1单细胞藻类的培养4-26

第四节单细胞藻类的培养方法

五步法容器和工具的消毒——培养液的配制——接种——培养管理——采收一容器和工具的消毒目的：消灭藻类的捕食者和竞争者方法：物理消毒法：高温高压灭菌直接灼烧法煮沸法烘箱干燥法紫外线消毒法化学药品消毒：

70%酒精法

高锰酸钾法漂白粉法（CaClO2）稀盐酸法

石炭酸洗液漂白粉按0.1-0.3‰配成漂白粉水溶液，将器具在溶液中浸泡30分钟，再用煮沸消毒水冲洗3-4次即可。对于水泥池等，将配成糊状漂白粉溶液遍洒池壁，半小时后，用消毒水冲洗干净。消毒后的容器需停放12小时才能使用。酒精用70%浓度的酒精进行消毒，将酒精涂抹在器具表面，5分钟后，用消毒水冲洗2-3次。高锰酸钾配成5ppm浓度的高锰酸钾溶液洗涤器皿，也可遍洒培养池的壁，然后用消毒水冲洗干净。石炭酸按3-5%比例配成溶液，将干净的器具在溶液中浸泡30分钟，再用消毒水冲洗干净。二培养液的配制培养用水的消毒培养液的成分配方的选择和营养盐用量的计算营养盐的添加1培养用水的消毒加热消毒法过滤除菌法次氯酸钠消毒法紫外线消毒磁化水常量元素包括N、P、Fe、K、Mg、S、Ca、Si等微量元素包括B、Mn、Zn、Cu、Mo、Co、Ti、W、Cr、Ni、V、Cd、Sr等辅助生长有机物主要种类：维生素B12、维生素B1、维生素B2、维生素B6、维生素H、叶酸、泛酸钙、葡萄糖、酵母抽出物、鱼粉等缓冲剂在培养液中起缓冲作用，常用缓冲剂有三羟基甲烷、二甘氨酸、EDTA。植物生长激素培养液中加入某些植物生长激素，如赤霉素，可以促进藻类细胞生长，用量为。2培养液的成分藻类培养液制备与配方

根据培养液的性质，藻类培养液可分为无机培养液和有机培养液配制无机培养液的原则离子间相互平衡的培养液，称为生理培养液在配制原液时，必须使各种盐类完全溶解，不发生沉淀，原液应该无色透明。培养液的稀释水，在进行纯培养或科研时用蒸馏水，在大量生产培养时，用自来水或消毒的海、淡水。在配制培养液时，配方中常量元素可直接称取或先配成母液后移取，微量元素通常先配成浓缩1000倍的母液后移取有机培养液的配制大面积培养小球藻或栅藻，主要用有机培养液可用天然淡、海水配制培养液，天然淡、海水中已存在着植物必须吸收的各种营养成分，因此只需补充某些在培养中可能引起缺乏的营养元素即可。尤其是大量生产中，往往只加入最主要的几种营养元素，可使用农肥、大草浸出液、污水、动物粪尿及食品加工废料等。3营养盐的添加逐一加入营养盐，并在下一种营养盐加入之前进行充分搅拌营养盐加入的顺序：先氮，后磷，再铁……，直至所有营养盐都按需加入到消毒水中根据培养藻类对各种营养盐的需求选择适宜配方4配方的选择与营养盐用量的计算F/2配方NaNO374.8mgNaH2PO4Na2SiO3·9H2F/2微量元素溶液1ml

F/2维生素溶液1ml海水1000ml

F/2微量元素溶液ZnSO4·4H2O--------------------23mgMnCl2·4H2CuSO4·5H2O-------------------10mgFeC6H5O7·5H2Na2MoO4·2H2CoCl2·6H2O--------------------12mgNa2H2O---------------------------1000mlF/2维生素溶液维生素B12-----------------0.5mg维生素维生素B1----------------100mgH2O---------------------1000ml

采样用25号浮游生物网在水水体中捞取水样镜检将采回的水样进行镜检，如果发现有需要分离的藻类，在水样中数量较多，可立即进行分离，若数量少，分离困难，就进行预备培养，待其数量增多后，再进行分离；预备培养用作预备培养的培养液，各种藻类是不同的，一般绿藻和硅藻的浓度应小一些，一般只有原配方的1/2、1/3或1/4。对一些难以培养的藻类一般要加入土壤浸出液。如果水样中藻类较多，就应该同时使用几种不同的培养液进行培养，使藻类在适合自己繁殖的培养液中进行生长繁殖藻种的分离分离微吸管分离法趋向运动法毛细吸管法稀释分离法平板分离法

平板基的制备：调配—融化—分装—灭菌喷雾或划线法分离培养（20d）镜检，挑取要分离的藻类群落，液体培养，直至获得单种培养为止其中：平板分离法获得单种培养后，就可以进行扩大培养。藻种的培养要求比较严格，培养容器可用不同规格的三角烧瓶，容量为100、300、500、1000、5000ml等，这样适宜于逐步扩大培养。藻种的培养藻种的保藏保藏方法液体培养基保藏固体培养基保藏固液双相培养基保藏保藏条件低温弱光三接种接种就是把选为藻种的藻液接入新配好的培养液中成功接种的关键是把握好藻种的质量、藻种的数量和接种的时间质量要求选择生活力强，生长旺盛，颜色正常，能运动的种类应选活泼运动、上浮力强（无运动能力的，应选择能均匀悬浮于水层中），无大量沉淀，无敌害生物污染的做藻种。藻种的数量：保证高比例接种藻种级培养时的藻种量与培养液量之比为1∶2-1∶4中继培养和生产性培养的接种比例一般不小于1∶10-1∶20接种时间要求：一般应选择在晴天上午8-10时接种白天藻细胞可以进行光合作用，有趋光上浮习性，使藻细胞避免下沉这样能够把上浮的、运动能力强的、生命力旺盛的藻细胞选作藻种，以缩短接种后的延缓期四、单胞藻的培养管理日常管理藻细胞生长环境因子的监测和调控藻类生长情况检查宏观上，可检查藻液的颜色、藻细胞的运动或悬浮的情况、有无藻细胞沉淀或附壁，有无菌膜或敌害的产生等微观上，可在显微镜下检查藻细胞的形态有无异常，有无敌害生物的出现，藻细胞数量增加情况等搅拌和充气通过搅拌或充气增加水和空气的接触面，使空气中的二氧化碳溶解到培养液中，补充由于藻细胞光合作用对二氧化碳的消耗；帮助沉淀的藻细胞上浮获得光照；抑制水表面产生菌膜。调节光照利用太阳光培养，必须根据天气情况，调节光照强度，室内培养，可放在窗口附近，但要避免直射光；对室外的培养池或培养缸，在强光下，应把遮光帘盖上，阴雨天光照差，应揭开遮帘。

保温当温度过高或过低时，要采取措施保持适宜的温度。室内培养，在