基因工程复习

基因工程复习一、获取目的基因从基因文库中获取反转录法方法人工合成化学合成法PCR技术扩增目的基因

问题1：人工合成的目的基因和从基因文库中获取的基因有何区别？问题2：在获取目的基因过程中，使用到哪个工具酶？人工合成的目的基因没有非编码区和内含子限制性内切酶几种限制性内切酶作用部位：黏性末端特点：作用部位：平末端特点：磷酸二酯键旋转对称、碱基互补配对磷酸二酯键旋转对称二、构建基因表达载体（核心）1、基因表达载体（重组DNA分子）组成：启动子、目的基因、终止子、标记基因。2、如何构建基因表达载体:酶切——同一种限制酶连接——DNA连接酶3、运载体种类：质粒、动植物病毒、λ噬菌体衍生物。4、运载体具备的条件：①在宿主细胞保留并大量复制②有多个限制酶切点③有标记基因，便于筛选。5、一般质粒都是被人工改造。三、导入受体细胞生物种类方法受体细胞简单过程植物细胞动物细胞微生物细胞农杆菌转化法基因枪法花粉管通道法显微注射法Ca2+处理法体细胞体细胞体细胞受精卵感受态细胞目的基因插入Ti质粒的T-DNA转入农杆菌导入植物细胞稳定和表达目的基因表达载体提纯取卵显微注射受精卵新性状动物Ca2+处理受体细胞感受态细胞表达载体与感受态细胞混合吸收DNA四、目的基因的检测和鉴定转录翻译复制复制逆转录

DNARNA蛋白质中心法则思考一：受体细胞的DNA中是否已结合目的基因？1、目的基因的检测——分子水平目的方法结果受体细胞的DNA中是否已结合目的基因？DNA分子杂交技术出现杂交带思考二：目的基因是否转录出mRNA?目的方法结果分子杂交技术出现杂交带目的基因是否转录出mRNA？思考三：目的基因是否翻译成蛋白质？目的方法结果目的基因是否翻译成蛋白质？抗原—抗体杂交出现杂交带2、鉴定——个体水平基因工工程概概念基因工工程：：在生物物体外外，通通过对对DNA分分子进进行人人工““剪切切”和和“拼拼接””，对对生物物的基基因进进行改改造和和重新新组合合，然然后导导入受受体细细胞进进行无无性繁繁殖，，使重重组基基因在在受体体细胞胞内表表达，，产生生出所所需要要的基基因产产物。。基因工程的别名基因拼接技术或DNA重组技术操作环境生物体外操作对象基因操作水平DNA分子水平基本过程获取→连接→导入→检测鉴定结果人类需要的基因产物（11天津津理综综卷））39、、某致致病基基因h位于于X染染色体体上，，该基基因和和正常常基因因H中中的某某一特特定序序列BclI酶酶切后后，可可产生生大小小不同同的片片段（（如图图1，，bp表示示碱基基对）），据据此可可进行行基因因诊断断。图图2为为某家家庭病病的遗遗传系系谱。。下列叙述述错误的的是Ah基基因特定定序列中中Bcl1酶酶切位点点的消失失是碱基基序列改改变的结结果BII-1的的基因诊诊断中只只出现142bp片段段，其致致病基因因来自母母亲CII-2的的基因诊诊断中出出现142bp，99bp和和43bp三个个片段，，其基因因型为XHXhDII-3的的丈夫表表现型正正常，其其儿子的的基因诊诊断中出出现142bp片段的的概率为为1/225、现现有一长长度为1000碱基对对(by）的DNA分分子，用用限制性性核酸内内切酶EcoR1酶酶切后得得到的DNA分分子仍是是1000by，用用Kpn1单独独酶切得得到400by和600by两两种长度度的DNA分子子，用EcoRI、Kpnl同时酶酶切后得得到200by和600by两两种长度度的DNA分子子。该DNA分分子的酶酶切图谱谱正确的的是（）26、（（8分））聚合酶酶链式反反应(PCR技技术)是是在实验验室中以以少量样样品DNA制备备大量DNA的的生化技技术，反反应系统统中包括括微量样样品DNA、DNA聚聚合酶、、引物、、足量的的4种脱脱氧核苷苷酸及ATP等等。反应应中新合合成的DNA又又可以作作为下一一轮反应应的模板板，故DNA数数以指数数方式扩扩增，其其简要过过程如右右图所示示。微量DNA样品DNA互补链分离开为单链以单链为模板合成子代DNA循环重复（1）某某个DNA样品品有1000个个脱氧核核苷酸，，已知它它的一条条单链上上碱基A:G:T:C=1:2:3:4，，则经过过PCR仪五次次循环后后，将产产生个DNA分子，，其中需需要提供供胸腺嘧嘧啶脱氧氧核苷酸酸的数量量至少是是个。（2）分分别以不不同生物物的DNA样品品为模板板合成的的各个新新DNA之间存存在差异异，这些些差异是是。（3）请请指出PCR技技术与转转录过程程的三个个不同之之处：①。②。③。27、（14分））在培育转基基因植物的研研究中，卡那那霉素抗性基基因（kan）常作为标标记基因，只只有含卡那霉霉素抗性基因因的细胞才能能在卡那霉素素培养基上生生长。下图为为获得抗虫棉棉的技术流程程。

请据图图回答：（1）A过程程需要的酶有有______________________________。（2）B过程程及其结果体体现了质粒作作为运载体必必须具备的两两个条件是________________________________。侵染抗虫基因含kan质粒重组质粒土壤农杆菌含重组质粒土壤农杆菌A构建导入B培养选择转基因抗虫植株再生植株愈伤组织离体棉花叶片组织C诱导选择分化D检测（3）C过程程的培养基除除含有必要营营养物质、琼琼脂和激素外外，还必须加加入________________。（4）如果利利用DNA分分子杂交原理理对再生植株株进行检测，，D过程应该该用________________________________________________________________作为探探针。（5）科学家家发现转基因因植株的卡那那霉素抗性基基因的传递符符合孟德尔遗遗传规律。①将转基因植植株与________________________杂交，其其后代中抗卡卡那霉素型与与卡那霉素敏敏感型的数量量比为1：1。②若该转基因因植株自交，，则其后代中中抗卡那霉素素型与卡那霉霉素敏感型的的数量比为________。③若将该转基基因植株的花花药在卡那霉霉素培养基上上作离体培养养，则获得的的再生植株群群体中抗卡那那霉素型植株株占____________%。。退出谢谢，再见！！DNA连接酶酶的作用过程程课后延伸：请你回家搜集集有关生活中中与基因工程程相关的现代代科学技术内内容，并利用用今天所复习习的内容将其其进行分析。。课堂反馈2：：（2010天天津）下图是是培育表达人人乳铁蛋白的的乳腺生物反反应器的技术术路线。图中中tetR表表示四环素抗抗性基因，ampR表示示氨苄青霉素素抗性基因，，BamHI、HindIII、SmaI直线线所示为三种种限制酶的酶酶切位点。课堂堂反反馈馈1：：（2010全全国国））下下列列叙叙述述符符合合基基因因工工程程概概念念的的是是（（））A．．B淋淋巴巴细细胞胞与与肿肿瘤瘤细细胞胞融融合合，，杂杂交交瘤瘤细细胞胞中中含含有有B淋淋巴巴细细胞胞中中的的抗抗体体基基因因B．将将人的的干扰扰素基基因重重组到到质粒粒后导导入大大肠杆杆菌，，获得得能产产生人人干扰扰素的的菌株株C．用用紫外外线照照射青青霉菌菌，使使其DNA发生生改变变，通通过筛筛选获获得青青霉素素高产产菌株株D．自自然界界中天天然存存在的的噬菌菌体自自行感感染细细菌后后其DNA整合合到细细菌DNA上B9、静夜四四无邻，，荒居旧旧业贫。。。12月-2212月-22Friday,December23,202210、雨中黄叶树树，灯下白头头人。。05:56:2405:56:2405:5612/23/20225:56:24AM11、以我独沈久久，愧君相见见频。。12月-2205:56:2405:56Dec-2223-Dec-2212、故人江海别别，几度隔山山川。。05:56:2405:56:2405:56Friday,December23,202213、乍见翻疑疑梦，相悲悲各问年。。。12月-2212月-2205:56:2405:56:24December23,202214、他乡生生白发，，旧国见见青山。。。23十十二月20225:56:24上午午05:56:2412月-2215、比不了得就就不比，得不不到的就不要要。。。十二月225:56上上午12月-2205:56December23,202216、行动出成果果，工作出财财富。。2022/12/235:56:2405:56:2423December202217、做前，能够够环视四周；；做时，你只只能或者最好好沿着以脚为为起点的射线线向前。。5:56:24上午5:56上上午05:56:2412月-229、没没有有失失败败，，只只有有暂暂时时停停止止成成功功！！。。12月月-2212月月-22Friday,December23,202210、很很多多事事情情努努力力了了未未必必有有结结果果，，但但是是不不努努力力却却什什么么改改变变也也没没有有。。。。05:56:2405:56:2405:5612/23/20225:56:24AM11、成成功功就就是是日日复复一一日日那那一一点点点点小小小小努努力力的的积积累累。。。。12月月-2205:56:2405:56Dec-2223-Dec-2212、世世间间成成事事，，不不求求其其绝绝对对圆圆满满，，留留一一份份不不足足，，可可得得无无限限完完美美。。。。05:56:2405:56:2405:56Friday,December23,202213、不不知知香香积积寺寺，，数数里里入入云云峰峰。。。。12月月-2212月月-2205:56:2405:56:24December23,202214、意志坚强的的人能把世界界放在手中像像泥块一样任任意揉捏。23十二月月20225:56:24上午05:56:2412月-2215、楚塞三湘湘接，荆门门九派通。。。。十二月225:56上上午12月-2205:56December23,202216、少年十五五二十时，，步行夺得得胡马骑。。。2022/12/235:56:2405:56:2423December202217、空山新雨后后，天气晚来来秋。。5:56:24上午5:56上上午05:56:2412月-229、杨柳散和风风，青山澹吾吾虑。。12月-2212月-22Friday,December23,202210、阅读一切好好书如同和过过去最杰出的的人谈话。05:56:2405:56:2405:5612/23/20225:56:24AM11、越是是没有有本领领的就就越加加自命命不凡凡。12月月-2205:56:2405:56Dec-2223-Dec-2212、越是无能的的人，越喜欢欢挑剔别人的的错儿。05:56