微生物限度检查方法适用性试验课件

微生物限度检查方法适用性试验方案PAGEPAGE10验证方案组织与实施组，参与实施。部门/职务签部门/职务签名日期质量管理部QC部门/职务签部门/职务签名日期质量管理部QC经理部门/职务批准人部门/职务批准人批准日期质量管理部质量总监目 录一、概述二、验证目的和风险评估三、验证内容四、方法判定六、参考文献七、结果评价及结论1、概述：母菌计数方法的适用性试验和控制菌检查方法的适用性试验，以确认所采用的方法适合于该产品的需氧菌、霉菌和酵母菌数的测定和控制菌检查。由于依照中国药典2010版的检查方法验证,需氧菌、霉菌和酵母菌、控制菌均采用平皿法。故现升级为中国药典2015版，需氧菌、霉菌和酵母菌及控制菌均采用平皿法进行方法适用性试验。2、试验目的和风险评估：物限度检查。风险评估：项目未按方案执行试验过程操作不当3、验证内容：

潜在失效模式试验部分项目出现偏差和漂移未达到试验标准

失效影响正确性试验失败

采取措施严格执行经批准的试验方案未严格遵循试验方案规定品名批号规格来源胰酪大豆胨琼脂培养基微生物限度检查用中检所沙氏葡萄糖琼脂培养基微生物限度检查用中检所胰酪大豆胨液体培养基无菌检查和微生物限度检查用中检所沙氏葡萄糖液体培养基微生物限度检查用中检所麦康凯琼脂培养基微生物限度检查用中检所麦康凯液体培养基确认人：微生物限度检查用确认日期：中检所培养基名称配制方法培养基名称配制方法PH7.0氯化钠-蛋白胨缓冲液取本品14.63g，加水1000ml，加热溶解，分装，121℃，15分钟灭菌，备用。胰酪大豆胨琼脂培养基40g1000ml，加热溶解，分装沙氏葡萄糖琼脂培养基65.0g1000ml，加热溶解，分装胰酪大豆胨液体培养基29.8g1000ml，加热溶解，分装沙氏葡萄糖液体培养基30.0g1000ml，加热溶解，分装麦康凯琼脂培养基50.0g1000ml，加热溶解，分装麦康凯液体培养基35.01000ml，加热溶解，分装确认人： 确认日期：名称型号名称型号校验单位有效期至生化培养箱生化培养箱生化培养箱确认: 确认日期：、验证试验用菌种：菌种名称代号传代代数来源金黄色葡萄球菌CMCC（B）26003中检所大肠埃希菌CMCC（B）44102中检所铜绿假单胞菌CMCC（B）10104中检所枯草芽孢杆菌CMCC（B）63501中检所白色念珠菌CMCC（F）98001中检所黑曲霉菌CMCC（F）98003中检所确认人：确认日期：试验方法：取供试品10 g加PH7.0氯化蛋白胨缓冲液至100ml→1:10供试液。需氧菌、霉菌和酵母菌控制菌采用常规法。菌液的制备：取金黄色葡萄球菌、铜绿假单胞菌、大肠埃希菌、枯草芽孢杆菌的胰酪大豆胨琼脂斜面培物一铂金饵，加入胰酪大豆胨液体培养基中置30～3518～24h1ml加入9ml0.910-11010～71ml20ml各菌悬液平行制备两个平皿，平皿法培养计数，取小于100CFU/ml和1000CFU/ml的菌液备用。取白色念珠菌的沙氏葡萄糖琼脂斜面培养物，加入沙氏葡萄糖液体培养基中置20～2524～48h1ml9ml0.910-1的菌液，依法1010～7，1ml注入平皿中，立即倾注沙氏葡萄糖琼脂培养基25ml液平行制备两个平皿，平皿法培养计数，取小于100CFU/ml和1000CFU/ml的菌液备用。5-73-5ml0.05%聚800.9%1ml0.05%809ml0.9%10-11010～71ml25ml100CFU/ml1000CFU/ml的菌液备用。需氧菌、霉菌和酵母菌计数方法适用性试验：供试液制备：取供试品10（ml或c2，加PH7.0100m1:10供试液。实验条件：需氧菌培养温度3～5天 培养箱：霉菌和酵母菌培养温度5～7天 培养箱：试验方法：试验组：0.1ml1000CFU的铜绿假单胞菌、金黄色葡萄球菌、枯1ml45℃20ml30～35℃320.1ml1000CFU白色念珠菌、黑曲霉菌液，混匀后分别1ml45℃20ml30～35℃521ml45℃的沙氏葡萄20ml20～25℃529.9ml0.1ml1000CFU的菌液，按试验组操作,倾注温度不超过45℃的胰酪大豆胨琼脂培养基和沙氏葡萄糖琼脂培养基，置与试验组相同条件下培养,计数。每株试验菌平行制备2个平皿。供试品对照组：取供试液1ml，倾注温度不超过45℃2实验结果范围内。比值=试验组菌落数～供试品对照组的菌落数*对照组菌落数需氧菌计数方法适用性试验结果供试品菌种类型试验组菌液组比值对照组供试品菌种类型试验组菌液组比值对照组铜绿假单胞菌金黄色葡萄球菌枯草芽孢杆菌白色念珠菌黑曲霉检验人： 日期：复核人： 日期：供试品菌种类型试验组菌液组比值对照组供试品菌种类型试验组菌液组比值对照组铜绿假单胞菌枯草芽孢杆菌白色念珠菌黑曲霉检验人： 日期：复核人： 日期：试验次数供试品批:供试品菌种类型 试验组 菌液组对照组比值铜绿假单胞菌金黄色葡萄球菌枯草芽孢杆菌白色念珠菌黑曲霉检验人：日期：复核人：日期：3.7.4.3霉菌和酵母菌计数方法适用性试验结果试验次数供试品批:供试品菌种类型 试验组 菌液组对照组比值白色念珠菌黑曲霉检验人：日期：复核人：日期：试验次数供试品批:供试品供试品菌种类型试验组菌液组比值对照组白色念珠菌黑曲霉检验人： 日期：复核人： 日期供试品菌种类型试验组菌液组比值对照组供试品菌种类型试验组菌液组比值对照组白色念珠菌黑曲霉检验人： 日期：复核人： 日期结论:检验人： 日期：复核人： 日期：控制菌微生物检测方法适用性试验：实验方法：10ml100cfu培养18-24小时,取上述培养物1ml100ml24-4830～35℃18-72小时。试验组应生长良好。10ml,加入胰酪大豆胨液体培养基中，置30～35℃18-24对照应无菌生长。100cfu大肠埃希菌菌液加入胰酪大豆胨液体培养基中，置30～35℃培养18-24小时,取上述培养物1ml接种至100ml麦康凯液体培养基中，42～44℃培养24-48小时。取麦康凯液体培养物划线接种于麦康凯琼脂培养基平板上30～35℃培养18-72小时。阳性对照组应生长良好。3.8.2实验结果：试验次数：1供试品批号:控制菌项目常规法试验组大肠埃希菌阳性对照组阴性对照组检验人： 日期：复核人： 日期：试验次数：2供试品批号:控制菌项目常规法试验组大肠埃希菌阳性对照组阴性对照组检验人： 日期：复核人： 日期：控制菌项目常规法试验组大肠埃希菌阳性对照组控制菌项目常规法试验组大肠埃希菌阳性对照组阴性对照组3.8.3结论：检验人： 日期：复核人： 日期：