实验动物学重点

一：转基因动物:指用人工方法将外源基因导入或整合到基因组内，并能稳定传代的一类动物。二：DNA显微注射法的基本程序：1通过激素疗法使小鼠超数排卵，开始时注射雌性妊娠血清，48小时后再注射人绒毛膜促进腺激素，这时小鼠便会超数排卵，一般情况下5-10个，超数排卵为35个；2与雄性小鼠交配，然后杀掉小鼠，从其输卵管内取出受精卵；3将经纯化的转基因样品迅速注射入受精卵中变大的雄性原核内；4将25-40个注射了转基因的受精卵移植入代孕小鼠体内；5受精卵发育成胚胎，并繁殖成转基因小鼠子代；6从小鼠子代体内取出DNA样品，进行杂交，鉴定转基因的整合与否及位点；7子代小鼠间进行再交配，繁殖，观察转基因是否遗传及表达。三：超数排卵方法：第一天腹腔注射PMSG，第三或第四天腹腔注射HCG程序：(1)于第一日中午先向小鼠腹腔内注入5一l0单位的PMS；(2)过48小时(第三天中午)腹腔内注入5—10单位的人hCG(注射后11—13小时后排卵)；(3)令雌雄动物一对一的合笼交配；动物半夜交尾，如未发生交配，两周后可再重用，但成功率下降；(4)检查阴栓(第四日晨)；检查阴栓可判定是否受精；如已受精则出现阴栓。四：影响实验动物“演出型”的主要环境因素1.温度：（1）实验动物大多数属于恒温动物（2）临界温度：（4）温度对实验动物的影响：①对繁殖、育成的影响②影响代谢③影响健康与抗感染能力④激发应激反应⑤对实验结果的影响2.湿度：国标：Hr：40～70％(50+_5％)3、臭气：NH3：41ppm可引起金鱼40％死亡；NH3：25～250ppm可引起大鼠鼻炎、中耳炎、支气管炎，支原体性肺炎；NH3：25ppm以下对人不产生危害国标：14mg/M—20ppm4、噪声：（1）对繁殖生长的影响(2)对实验结果的影响：金属钙化可使血检明显变化DBA心跳、呼吸、血压、明显增加（3）听源性痉挛：国标：60dB（A）5、空气溶胶：（1）粉尘dust对动物的影响：对皮肤、鼻粘膜、眼、消化、呼吸出现有害作用。（2）落下菌数：国标：落下菌数（个/皿）普通环境：30屏障环境：3隔离环境：无检出6、气流和风速：①风速（m/s）0.1～0.2②换气次数（次/h）普通环境8~10屏障环境10～20隔离环境20～50③压力梯度：（Pa）屏障环境20～50隔离环境100～1507、照明①照度对视网膜可造成障碍；②对离乳率的影响③对繁殖的影响。国标：（1）照度（lx）①工作照度：150～300②动物照度：15～20（2）昼夜交替时间（h）12/12或10/14五：洁净区人、物的移动路向（1）人员的移动路向：一更衣—淋浴—二更衣—风淋—清洁走廊—（内准备室）—饲养室或动物实验室—亚清洁走廊—一更衣—外部（2）物品的移动路向：物品—高压灭菌（包装的消毒物品可以经传递窗，笼具泡有消毒液的渡槽）—清洁准备室——清洁物品储藏室—饲养室或动物实验室—废物经包装处理—亚清洁走廊—外部（3）实验动物的移动路向：外来实验动物—检疫室（经检疫后）—传递窗—清洁走廊（内准备间）—饲养室或动物实验室—亚清洁走廊—外部六：小鼠：一：生物学特性：分类：哺乳纲，嚙齿目，鼠科，鼠属，小家鼠种。齿式：1003/1003=16，门齿终身生长。无汗腺，尾有散热、平衡、自卫等功能。胃容量约1－1.5毫升。雄性脾脏大于雌性约50%。淋巴系统发达。雌性为双子宫，乳腺发达，繁殖力强，生长期短，成熟早，为全年多发情动物。性情温駲，对环境敏感，喜黑暗安静环境。染色体20对，寿命约2—3处，成年体长约110毫米，体重18－40克。体温37－39℃。呼吸140—210次/分，平均163次/分。心率310—840次/分。雌性发情期4—5天、孕期19—21天。内部脏器：食道约2厘米，内壁有一层厚的角质化鳞状上皮，有利于灌胃操作。胃容量小（1.0－1.5毫升），功能差，不耐饥饿，灌胃时量不能太多。肠道相对较短，盲肠不了达，排空快，故每天能吃4－8克。有胆囊。胰脏分散在十二指肠，胃底及脾门处，色淡红，不规则，似脂肪组织。脾脏有造血功能。淋巴系统发达，可是没有腭或咽扁桃体，胸腺在性成熟前后大，35－80日龄退化。乳腺发达，胸部有3对，腹部有2对，哺乳期小鼠胸部乳腺可延伸至颈部和背部。子宫呈Y形双子宫角型，卵巢由系膜包绕不与腹腔相通，故无宫外孕之虞。二、主要品种品系：1.封闭群：KM、ICR、NIH；2近交系：C57BL/6、C3H/HE、BALB/C、DBA/2、CBA、A、AKR、TAI、TA2、615三在医学中应用：药物评价，毒性试验，肿瘤研究，传染病研究，遗传学及遗传病研究，免疫学，老年病，计划生育研究等。大鼠：一、

生物学特物性：分类：哺乳纲、啮齿目、鼠科、大鼠属。由褐家鼠变种而来。齿式1003/1003。性情温顺，易于调教，嗅觉发达，味觉差，对营养缺乏敏感，喜安静，噪声和不适光照对繁殖影响大，对环境敏感。汗腺不发达；无胆囊。肝再生能力强，不能呕吐。染色体12对，寿命2.5—3年。妊娠期19—23天，性周期4—5天。体温39（38.5—39.5）℃。心率475（370—580）次/分。呼吸85.5（66—114）次/分。二、常用品种品系１.封闭群：SD、Wistar。2.近交系：F344、ACL、SHR及WKY兔：分类：哺乳纲、兔形目、兔科、兔属。（由野生穴兔驯化而成）齿式：2033/1023。染色体22对。草食性动物，性温柔，听觉、嗅觉灵敏，有夜行性和嗜眠性。喜干怕热，有啮齿动物行为和食粪性。刺激排卵，孕期约30天。甲状旁腺分布较散，眼球巨大，耳大血管清晰。体温38.5—39.5℃，对致热物质反应敏感。有特殊的血型和唾液型。二、主要品系1.日本大耳白兔2.新西兰白兔3.青紫兰白兔4.中国白兔。三：应用：热源反应、免疫学、生殖医学、眼科、心血管病、微生物、皮肤反应、遗传病、避孕药研究等豚鼠：分类：啮齿目、豚鼠科、豚鼠属。又名荷兰猪、天竺鼠、海猪。齿式：1013/1013。染色体32对。属草食动物，盲肠发达，胃壁薄，胆小温顺，对外界刺激敏感，喜群居，听觉发达，喜安静干燥清洁环境。孕期65—70天，胚胎发育完全，寿命4—5年。常用于免疫学、传染病、药物学、营养学、耳科学等研究等犬：属于食肉目、犬科、犬属。齿式：乳齿：3140/3120成年齿：3142/3142。嗅觉、听觉灵敏易于驯养调教。环境适应能力强、视力差，对移动物体感觉灵敏，红绿色盲。喜食肉类，雄性好斗。汗腺不发达。性成熟8—10个月、孕期58—63天，春秋季发情，寿命10—20年，染色体39对。国际上专用于实验的品种主要为毕格犬（Beagle）。常用于外科学、药理、毒理学实验、基础医学、传染病研究。毕格犬的品种特征：体型小，成年体重为7－10公斤，体长30－40厘米，短毛，花斑色。性情温和，易于驯服和抓捕，亲人。性成熟期早，约8－12个月，产仔数多。属于双子宫角型。遗传性能固定且优良。反应一致性好，形态体质均一，体温稳定。适应力强，抗病力较强。毕格犬的应用。毕格犬实验时易于抓捕，便于操作，实验重复性好，特别适合药理、循环生理、眼科、毒理、外科学等的研究。目前世界上年用量约为10万只。七影响营养需求的因素：(一)、遗传因素：1不同品种、不同品系的动物其营养需求不同。2因遗传基因的表达程度不同而影响营养需求。3近交系动物对蛋白质的需求要比封闭群动物要高。(二)、生理状况：动物在不同的生理状况过程中对营养需求会有所不同。(三)、环境因素：就恒温动物来说，若长期在低温下，动物必须产生较多的热能以维持体温的恒定，饲料中就要增加能量原料。如长期在高温环境下，则动物的采食量就会下降，为了保证动物的正常的生长，就把饲料的营养素浓度提高。(四)、微生物状态：微生物在肠道中栖生，产生如水溶性VB、K及氨基酸等营养物质。通常這些物质很少被机体再吸收利用，除非有食粪便行为再摄取。食粪行为与动物的种类、饲料成分、饲养条件的不同而发生。(五)、研究条件：实验操作如外科手术或于饲料中添加测试药物时，会造成动物紧张或改变饲料的适口性，进而影响饲料的采食。在限制性采食的实验中应调整饲料配方，增加部分养分的浓度，以补充因摄食减少而导致不足的部分。(六)、营养成分的相互作用：某些营养素摄取量增加时往往影响另外营养素的吸收和利用。如能量和蛋白。不同的矿物质会竞争同一吸收门户或同一运送系统，从而影响到彼此被吸收的效率。八饲料的消毒：高温高压灭菌法：最常用最可靠的方法，要求121℃，1.0Kg/cm²,15分钟以上。会造成营养损失。干热灭菌法：置烤箱内70-80℃，6小时。这种方法营养损失极大，消毒后饲料会变得干硬，从而适口性下降，同时花费时间，最少用。射线照射灭菌法：采用Co60-射线照射,灭菌总剂量为3－5Mrad。这种方法营养损失最少，也最方便，有条件的话应当首选。但太昂贵，不便推广。药物熏蒸灭菌法：用化学药品如氧化乙烯消毒剂的气雾对饲料饲料进行熏蒸消毒。但是操作麻烦，又因饲料中会残留有害物，也不太好九1、实验动物：经人工培育，对其携带的微生物及寄生虫实行控制，遗传背景明确或来源清楚，用于科学研究、教学、生物制品或药品鉴定以及其它科学实验的动物。2、实验用动物：用于实验的动物的统称，它包括实验动物、家畜、家禽和野生动物。实验动物来源于野生动物或家畜家禽，但又不同于野生动物和家畜家禽。十：近交系:至少经过20代以上连续全同胞或亲子交配，品系内所有个体都可追溯到起源于第20代或以后代数的一对共同祖先的动物群。近交系数达98.6%以上。亚系：近交系由于残余杂合性和突变而导致部分遗传组成的改变，指一个近交系内各个分支的动物之间,已发现或十分可能存在遗传差异.近交系由于残余杂合性和突变而导致部分遗传组成的改变形成。支系：近交系或亚系内部，由于非常可能存在环境,母方或细胞的差异。原因:1.引种到另一实验室2.技术处理:受精卵或胚胎移植(e),人工喂养(h),卵巢移植(o),冷冻保存(p),人工代乳(fh),代乳(f),近交系特征：(1)基因位点纯合性、（2）遗传组成同源性、（3）表型一致性、（4）长期遗传稳定性、（5）遗传特征的可分辨性、（６）遗传组成的独特性（个体性）、（７）敏感性、（８）近交衰退,（９）分布广泛性、（１０）背景资料和数据的完整性.重组近交系：由两个无血缘关系的近交系杂交后，得到F2代，分组分别经20代以上的兄妹交配而育成的近交系系列动物。同源突变近交系：指两个近交系，除了一个指明位点等位基因不同外，其它遗传基因全部相同的品系。更注重突变基因的研究同源导入近交系：通过杂交—互交或回交等方式将一个基因导入到近交系中，由此形成的一个新的近交系与原来的近交系只是在一个很小的染色体片段上的基因不同，简称同源导入系或同类系。同源分离近交系：在培育近交系的同时，采取一定的交配方法，迫使个别基因位点上的基因处于杂合状态。支系的命名1技术处理:名称加小写字母奶母代乳f,人工喂养h,卵巢移植o受精卵或胚胎移植e,人工代乳fh冷冻保存p，C3HfC57BLC57BL/6peCBA/N2.去除或植入病毒:植入+,去除-C3H/He-MTV+,C3H/He-MTV-3.引种到另一单位:加斜线或双斜线C57BL/6J/LacC57BL/6J//Lac实际中直接写缩写符号:C57BL/6JLac十一：封闭群:是以非近亲交配方式进行繁殖生产的一个种群，在不从外部引入新的血缘条件下，至少连续繁殖4代以上。每代近交系数F增加量少于1%，即:ΔF<1%十二：杂交一代动物:由二个不同近交杂交所生的第一代动物。遗传均一,表型相同十三：据微生物净化程度分：普通动物：是在微生物学控制上要求最低的动物，要求不携带人兽共患病和动物烈性传染病的病原。饲养于开放系统。清洁级动物：除普通动物应排除的病原外，不携带对动物危害大和对科学研究干扰大的病原，饲养于屏障系统或IVC系统中。无特殊病原体动物：指动物体内无特定的微生物和寄生虫存在，但带有非特定的微生物和寄生虫的动物。除了普通动物和清洁级动物应排除的病原外，不携带主要潜在感染或条件致病和对科研实验干扰大的病原。来源于无菌动物.，饲养在屏障系统或IVC系统中.无菌动物：用现有的检测技术在动物体内外的任何部位均检不出任何活的微生物和寄生虫的动物。无菌动物必须是生来就是无菌的。饲养于隔离系统。悉生动物:指在无菌动物体内植入已知微生物的动物。又称已知菌动物或已知菌丛动物。饲养于隔离系统。分为单菌，双菌，三菌，多菌动物。十四：鼠痘病毒危害性：1脱脚病:四肢,尾和头部肿胀,溃烂,坏死,甚至脚趾脱落.2小鼠的烈性传染病.致病性强,全身感染,爆发流行,传播快,病死率高.3急性:突然死亡,使实验中断4慢性:全身症状,实验结果混乱.污染环境,广泛传播.5隐性:无临床症状,但实验因素:实验性结核,X射线,化学毒素,组织移植,肿瘤,运输等可激活病毒而流行6大剂量内毒素或脾切除,可改变吞噬细胞的反应,降低吞噬细胞功能,增加易感性.十五：仙台病毒危害性：1免疫干扰:严重影响体液和细胞介导的免疫应答.2致瘤作用干扰:感染后遗留的组织学改变酷似浸润性肺癌,易误诊.抑制氨基甲酸乙酯诱发肺腺瘤.3感染DBA/2小鼠,白血病病毒不能在脾内复制,不发生白血病.4生殖影响:对着床前受精卵及早期胚胎具有亲噬性,使胚胎死亡.5妊辰:4~5天:胚胎吸收.11~12天:妊期延长,产后24小时内乳鼠死亡率升高.6全身症状:类似感冒,打“呼噜”被毛粗乱,发育迟缓,体重下降,易继发支原体感染.主要引起呼吸道疾病,肺炎,还可引发全身感染.传播快,流行广,呈急性肺炎变化.仔鼠,幼鼠发病.成年鼠呈隐性感染.十六：细小病毒，即兔出血症病毒(兔瘟)危害性：1急性发病,爆发流行2侵袭青壮年兔群3脏器广泛出血十七：(1)沙门氏菌危害性：1.爆发型:4~5天内大批死亡2.亚急性型:行为呆滞,腹泻7~10天死亡3.慢性型:下痢为主要症状,哺乳期小鼠发病率高达70%BALB/c敏感CDF1不敏感十八：寄生虫对实验的干扰：1.掠夺宿主营养2.对动物骚扰3.对机体产生机械性损伤4.产生毒性5.影响生理,生化和免疫系统十九：动物模型的概念和意义，分类，影响因素：概念：医学研究中建立的具有人类疾病模拟表现的动物实验对象和相关材料。意义：1.避免人实验造成的危害。2.可研究平时不易见到的疾病.3.可提供发病率低,潜伏期和病程长的疾病动物模型.4.克服复杂因素，增加方法学上的可比性。5.样品收集方便，结果易于分析。6.有利于更全面地认识疾病的本质。分类：1.按产生原因分：(1)诱发性动物模型(2)自发性动物模型(3)抗疾病动物模型(4)生物医学动物模型2.按模型种类分：(1)整体动物(2)离体器官和组织(3)细胞株(4)教学模型3.按系统范围分：(1)疾病的基本病理过程动物模型(2)各系统疾病动物模型４.按中医药体系分类：阴虚、阳虚，气虚、血虚，脾虚、肾虚、厥脱症影响动物模型的因素：1.致模因素2.动物:种类,品系,年龄和体重,性别,生理状况和健康因素3.实验技术:季节,昼夜变化,麻醉深度,手术技巧,实验给药,对照组4.环境和营养二十：内分泌及代谢:KK小鼠：已发现糖尿病小鼠:一：ob/ob,db/db,杂交wellesley,新西兰obese,及KK小鼠.都可发生肥胖,高胰岛素血症,高血糖症和胰岛肥大症.二：病理:正常饲养,很少出现尿糖或高血糖症.耐糖试验:糖尿性状(非肥胖型)三：喂高能饲料,或给予金硫葡萄糖,或导入肥胖基因,则出现肥胖症.常伴有高胰岛素血症的高血糖症(肥胖KK小鼠).糖尿病变化与成年人相似。四：肾小球系膜细胞増生,基底膜肥厚五：代谢:肝,脂肪组织的脂肪合成亢进--肥胖。六：脂肪组织和肌肉组织中参与糖代谢的胰岛素感受性降低---高血糖.七：脂肪調节受到破坏.八：应用:糖尿病性变化受多基因控制,作为模型动物使用.高血压:SHR症状:有许多亚系,生育,寿命均正常.体重增长率较WKY差,老龄前外观无差异.寿命:♂430d,♀550d血压早期即有差异,并引发各种临床症状.SHR:2月前:150mmHg以上,4~5月180~210WKY:成年♂135mmHg,♀123mmH发病时,末梢动脉变狭窄,弯曲,心脏渐渐肥大.以心重与体重比率增加为显著(以左心房为显著).肼酞嗪或甲基多巴加入饮水,可预防高血压发生.应用:病态与人原发性高血压极为相似.发病率近100%.常用于发病机制,预防,治疗和诊断等.与其它特性大鼠杂交:原发性糖尿病BBWistar大鼠：类似年轻型糖尿病.多基因遗传,起病突然,58~123日龄发病.尸检:慢性非胰岛素依赖性:应用:研究发病的遗传,环境因素,β-C损害免疫学因素.病态,治疗等.二十一：近交系自发性肿瘤常用类型1.C57BL/6J:黑色.低发乳腺癌,致癌剂难以致癌.对放射性耐受性强,眼畸形,口唇裂(考的松诱导)发生率为20%.淋巴细胞性白血病6%.新生仔中♀16.8%,♂3%为小眼或无眼症.0.6%后肢多趾症.对脱脚病有一定抗性,对百日咳易染因子敏感.对结核杆菌有耐受性,嗜酒.应用:肿瘤学,生理,免疫,遗传工程,为突变基因提供遗传背景.2.A和A/He:白化.乳腺癌:中等:雄性6%.雌性30~50%.(32%,非生育26%).肺肿瘤发病率高.对麻疹病毒高度敏感.老年有肾病.3.BALB/c:乳腺癌发病率低,MTV诱发增高.肺癌:雌性26%,雄性29%.35%动物20~21月龄有自发性单克隆B细胞肿瘤.常有动脉硬化症,血压较高,老年雄性多有心脏损害.对辐射极敏感,对弓形虫易感.应用:肿瘤,免疫,生理,核医学.单克隆抗体研究,杂交瘤生产.4.C3H/He:野生色.乳腺癌发病率97%,防护条件下为7%.对致肝癌物质感受性强.14月龄雄性肝癌自发率85%.对狂犬病毒敏感,对炭疽杆菌有抵抗力.用于免疫,肿瘤,生理和核医学的研究.5.DBA:浅灰色.一年以上雄性乳腺癌约75%.DBA/2:雌性31%,经产66%.育成雄30%白血病:雌性6%,雄性8%.听源性癫痫:35日100%,55日后5%.对结核杆菌,鼠伤寒沙门杆菌敏感.对疟原虫有一定抗性.老年雄鼠有钙沉着.产仔数少,不易哺育.主要用于肿瘤学,微生物学研究.6.615:深褐色.肿瘤自发率10~20%,雌性为乳腺癌,雄性为肺癌.对津638白血病病毒敏感.7.129/Sv-ter/+亚系:灰野生色.睾丸畸胎瘤自发率为30%,多发生怀孕第12~13天.常用于遗传工程小鼠的研究.二十二：各系统常见的动物模型：1.神经系统:大鼠脑卒中,兔脑积水,大鼠囊状动脉瘤2.心血管:动脉粥样硬化,心肌缺血和心肌梗塞,高血压3.呼吸:肺动脉高压,慢性支气管炎,肺炎4.消化:胰腺炎,豚鼠溃疡性结肠炎,肝5.泌尿:肾小球肾炎6.内分泌与代谢:糖尿病二十三：免疫缺陷概念：由于先天性遗传突变或用人工方法造成一种或多种免疫系统组成成分缺陷的动物。二十四：(一).裸小鼠:先天性无胸腺,无毛；隐性突变基因在11号染色体