基因工程的基本操作程序七

第2节基因工程的操作程序目的基因的检测与及表达产物的测定基因工程的四大步骤：目的基因的获取基因表达载体的构建将目的基因导入受体细胞阅读P72并思考1、什么是目的基因？2、获取目的基因的方法有哪些？从基因文库中获取目的基因基因文库

基因组文库部分基因文库（如cDNA文库）基因文库的构建过程基因组文库限制酶供体细胞的全部DNA大量DNA片段拼接到载体上导入受体细胞扩增利用PCR技术扩增目的基因PCR的全称：聚合酶链式反应PCR的原理：体外的DNA复制

模板原料引物酶控制温度利用PCR技术扩增目的基因——目的基因DNA——四种脱氧核苷酸——某单链DNA分子片段——耐热的DNA聚合酶——PCR仪自动调控PCR的条件：PCR的过程：利用PCR技术扩增目的基因变性(90-95℃)复性(55-60℃)延伸(70-75℃)cDNA基因文库的构建过程mRNA单链DNA

双链DNA逆转录cDNA文库（部分基因组文库）依据目的基因的有关信息。如：根据基因的核苷酸序列基因在染色体上的位置基因的转录产物mRNA

基因翻译产物蛋白质等特性。从基因文库中分离获取目的基因用化化学学方方法法直直接接人工工合合成成条件件：：基因因较较小小，，核核苷苷酸酸序序列列已已知知。。二、、基基因因表表达达载载体体的的构构建建—核心心用切切目目的的基基因因相相同同的的限限制制性性内内切切酶酶切切割割质质粒粒二、、基基因因表表达达载载体体的的构构建建—核心心二、、基基因因表表达达载载体体的的构构建建—核心心目的的基基因因外显显子子内含含子子与RNA聚合酶结合位点编码区非编码区非编码区非编码区非编码区与RNA聚合酶结合位点编码区原核核生生物物基基因因真核核生生物物基基因因二、、基基因因表表达达载载体体的的构构建建—核心心1、基基因因表表达达载载体体的的组组成成目的的基基因因启动动子子终止止子子标记记基基因因等等二、、基基因因表表达达载载体体的的构构建建—核心心2、基基因因表表达达载载体体的的构构建建目目的的：：a.使目目的的基基因因在在受受体体细细胞胞中中稳稳定定存存在在，，并并且且可可以以遗遗传传给给下下一一代代。。b.使目目的的基基因因能能够够表表达达和和发发挥挥作作用用。。三、目的的基因导导入受体体细胞1、目的基基因导入入植物细细胞常用用的方法法是什么么？具体体过程是是怎样的的？2、目的基基因导入入动物细细胞常用用的方法法是什么么？基本本操作程程序是怎怎样的？？3、目的基因导导入大肠杆菌菌的方法是怎怎样的？钙离离子有什么作作用？1.目的基因导入入植物细胞常用的方法:农杆菌转化法法、基因枪法、花粉管通道法法农杆菌的特点点:a.易感染双子叶叶植物和祼子子植物。b.Ti质粒上的T-DNA可转移到受体体细胞，并整整合到受体细细胞染色体的的DNA上三、目的基因因导入受体细细胞三、目的基因因导入受体细细胞1.目的基因导入入植物细胞农杆菌转化法法的导入过程程:构建基因表达达载体转入农杆菌植物细胞导入稳定维持和表表达２.目的基因导入入动物细胞常用的方法:显微注射技术术操作程序：三、目的基因因导入受体细细胞a.先提纯含目的的基因的表达达载体b.从动物体内取取出卵(受精卵）c.显微注射仪进进行显微注射射d.将含目的基因因的受精卵移移植到输卵管管或子宫中发发育成新个体体3.目的基因导入入微生物细胞胞原核生物的特特点:繁殖快，多为为单细胞，遗遗传物质相对对较少。大肠杆菌的转转化过程:用Ca2+处理细胞增加细胞壁的的透性，与细细胞膜无关三、目的基因因导入受体细细胞→感受态细胞重组表达载体体DNA分子与感受态态细胞混合感受态细胞吸吸收DNA分子四、目的基因因的检测与鉴鉴定1、导入目的基基因后需要检检测哪些方面面？各采取什什么方法？2、什么是DNA分子子探探针针？？检检测测时时的的DNA探针针通通过过什什么么原原理理来来检检测测目目的的基基因因和和相相应应的的mRNA？3、利利用用抗抗体体－－抗抗原原杂杂交交检检测测的的原原理理是是什什么么？？目的的基基因因的的检检测测内内容容和和方方法法四、、目目的的基基因因的的检检测测与与鉴鉴定定1目的的基基因因插插入入2目的的基基因因是是否否表表达达DNA分子子杂杂交交技技术术基因因探探针针：：核核酸酸分分子子探探针针是是指指特特定定的的已已知知核核酸酸片片段段，，能能与与互互补补核核酸酸序序列列退退火火杂杂交交，，用用于于对对待待测测核核酸酸样样品品中中特特定定基基因因顺顺序序的的探探测测。。满足：：（1）必须须是单单链，，（2）带有有容易易被检检测出出来的的标记记物。。3.在遗传传工程程技术术中,下列何何种目目的基基因一一般以以直接接分离离的方方法获获得()A.人的胰胰岛素素基因因B.蚕的蚕蚕丝蛋蛋白基基因C.芽孢杆杆菌的的抗虫虫基因因D.菜豆储储藏蛋蛋白基基因4.1976年,美国的的科学学家首首次将将人的的生长长抑制制素释释放因因子的的基因因转移移到大大肠杆杆菌,并获得得了表表达,此文中中的表表达是是指该该基因因在大大肠杆杆菌()A.能进行行DNA复制B.能传递递给细细菌后后代C.能合成成生长长抑制制素释释放因因子D.能合成成人的的生长长素3.基因工工程是是在DNA分子水水平上上进行行设计计施工工的,在基因因操作作的基基本步步骤中中,不进行行减基基互补补配对对的步步骤是是()A.人工合合成目目的基基因B.目的基基因与与载体体结合合C.将目的的基因因导入入受体体细胞胞D.目的基基因的的检测测和表表达基因工工程同同步测测验一、选选择题题(每项只只有一一个正正确答答案)1．下列列有关关限制制性核核酸内内切酶酶的说说法，，正确确的是是A．限制制酶主主要是是从真真核生生物中中分离离出来来的B．限制制酶的的识别别序列列只能能由6个核苷苷酸组组成C．限制制酶能能识别别双链链DNA分子的的某种种特定定的核核酸序序列，，并使使每一一条链链中特特定部部位的的两个个核苷苷酸之之间的的磷酸酸二酯酯键断断开D．限制制酶切切割产产生的的DNA片段末末端都都为黏黏性末末端基因工工程同同步测测验2．有关关基因因工程程叙述述正确确的是是()A．限制制酶只只在获获取目目的基基因时时才用用B．重组组质粒粒的形形成是是在细细胞内内完成成的C．只要要目的的基因因进入入细胞胞就能能成功功实现现表达达D．蛋白白质的的氨基基酸排排列顺顺序可可能为为合成成目的的基因因提供供线索索基因工工程同同步测测验3．下图图为DNA分子在在不同同酶的的作用用下所所发生生的变变化，，图中中依次次表示示限制制性核核酸内内切酶酶、DNA聚合酶酶、DNA连接酶酶、解解旋酶酶作用用的正正确顺顺序是是A．①②③③④B．①②④④③C．①④②②③D．①④③③②基因工工程同同步测测验4．以下下甲、、乙两两图表表示从从细菌菌细胞胞中获获取目目的基基因的的两种种方法法，以以下说说法中中错误误的是是（）A．甲方方法可可建立立该细细菌的的基因因组文文库B．乙方法法可建立立该细菌菌的cDNA文库C．甲方法法要以脱脱氧核苷苷酸为原原料D．乙方法法需要逆逆转录酶酶参与基因工程程同步测测验5．目的基基因导入入受体细细胞后，，是否可可以稳定定维持和和表达其其遗传特特性，只只有通过过鉴定和和检测才才能知道道。下列列属于目目的基因因检测和和鉴定的的是()①检测受体体细胞是是否有目目的基因因②检测受体体细胞是是否有致致病基因因③检测目的的基因是是否转录录出mRNA④检测目的的基因是是否翻译译成蛋白白质A．①②③B．②③④C．①③④D．①②④基因工程程同步测测验7、(11分)(2012··新课课标标全全国国卷卷)根据据基基因因工工程程的的有有关关知知识识，，回回答答下下列列问问题题：：(1)限制制性性内内切切酶酶切切割割DNA分子子后后产产生生的的片片段段，，其其末末端端类类型型有有________和________。(2)质粒粒运运载载体体用用EcoRⅠⅠ切割割后后产产生生的的片片段段如如下下：：AATTC…………GG…………CTTAA为使使运运载载体体与与目目的的基基因因相相连连，，含含有有目目的的基基因因的的DNA除可可用用EcoRⅠⅠ切割割外外，，还还可可用用另另一一种种限限制制性性内内切切酶酶切切割割，，该该酶酶必必须须具具有有的的特特点点是是_____________________________。(3)按其其来来源源不不同同，，基基因因工工程程中中所所使使用用的的DNA连接接酶酶有有两两类类，，即即大肠肠杆杆菌菌DNA连接接酶酶和T4DNA连接接酶酶。。基因因工工程程同同步步测测验验(4)反转转录录作作用用的的模模板板是是________，产物物是________。若要要在体体外获获得大大量反反转录录产物物，常常采用用________技术。。(5)基因工工程中中除质质粒外外，________和________也可作作为运运载体体。(6)若用重重组质质粒转转化大大肠杆杆菌，，一般般情况况下，，不能能直接接用未未处理理的大大肠杆杆菌作作为受受体细细胞，，原因因是__________________________________。基因工工程同同步测测验8．酵母母菌的的维生生素、、蛋白白质含含量高高，可可生产产食品品和药药品等等。科科学家家将大大麦细细胞的的LTP1基因植植入啤啤酒酵酵母菌菌中，，获得得的啤啤酒酵酵母菌菌种可可产生生LTP1蛋白，，并酿酿出泡泡沫丰丰富的的啤酒酒。基基本的的操作作过程程如下下：基因工工程同同步测测验(1)该技术术定向向改变变了酵酵母菌菌的性性状，，这在在可遗遗传变变异的的来源源中属属于____________。(2)从大麦麦细胞胞中可可直接接分离离获得得LTP1基因，，还可可采用用________方法获获得目目的基基因。。本操操作中中为了了将LTP1基因导导入酵酵母菌菌细胞胞内，，所用用的载载体是是________________________。(3)此操作作中可可以用用分别别含有有青霉霉素、、四环环素的的两种种选择择培养养基进进行筛筛选，，则有有C进入的的酵母母菌在在选择择培养养基上上的生生长情情况是是____________________________________________________________________________________________________________。基因工程程同步测测验(4)除了看啤啤酒泡沫沫丰富与与否外，，还可以以怎样检检测LTP1基因在啤啤酒酵母母菌中的的表达？？________________________________________________________________________________________________________________________________________________。基因工程程同步测测验(1)该技术定定向改变变了酵母母菌的性性状，这这在可遗遗传变异异的来源源中属于于____________。(2)从大麦细细胞中可可直接分分离获得得LTP1基因，还还可采用用________方法获得得目的基基因。本本操作中中为了将将LTP1基因导入入酵母菌菌细胞内内，所用用的载体体是________________________。(3)此操作中中可以用用分别含含有青霉霉素、四四环素的的两种选选择培养养基进行行筛选，，则有C进入的酵酵母菌在在选择培培养基上上的生长长情况是是____________________________________________________________________________________________________________。(1)该技术定定向改变变了酵母母菌的性性状，这这在可遗遗传变异异的来源源中属于于__________