水黄皮种子 超低温保存技术规程

T/CSMAXXXX－2018水黄皮种子超低温保存技术规程范围本标准规定了水黄皮[Pongamiapinnata（L.）Pierre]种子超低温保存过程中的术语和定义、种子的选择、种子前处理、种子保存量、种子冷冻方式、恢复培养等技术要求。本标准适用于水黄皮种子的超低温长期贮藏。规范性引用文件下列文件对于本文件的应用是必不可少的。凡是注日期的引用文件，仅注日期的版本适用于本文件。凡是不注日期的引用文件，其最新版本（包括所有的修改单）适用于本文件。GB/T3543.6农作物种子检验规程水分测定GB/T3543.7农作物种子检验规程其他项目检验术语和定义下列术语和定义适用于本文件。水黄皮Pongamiapinnata（L.）Pierre为豆科（Leguminosae）水黄皮属（PongamiaVent.）单种属乔木，高8~15m。总状花序腋生，花冠白色或粉红色；耐海水浸泡，果实能在水面上漂浮传播，也称“水流豆”，有“半红树”之誉，是热带地区沿海防护林和行道树种。木材纹理致密，可制作各种器具；种子油可作燃料；全株入药，可作催吐剂和杀虫剂；水黄皮素具有微弱的抗结核杆菌作用。。收载于《中国中药资源志要（1994）》。水黄皮果实Pongamiapinnata（L.）Pierrefruits荚果长4~5cm，宽1.5~2.5cm，表面有不甚明显的小疣凸，顶端有微弯曲的短喙，不开裂，沿缝线处无隆起的边或翅，有种子1粒；种子肾形。水黄皮种子Pongamiapinnata（L.）Pierreseeds水黄皮的播种材料为完整种子，贮藏特性判断为顽拗性种子。种子黄色，肾形，通常1颗。种子超低温保存seedofcryopreservation指将经过前处理的水黄皮种子置于液氮（-196℃）中保存。种子的选择果实采收8月至10月，当荚果由绿色变为褐色时，即可采收，可树上采摘或在林下收集，果实经晾晒脱荚，取出种子。种子选择挑选发育饱满、均匀、健康的种子，置于4℃冰箱中保存备用（存放时间不超过2个月）。种子前处理生活力检测参照GB/T3543.7中的2，3，5-三苯基氯化四氮唑（TTC）法检测种子生活力。随机抽取30粒种子，沿种脊小心将种子分成2爿，放培养皿内，内侧面向下，滴入TTC溶液浸没种子，室温（25℃）避光放置4h后观察染色结果。生活力计算直接用肉眼对染色结果进行观察鉴定。凡胚及胚乳全部染成有XX的鲜红色，且组织状态正常的，为有活力的种子；否则为无生活力的种子。计算：生活力=有活力的种子数/总的种子数×100%待保存的水黄皮种子生活力应≥90%。含水量范围用尼龙网袋包裹水黄皮种子，置于盛有变色硅胶的干燥器内，硅胶与种子的体积比为600:1，室温条件下干燥处理0~60h，在干燥过程中定期测定种子含水量，将种子含水量由40%~45%降至15%~40%。参照GB/T3543.6中的高恒温烘干法（130℃烘干1h）测定种子含水量（W0），W0=（鲜重-绝干重）/鲜重×100%。种子保存量水黄皮种子保存量不少于240粒，以便后期的活力检测使用。种子冷冻方式水黄皮种子超低温保存的冷冻方式为直接冷冻法，即将待保存的水黄皮种子放入15mL冻存管（每管6粒种子）中，迅速投入液氮中保存。恢复培养种子解冻处理液氮中至少冻存24h后，取出5个冻存管，立即放入40℃水浴中快速解冻2min。冻后种子生活力检测取出15粒解冻后的种子，参照5.1~5.2生活力检测方法，进行超低温保存后的初始生活力检测。当种子生活力≥75%时视为保存成功。恢复培养将剩下15粒解冻后的水黄皮种子，40℃浸泡12~24h，待种子软化膨胀后去掉种皮，播种到带有无菌滤纸的带盖发芽盒中，温度20℃~25℃，湿度70%~85%条件下培养。附录TTC的配制和保存方法精密称取TTC1.00g，溶于100mL磷酸盐缓冲液中，制成浓度为1%的TTC溶液，调pH至6.5~7.5，置棕色瓶内4℃冰箱备