专属性比UV法高，故有些药品〔如地高辛片〕的含量测定仍选用荧光分析法，但目前使用较少。⑤原子吸取分光光度法当含金属元素的药物没有更为简便、牢靠的定量方法时，可选用本法。本法的专属性和灵敏度均较高。⑥高效液相色谱法本法广泛用于药物制剂，尤其是复方制剂和中药制剂的含量测定等。⑦气相色谱法所用色谱柱应为填充柱；首选通用的固定液如甲基硅氧烷〔即SE-30，OV-OV-10〔即SE-52023〔即PEG-20Carbowax2023；检测器首选氢焰离子化检测器FI。定量方法同HPLC法，但因进样量不易准确GC法远没有HPLC法应用广泛。⑧薄层色谱法在含量测定方面与GC法差不多，远没有HPLC法应用广泛。主要缘由是其分别力气、准确度、周密度、灵敏度均比HPLC法低。⑨其他方法选择含量测定法的根本原则含量测定所承受的方法应依据测定对象的组成、含量等特点加以选择。①原料药〔化学合成药〕的含量测定应首选容量分析法。②制剂的含量测定应首选色谱法。③特别制剂的含量测定例如，对于酶类药品应首选酶分析法；抗生素药品应首选微生物法或HPLC；放射性药品应首选放射性测定法；生理活性强的药品应首选生物检定法。在上述方法均不适合时，可考虑使用计算分光光度法。④对于创药物的研制，其含量测定应选用原理不同的两种方法进展比照性测定。然而，有些药品则没有适宜的含量测定法，如疫苗类、血液制品类等。对于这类药品，应参照《中国生物制品规程》的有关规定进展检定及试验。含测定中分析方法的验证为了获得牢靠的含量测定结果局部。①对试验室等内容的要求②分析方法的效能指标含量限度确实定含量限度的制订一般可依据主药含量、测定方法、生产过程和贮存期间可能产生的偏差或变化而制订。①依据不同的剂型②依据主药的含量③依据测定方法④依据生产的实际水平总之，药品的含量限度应依据具体状况而定。标准太高，生产上难以到达；标准太低，药品质量无法保证。应本着既能保证药品质量，有能实现大生产的原则而合理确实定。贮藏药品稳定性试验的分类与目的药品稳定性试验的目的是考察原料药或药物制剂在温度、湿度、光线的影响下，随时间变化的规律，作为药品的生产、包装、贮存、运输条长期试验。药品稳定性试验的方法①影响因素试验高温试验高湿度试验强光照耀试验②加速试验③长期试验第四节药物分析的技术与方法线或在线分别分析技术、中药的DNA二、分析技术主要介绍几种极具进展前景的光谱、色谱〔包括电泳〕技术。〔一〕基质关心激光解吸离子化质谱〔MALDI-MS〕根本原理直接激光解吸离子化质谱法早已应用于非挥发性物质的分析的生物大分子的离子化问题，直到将关心基质引入激光解吸才得以解决。MALDI-MS的原理是待测大分子与小分子化合物〔基质〕混合，用脉冲激光轰击其外表，使之升温至或接近基质成的准离子峰根本不再进一步裂解，这是MALDI-MS仪器装置MALDI〔time-of-flightmassspectrometer,TOFMS〕和傅立叶变换质谱仪〔fouriertransformmassspectrometer,FTMS〕的脉冲质量分析器匹配，所以主要用于此两种仪器，也有用于离子阱质谱仪〔iontrapmassspectrometer,ITMMALDI-TOFMSFTMS具有高区分率、高灵敏度以及多级质谱〔MSn〕功能，也得到广泛应用。方法特点MALDI使质量很大的分子离子化，当与TOFMS1000000人体免疫球蛋白；DE-TOFMS300000.01%，FTMS1×10-6以下；MALDI10-18mol应用前景MALDI成为蛋白质分子量测定的常规方法。MALDI-MS〔二〕亲和色谱〔affinitychromatography,AC〕它的应用不再局限于生物样本的纯化，而是扩展到定量分析领域。分别机制传统的观念认为AC对目标分子的分别，仅仅是一种组分分别的选择性过滤法。然而，这一理论是建立在配基-安排系数过大、且在固定相上的吸附等温线多不呈线性。所以，关于生物大分子在AC中的保存机制及色谱过程数学模型的争论始终是一个相对薄弱的环节，有待进一步的完善。配基的选择和力的两种分子均可用于亲和色谱。如以单克隆抗体为配基〔固定相〕的免疫亲和色谱immunoaffinitychromatography,IA为配基的生物模拟亲和色谱biomimeticaffinitychromatography,BMA；以细胞膜为配基的细胞膜色谱cellmembrancechromatography,CM。方法特点AC具有较高的专属性，经其分别、纯化、浓集后的生物样品具有较高的纯度，大大降低了后续测定〔如HPLC〕时的背景噪音，进而使得后续测定具有极高的灵敏度。应用前景依据分别过程，AC可分为脱线AC和在线ACAC的分别和纯化技术，是目前广泛使用的模式。与脱线模式比较，在线AC更易实现分析操作的自动化，符合现代科学进展的需求。目前在线模式可分为以下两种应用方式。即高效亲和色谱〔high-performanceaffinitychromatography,HPAC〕和联用技术。高效亲和色谱柱的应用是一种较为简便的在线AC模式，但由于色谱柱造价昂贵，较难广为普及。在联用技术应用方式中，AC技术仍是作为生物样本的预纯化过程，随后通过柱切换技术与其他分析系统〔如HPLC〕联用进一步实现分别分析。〔三〕毛细管电泳〔capillaryelectrophoresis〕毛细管电泳〔CE〕是一种较的分别分析技术，仅有40年的历史。根本构造平面微构造毛细管电泳装置是承受微电子光刻蚀技术在2～5cm玻璃或硅片上光刻出的两条穿插的矩形槽组成的伪毛细管电泳柱microfabricatedcapillar、敞口进样系统和检测器一体扮装置〔见图5-1。该薄板只有1c×2cm1与2之间为进样管通道，长8mm；3416mm60μl。1、2、341875V/cm。方法特点plnl这就要求检测器具有极高的检测灵敏度和响应速度测器，其检测限已达分子水平。电化学检测器〔电化学微探针〕具有选择性好、灵敏度高的优点，在微型毛细管电泳中也是一种具有进展前途的检测技术。应用前景DNAKoutny20检测限为1-mol/。总之，微型毛细管电泳技术已成为毛细管电泳争论领域中一个的技术生长点，是现代仪器分析向小型化、集成化、一体化、自动化进展的前沿领域。信任在本世纪，它将在药学科学、生命科学等领域有着格外广泛的应用前景。〔四〕毛细管电色谱〔capillaryelectrochromatography,CEC〕CEC10年来综合了现代分别技术HPLCCE相色谱技术。CEC一般承受熔融石英毛细管，在柱内填充或在柱壁键合有固定相，用高压直流电源〔或加确定压力，利用电渗流electroosmoticflow,EO〕驱动流淌相。在CECCEC是HPLC和CECE水平的高柱效，同时又具有HPLC物质，又能分别带电组分。开拓了高效微分别技术的途径。分别机制保存机理CEC5-2〔u〕为：uu epueou

ex〔5-2〕ex 1k”εu ε

ε ξVo

〔5-3〕eo ηLqVuep6rL

〔5-4〕式中，uuep

——溶质的电泳速度和电渗流；k＇——溶质的容量因子·εr

——相对介电常数和确定介电常数；ξ和η——ZetaV、EL——电压、电场强度和色谱柱总长；qr——溶质的电量和半径式5-2说明溶质在柱中的保存是与它在两相中安排常数有关，因而它是一种色谱行为。但当被分析物质是离子时，其保存机制又类似于CE，依据其电泳淌度和安排系数的不同得以分别。因而CECCEHPLC柱效CECHPLC，可用VanDemeter方程式表征。应用目前，CEC主要用于芳香族化合物、染料、蛋白质、肽、寡聚核苷酸、氨基酸、对映体等的测定，尤其在对映体的测定中显现出强大的分别力气。前景随着CEC研制，可充分发挥其高效、快速、选择性强、灵敏度高的优点。通过各种联用技术，CEC必将在药物分析，尤其在生物样本和中药的分析中发挥应有的作用。三、中药分析法而药材的外观性状易受多种因素的影响，可能发生变异。〔一〕基因分析法〔DNAanalysis〕基因分析法是一种通过对不同生物个体遗传物质DNADNA分子标记技术鉴别药材的方法比在形态、组织、化学水平上检测更能代表中药的遗传本质，具有更高的准确度和牢靠性。经典的DNA分子标记技术经典的DNA〔restrictionfragmentlengthpolymorphism,RFL〕和串联重复序列分析技术tandemsequencerepeats,TS。其中，RFLP是将药材DNA用限制性内切酶消化后，进展限制性片段长度多态性分析，以确定其基因种属的特异性；TSR是通过确定载体对生物染色体上微卫星简洁重复序列〔microsatellite-simplesequencerepeats，MSSR〕进展克隆，并以此序列作探针检测DNADNA指纹图谱〔DNAfingerprintin。基于PCR的D