细胞培养基及其添加物

细胞培养基和添加物细胞培养基的基本成分不同培养基之间的区别常用的几种培养基及其组成成分细胞培养基中的添加剂及其作用细胞培养基的基本成分氨基酸维生素碳水化合物

无机盐缓冲系统

HEPES(NaHCO3)与CO2体系进行缓冲常用培养基1、RPMI-1640MediumRPMI是RoswellParkMemorialInstitute的缩写，代指洛斯维.帕克纪念研究所。

2、MinimumEssentialMedium(MEM)也称最低必需培养基，它仅含有12种必需氨基酸、谷氨酰胺和8种维生素。成分简单，可广泛适应各种已建成细胞系和不同地方的哺乳动物细胞类型的培养。MEM-Alpha3、dulbecco‘smodifiedeaglemedium(DMEM)其特点主要包括以下：（1）氨基酸含量为依格尔培养基的2倍，且含有非必需氨基酸，如甘氨酸等；（2）维生素含量为依格尔培养基的4倍；（3）含有糖酵解途径中的重要物质——丙酮酸；（4）含有微量的铁离子。5、DMEM/F12DMEM/F12培养基适于克隆密度的培养。F12培养基成分复杂，含有多种微量元素，和DMEM以1：1结合，称为DMEM/F12培养基(DME/F12medium)，作为开发无血清配方的基础，以利用F12含有较丰富的成分和DMEM含有较高浓度的营养成分为优点。该培养基适用于血清含量较低条件下哺乳动物细胞培养。为了增强该培养基的缓冲能力，改良之一是在DMEM/F12(1：1)中加入15mMHEPES缓冲液。6、McCoy’s5A7、Iscove’sModifiedDulbeccoMedium(IMDM)Guilber和Iscove将Dulbecco’Medium改良为Iscove’sMedium，此种培养液含有硒、额外的氨基酸和维生素、丙酮酸钠和HEPES。并用硝酸钾取代了硝酸铁。IMDM为营养非常丰富的培养液。8、M-199Medium9、LeibovitzMedium(L-15)L-15培养液适用于快速增殖瘤细胞的培养，用于在CO2缺乏的情况下培养肿瘤细胞株。此培养液采用磷酸盐缓冲体系，氨基酸组成进一步改良，并由半乳糖替代了葡萄糖。10、Ham’sF-10培养基：适应小鼠细胞、人类二倍体的培养。11、Ham’sF-12培养基：可以在加入很少血清的情况下应用，特别适合单细胞培养和克隆化培养，是无血清培养中常用的基础培养液。细胞培养基中的添加剂及其作用1.L-谷氨酰胺(L-Glutamine)在细胞培养中重要吗?它在溶液中不稳定吗?是细胞生长的必须氨基酸，为培养的细胞提供重要的能量来源。脱掉氨基后，L-谷氨酰胺可作为培养细胞的能量来源、参与蛋白质的合成和核酸代谢。L-谷氨酰胺在溶液中经过一段时间后会降解，降解率随保存温度而变。L-谷氨酰胺的降解导致氨的形成，而氨对于一些细胞具有毒性。2.GlutaMAX-I是什么?培养细胞如何利用GlutaMAX-I?这个二肽有多稳定?GlutaMAX-I即谷丙氨酸二肽，是一个L-谷氨酰胺的衍生物，其不稳定的alpha-氨基用L-丙氨酸来保护。一种肽酶逐渐裂解二肽，释放L-谷氨酰胺供利用。GlutaMAX-I二肽非常稳定，即使在121磅灭菌20分钟，GlutaMAX-I二肽溶液有最小的降解，如果在相同条件下，L-谷氨酰胺几乎完全降解。3.培养基中丙酮酸钠的作用是什么?丙酮酸钠可以作为细胞培养中的替代碳源，尽管细胞更倾向于以葡萄糖作为碳源，但是，如果没有葡萄糖的话，细胞也可以代谢丙酮酸钠。4.Hank′s平衡盐溶液(HBS)和Earle′s平衡盐溶液(EBS)有什么本质的功能差别?HBS和EBS的主要差别在于碳酸氢钠的水平,在Eagle′s(2.2g/L)中比在Hanks′(0.35g/L)中高。碳酸氢钠需用高水平的CO2平衡，以维持溶液的PH值。Eagle′s液在空气水平的CO2中，溶液会变碱，Hanks′液在CO2培养箱中会变酸。如果希望在CO2培养箱中保存组织，需要用Eagle′s液，。如果仅仅是清洗将要在细胞培养基中储存的组织，用Hanks′液就可以了。5.培养液pH对细胞生长的影响?由于大多数细胞适宜pH为7.2-7.4，偏离此范围可能对细胞生长将产生有害的影响。但各种细胞对pH的要求也不完全相同，原代培养细胞一般对pH变动耐受差，无限细胞系耐受力强。但总体来说，细胞耐酸性比耐碱性强一些。在配制培养用液时，需要注意一点：培新配的培养基在经过0.10um或0.22um滤膜过滤时，溶液的pH还会向上浮动0.2左右。6.培养细胞时应使用5%还是10%CO2，或者根本没有影响?答：一般培养基中大都使用HCO3-/CO32-/H+作为pH的缓冲系统，而培养基中NaHCO3的含量将决定细胞培养时应使用的CO2浓度。当培养基中NaHCO3含量为每公升3.7g时，细胞培养时应使用10%CO2;当培养基中NaHCO3为每公升1.5g时，则应使用5%CO2培养细胞。7.Hepes的作用HEPES溶液：是一种弱酸，中文名字是羟乙基哌秦乙硫磺酸，主要作用是防止培养基pH迅速变动。在开放式培养条件下，观察细胞时培养基脱离了5%CO2的环境，CO2气体迅速逸出，pH迅速升高，若加了HEPES，此时可以维持pH7.0左右。8.NaHCO3培养基中使用了NaHCO3-CO2缓冲系统，并采用开放培养，使细胞代谢产生的CO2及时溢出培养瓶，再通过稳定调节温箱中CO2浓度(5%)，与培养基中的NaHCO3处于平衡状态，从而调节培养基的PH值。9.NEAA：非必须氨基酸NEAA(非必需氨基酸)是含几种非必需氨基酸的合剂，添加到的原培养基不同，10.氯化钙氯化钙对成骨细胞培养有毒性，所以成骨细胞的培养基中应不含氯化钙。11.什么培养基中可以省去加酚红?酚红在培养基中用作pH值的指示剂：中性时为红色，酸性时为黄色，碱性时为紫色。酚红本身对生物制品质量并不会产生影响，可以通过纯化技术去除，但酚红在无血清培养基可能带来胞内钠/钾失衡，影响细胞生长，当然这种作用能被血清所中和或减轻。酚红